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肿瘤相关抗原在不同病理分级膀胱尿路上皮癌中的表达
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作者 颜汝平 王剑松 +4 位作者 李翀 左毅刚 柯昌兴 詹辉 王伟 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期978-980,共3页
目的利用免疫组化法检测组织芯片中不同病理分级人膀胱尿路上皮癌组织中肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)的表达。方法含不同病理分级的人膀胱尿路上皮癌组织芯片两张,免疫组化(Elivision)法检测膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表... 目的利用免疫组化法检测组织芯片中不同病理分级人膀胱尿路上皮癌组织中肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)的表达。方法含不同病理分级的人膀胱尿路上皮癌组织芯片两张,免疫组化(Elivision)法检测膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达,并对不同病理分级膀胱尿路上皮癌组织中TAA表达程度、阳性表达率进行比较。结果膀胱尿路上皮癌TAA的阳性染色主要位于细胞膜,116块人膀胱尿路上皮癌组织中TAA的总阳性表达率为56.9%(66/116)。不同病理分级的膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);TAA的阳性表达率分别是:G1 50.0%(7/14)、G2 53.6%(22/41),G3 60.7%(37/61),不同病理分级TAA阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论膀胱尿路上皮癌组织中TAA的表达程度及阳性表达率与肿瘤的病理分级无关,组织芯片技术检测膀胱癌TAA的表达高效、快捷。 展开更多
关键词 膀胱癌 组织芯片 免疫组织化学
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膀胱癌EJ细胞的CD44异常糖基化及其单抗KMP1的生物学功能研究 被引量:4
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作者 丁明霞 李翀 +3 位作者 左毅刚 詹辉 范祖森 王剑松 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期759-762,共4页
目的:研究EJ细胞单抗KMPl的结合抗原CD44的变化和KMPl对EJ细胞生物学功能的影响。方法:采用人膀胱癌EJ细胞株免疫BALB/c小鼠,获得单抗KMPl,免疫荧光检测KMPl的亲和性、结合部位及效价。流式细胞检测KMPl对膀胱癌细胞的特异性。免疫组化... 目的:研究EJ细胞单抗KMPl的结合抗原CD44的变化和KMPl对EJ细胞生物学功能的影响。方法:采用人膀胱癌EJ细胞株免疫BALB/c小鼠,获得单抗KMPl,免疫荧光检测KMPl的亲和性、结合部位及效价。流式细胞检测KMPl对膀胱癌细胞的特异性。免疫组化检测对膀胱癌组织的特异性。亲和层析分离纯化特异性抗原,检测抗原的氨基酸序列。糖基转化酶抑制剂和过碘酸氧化后分析抗原决定簇的理化性质改变。软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验检测KMPl对EJ细胞株的增殖和迁移功能的影响。结果:获得的单抗KMPl是IgGl,能与EJ、BIU-87、T24膀胱癌细胞和膀胱癌组织特异性结合,而与Lovo、HeLa、K562、HepC2、Jurkat、293、HCV29、人的红细胞和白细胞无结合性,也不能结合正常膀胱黏膜。其结合EJ细胞的抗原是异常糖基化的CD44,糖基转化酶抑制剂BC作用EJ细胞7d,KMPl对EJ细胞结合性降低,过碘酸氧化后Western blot显示KMPl对CD44结合性降低,软琼脂培养克隆形成实验和细胞划痕实验结果示KMPl还能减弱EJ细胞的增殖和迁移功能。结论:膀胱癌的高复发性、易转移可能与出现异常糖基化的CD44高表达具有一定的相关性,KMPl可结合异常糖基化的CD44,并抑制EJ细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 膀胱癌 EJ细胞 单克隆抗体 CD44 糖基化
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改良型TAT-凋亡素体外抗人膀胱肿瘤活性的研究 被引量:4
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作者 王春晖 王剑松 +5 位作者 詹辉 李鸿钧 丁明霞 颜汝平 柯昌兴 徐鸿毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期246-249,254,共5页
