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ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力
被引量：
3
1
作者
何建萍
李晓娟
+4 位作者
吕梦欣
王珏
唐健
罗胜军
钱源
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期1720-1725,共6页
目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实...
目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过WB实验检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白:Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果ALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著(P<0.05);shALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著(P<0.05)。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。
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关键词
ALKBH同源蛋白5
子痫前期
上皮-间质转化
细胞迁移
细胞侵袭
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职称材料
HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立
被引量：
3
2
作者
李晓娟
王珏
+2 位作者
何建萍
吕梦欣
钱源
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2021年第5期683-687,共5页
目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过...
目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。
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关键词
HOTAIR
慢病毒载体
HTR-8/Svneo
子痫前期
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职称材料
题名
ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力
被引量：
3
1
作者
何建萍
李晓娟
吕梦欣
王珏
唐健
罗胜军
钱源
机构
昆明
市妇幼保健院
医学
遗传与
产前
诊断
科
昆明
医科
大学
第一
附属
医院
产
科
云南省
第一
人民
医院
产
科
昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室
云南省
检验
医学
重点实验室
云南省实验
诊断
研究所
云南省内设研究机构
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期1720-1725,共6页
基金
国家自然科学地区基金(81760273,81360103)
昆明市科技计划项目(2019-1-S-25318000001501)
+3 种基金
云南省科技计划面上项目(2017FB107)
云南省“万人计划”青年拔尖人才专项
云南省卫生科技计划项目(2018NS0112)
昆明医科大学研究生创新基金项目(2019S119)。
文摘
目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过WB实验检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白:Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果ALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著(P<0.05);shALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著(P<0.05)。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。
关键词
ALKBH同源蛋白5
子痫前期
上皮-间质转化
细胞迁移
细胞侵袭
Keywords
ALKBH5
preeclampsia
epithelial-mesenchymal transition
migration
invasion
分类号
R714.244 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立
被引量：
3
2
作者
李晓娟
王珏
何建萍
吕梦欣
钱源
机构
昆明
医科
大学
第一
附属
医院
产
科
云南省
第一
人民
医院
产
科
昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室
昆明
市妇幼保健院
医学
遗传与
产前
诊断
科
云南省
检验
医学
重点实验室
云南省实验
诊断
研究所
云南省内设研究机构
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2021年第5期683-687,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81760273、81360103)
云南省科技计划项目(编号:2017FB107)
+2 种基金
云南省“万人计划”青年拔尖人才专项
云南省卫生科技计划项目(编号:2018NS0112)
昆明医科大学研究生创新基金项目(编号:2019S119)。
文摘
目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。
关键词
HOTAIR
慢病毒载体
HTR-8/Svneo
子痫前期
Keywords
HOTAIR
lentiviral vector
HTR-8/Svneo
preeclampsia
分类号
R714.24 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力
何建萍
李晓娟
吕梦欣
王珏
唐健
罗胜军
钱源
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
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职称材料
2
HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立
李晓娟
王珏
何建萍
吕梦欣
钱源
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2021
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