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人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定
被引量：
4
1
作者
别俊
孙茂盛
+2 位作者
孙强明
郑建平
孙雯佳
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004年第8期913-916,共4页
目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coliBl21(Gold)中,诱导表达survivin蛋白。通过DEAESepharoseFastFlow离子交换柱和Se...
目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coliBl21(Gold)中,诱导表达survivin蛋白。通过DEAESepharoseFastFlow离子交换柱和SephacrylS-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Westernblotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coliBl21(Gold)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上。Westernblotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具。
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关键词
surivivin
克隆
基因表达
纯化
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职称材料
靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响
被引量：
1
2
作者
蒋鸿超
孙强明
+3 位作者
赵丹
孙茂盛
吕琳
李鸿钧
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期1806-1811,共6页
目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT...
目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P<0.01)和(35.29±2.02)%(P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。
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关键词
SIRNA
HELA细胞株
SURVIVIN基因
质粒
表达
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职称材料
实验猴主要细菌性感染疾病的病理特点分析
被引量：
2
3
作者
赵玺龙
李锋
+5 位作者
赵万秋
王力
宋蜀伶
戴芳
杨丽琳
杨举伦
《中国比较医学杂志》
CAS
2010年第2期75-77,I0004,共4页
目的通过对实验猴细菌性感染疾病脏器病理改变的观察和分析,完善实验猴病理检测资料,为实验动物病理检测标准的制定提供依据。方法选取86例实验猴按5种必检细菌性感染疾病(沙门菌病;志贺菌病;结核杆菌病;小肠结肠炎耶尔森菌病;空肠弯曲...
目的通过对实验猴细菌性感染疾病脏器病理改变的观察和分析,完善实验猴病理检测资料,为实验动物病理检测标准的制定提供依据。方法选取86例实验猴按5种必检细菌性感染疾病(沙门菌病;志贺菌病;结核杆菌病;小肠结肠炎耶尔森菌病;空肠弯曲菌病)病原种类分组,对脏器标本进行病理剖检,HE染色观察记录病变,建立实验猴必检细菌性疾病病理检测资料。结果病理检测结果显示:沙门菌病表现为伤寒肉芽肿,结核杆菌病表现为结核肉芽肿,小肠结肠炎耶尔森菌病表现为纵行溃疡、急性炎及化脓性肉芽肿;志贺菌病、空肠弯曲菌病表现为急性炎和表浅溃疡。结论感染5种必检细菌的实验猴分别表现出不同的病理变化,病理检测对疾病的分析诊断有重要价值,检测结果补充了实验猴细菌性疾病病理检测资料,为制定实验动物病理检测指南提供了相关依据。
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关键词
实验猴
病理检测
细菌性感染疾病
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职称材料
题名
人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定
被引量：
4
1
作者
别俊
孙茂盛
孙强明
郑建平
孙雯佳
机构
昆明医学院研究生部
中国
医学
科
学院
中国协和医科大学
医学
生物学
研究
所分子生物室
昆明
市延安医院
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004年第8期913-916,共4页
文摘
目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coliBl21(Gold)中,诱导表达survivin蛋白。通过DEAESepharoseFastFlow离子交换柱和SephacrylS-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Westernblotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coliBl21(Gold)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上。Westernblotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具。
关键词
surivivin
克隆
基因表达
纯化
Keywords
survivin
cloning
gene expression
purification
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响
被引量：
1
2
作者
蒋鸿超
孙强明
赵丹
孙茂盛
吕琳
李鸿钧
机构
中国
医学
科
学院
/中国协和医科大学
医学
生物学
研究
所分子生物室
昆明医学院研究生部
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期1806-1811,共6页
文摘
目的应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡。方法构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P<0.01)和(35.29±2.02)%(P<0.01)。结论重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础。
关键词
SIRNA
HELA细胞株
SURVIVIN基因
质粒
表达
Keywords
small interfering RNA
Hela cell line
survivin gene
plasmids
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
实验猴主要细菌性感染疾病的病理特点分析
被引量：
2
3
作者
赵玺龙
李锋
赵万秋
王力
宋蜀伶
戴芳
杨丽琳
杨举伦
机构
解放军
昆明
总医院病理科实验动物病理检测中心
昆明医学院研究生部
云南省灵长类实验动物有限公司
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2010年第2期75-77,I0004,共4页
基金
云南省科技基础条件平台建设项目(编号2005PT05)
文摘
目的通过对实验猴细菌性感染疾病脏器病理改变的观察和分析,完善实验猴病理检测资料,为实验动物病理检测标准的制定提供依据。方法选取86例实验猴按5种必检细菌性感染疾病(沙门菌病;志贺菌病;结核杆菌病;小肠结肠炎耶尔森菌病;空肠弯曲菌病)病原种类分组,对脏器标本进行病理剖检,HE染色观察记录病变,建立实验猴必检细菌性疾病病理检测资料。结果病理检测结果显示:沙门菌病表现为伤寒肉芽肿,结核杆菌病表现为结核肉芽肿,小肠结肠炎耶尔森菌病表现为纵行溃疡、急性炎及化脓性肉芽肿;志贺菌病、空肠弯曲菌病表现为急性炎和表浅溃疡。结论感染5种必检细菌的实验猴分别表现出不同的病理变化,病理检测对疾病的分析诊断有重要价值,检测结果补充了实验猴细菌性疾病病理检测资料,为制定实验动物病理检测指南提供了相关依据。
关键词
实验猴
病理检测
细菌性感染疾病
Keywords
Laboratory monkey
Pathological examination
Bacterial diseases
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定
别俊
孙茂盛
孙强明
郑建平
孙雯佳
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
靶向survivin的siRNA表达载体的构建和表达及对HeLa细胞的影响
蒋鸿超
孙强明
赵丹
孙茂盛
吕琳
李鸿钧
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
实验猴主要细菌性感染疾病的病理特点分析
赵玺龙
李锋
赵万秋
王力
宋蜀伶
戴芳
杨丽琳
杨举伦
《中国比较医学杂志》
CAS
2010
2
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职称材料
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