目的:探讨改良型TAT-凋亡素(TAT-VP3)融合基因在不同人膀胱癌细胞中的表达及诱导凋亡的效应方法:利用改良型TAT-VP3原核表达载体pGEX-6p-1-TAT-VP3构建真核表达载体PcDNA3-TAT-VP3,经BamH I/Xho I双酶切鉴定和基因测序无误后采用脂质体... 目的:探讨改良型TAT-凋亡素(TAT-VP3)融合基因在不同人膀胱癌细胞中的表达及诱导凋亡的效应方法:利用改良型TAT-VP3原核表达载体pGEX-6p-1-TAT-VP3构建真核表达载体PcDNA3-TAT-VP3,经BamH I/Xho I双酶切鉴定和基因测序无误后采用脂质体介导的基因转染法转染人膀胱癌BIU-87及EJ细胞,利用RT-PCR技术检测改良型TAT-VP3基因在细胞中的表达状况。通过透射电镜扫描观察转染后不同时段肿瘤细胞的超微结构变化,MTT法检测转染重组质粒后对人膀胱癌细胞的增殖活性的影响,流式细胞术TUNAL法检测转染重组质粒24、48、72h后BIU-87及EJ细胞的凋亡率,对实验结果进行统计学分析。结果:成功构建重组质粒PcDNA3-TAT-VP3并经测序无误,转染人膀胱癌细胞后的RT-PCR结果证实改良型TAT-VP3基因在人膀胱癌细胞中获得表达。透射电镜观察到BIU-87及EJ细胞凋亡早期染色质聚集,线粒体固缩,凋亡中晚期核固缩及凋亡小体等超微形态学改变。MTT法检测结果显示转染重组质粒PcDNA3-TAT-VP3后的BIU-87及EJ细胞增殖活性明显下降(P<0.01)。流式细胞术TUNAL法检测显示BIU-87及EJ细胞发生早期凋亡,其凋亡率随时间的推移呈逐渐上升趋势,转染72 h后BIU-87和EJ细胞的凋亡率分别为(30.44±1.47)%、(42.27±2.66)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01) 结论:改良型TAT-VP3基因的表达能早期、高效地诱导不同人膀胱癌细胞发生凋亡,为纯化改良型TAT-VP3融合蛋白以及将其应用于膀胱灌注治疗膀胱转移肿瘤的研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 细胞凋亡 VP3蛋白 膀胱肿瘤
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荷瘤SCID-hu鼠模型及其肿瘤实验研究现状
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作者 周海滨 颜汝平 王剑松 《中国比较医学杂志》 CAS 2009年第10期64-67,共4页
严重联合免疫缺陷鼠(severe combined immune deficiency mice,SCID)具有T、B淋巴细胞联合免疫缺陷等生物学特性,可以将人类有关免疫细胞、免疫组织和器官移植入其体内进行人免疫功能重建-SCID-hu鼠。荷瘤SCID-hu鼠模型为人类肿瘤的发... 严重联合免疫缺陷鼠(severe combined immune deficiency mice,SCID)具有T、B淋巴细胞联合免疫缺陷等生物学特性,可以将人类有关免疫细胞、免疫组织和器官移植入其体内进行人免疫功能重建-SCID-hu鼠。荷瘤SCID-hu鼠模型为人类肿瘤的发病机制、生物治疗等方面的研究提供了良好的实验平台。 展开更多
关键词 严重联合免疫缺陷鼠 小鼠 SCID-hu 模型 动物
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内镜在复杂性肾结石开放手术中的应用分析 被引量:4
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作者 柯昌兴 王剑松 +6 位作者 左毅刚 杨德林 颜汝平 丁明霞 刘靖宇 王伟 詹辉 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期2382-2383,2386,共3页
目的探讨内镜在肾窦内肾盂切开取石术治疗复杂性肾结石的临床应用价值。方法对62例复杂性肾结石患者行肾窦内肾盂切开取石,直视下或用取石钳尽量取出肾盂和各盏结石,用不同的内镜配合碎石机击碎残石。结果肾窦内肾盂切开取石+内镜下碎... 目的探讨内镜在肾窦内肾盂切开取石术治疗复杂性肾结石的临床应用价值。方法对62例复杂性肾结石患者行肾窦内肾盂切开取石,直视下或用取石钳尽量取出肾盂和各盏结石,用不同的内镜配合碎石机击碎残石。结果肾窦内肾盂切开取石+内镜下碎石术均获得成功。手术时间为112~225min,术中出血量为10~100ml。其中59例结石一次性取尽,2例残留小结石自行排除,1例残留结石经体外冲击波碎石术(ESWL)治疗后排出。术中肾盂撕裂2例,术后发热7例,腹胀4例。无大出血、胸膜损伤、肠道损伤、肾蒂损伤、肾周感染、继发性高血压等并发症发生。结论肾窦内肾盂切开取石+内镜下碎石术治疗复杂性肾结石,基本达到了取尽结石同时把肾损伤降到最低的目的 。 展开更多
关键词 肾结石 内镜 碎石术
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凋亡素体外抗膀胱癌效应观察及应用前景分析 被引量:2
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作者 詹辉 王剑松 +8 位作者 王春晖 袁顺辉 左毅刚 柯昌兴 丁明霞 颜汝平 王伟 刘靖宇 徐鸿毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期150-155,共6页
目的:观察凋亡素诱导不同膀胱癌细胞株凋亡的效果并结合文献评价其临床应用前景。方法:采用凋亡素原核表达载体pBV220/Apoptin、真核表达载体PCDNA3、人膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87及EJ、RT—PCR试剂盒以及质粒提取试剂盒。将原核表... 目的:观察凋亡素诱导不同膀胱癌细胞株凋亡的效果并结合文献评价其临床应用前景。方法:采用凋亡素原核表达载体pBV220/Apoptin、真核表达载体PCDNA3、人膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87及EJ、RT—PCR试剂盒以及质粒提取试剂盒。将原核表达载体中的Apoptin基因克隆入真核表达载体PCDNA3,经双酶切及基因测序鉴定无误后。利用脂质体转染法将真核表达质粒PCDNA3/Apoptin转染膀胱癌细胞株BIU-87及EJ。然后于转染后24h利用RT—PCR观察基因表达情况,并分别于转染后24、48、72h利用透射电镜检测肿瘤细胞超微结构变化、MTT法检测细胞存活率、流式细胞仪TUNAL法检测各组细胞的凋亡率,并对结果行统计学分析。结果:成功构建真核表达载体PCDNA3/Apoptin并转染膀胱癌细胞株BIU-87及EJ。转染24h后,通过RT—PCR法可见凋亡素基因在细胞内表达,并于转染后不同时段观察到实验组细胞发生高效凋亡,并随时间的延长而逐步升高,转染后72h,两种细胞株的凋亡率约为65%,而MTT法所测细胞存活率约为25%,与对照组相比,差异有统计学意义(P〈0.05)。同时通过透射电镜可观察到实验组多数细胞出现凋亡的超微结构变化,如核边集、核碎裂及凋亡小体等。结论:凋亡素可诱导不同的膀胱癌细胞株发生高效的凋亡。考虑到其具有与小分子化疗药物不同的作用机制,我们认为凋亡素有可能成为克服膀胱癌细胞多药耐药性的新途径之一。 展开更多
关键词 凋亡素 膀胱肿瘤 移行细胞癌 凋亡 治疗
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凋亡素体外诱导表达Survivin膀胱癌细胞凋亡效果观察
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作者 詹辉 王剑松 +6 位作者 严勇 王春晖 袁顺辉 左毅刚 柯昌兴 丁明霞 颜汝平 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期764-767,共4页
目的:观察凋亡素对表达Survivin膀胱癌细胞株的作用效果,并结合相应机制探讨其临床意义。方法:利用免疫组织化学法检测膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin的表达水平,并计算平均每高倍镜视野中阳性细胞比率。将肿瘤细胞分为单纯细胞组、转染... 目的:观察凋亡素对表达Survivin膀胱癌细胞株的作用效果,并结合相应机制探讨其临床意义。方法:利用免疫组织化学法检测膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin的表达水平,并计算平均每高倍镜视野中阳性细胞比率。将肿瘤细胞分为单纯细胞组、转染空质粒pCDNA3组及转染pCDNA3/Apoptin组,利用脂质体转染法将真核表达载体pCDNA3/Apoptin及pCDNA3空质粒转染入膀胱癌细胞中,并于转染后24h通过RT-PCR法检测细胞中Apoptin的表达情况。分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,并利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率。结果:利用免疫组织化学法检测发现膀胱癌细胞株BIU-87中Survivin呈高表达状态,平均每个高倍镜视野中阳性细胞比例约70%,并有较多细胞呈现高表达状态。转染后24h通过RT-PCR法可见Apoptin在膀胱癌细胞中表达。分别于转染后24、48、72h利用MTT法检测各组细胞存活率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞存活率均明显低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05);利用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率,发现转染pCDNA3/Apoptin组肿瘤细胞凋亡率均明显高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:凋亡素可在体外诱导高表达Survivin的膀胱癌细胞株BIU-87高效凋亡,结合相关机制表明凋亡素可在一定程度上克服Survivin的抗凋亡作用,因此有可能成为Survivin拮抗的抗肿瘤药物的协同用药选择。 展开更多
关键词 凋亡素 SURVIVIN 凋亡 膀胱肿瘤 移行细胞癌
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