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缺血后适应对树鼩海马CA1区神经元Akt信号转导调控的机制研究 被引量:11
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作者 汤諹 李树清 +2 位作者 李凡 李飞 张颖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期560-565,共6页
目的:了解缺血后适应(PC)对树鼩脑缺血时海马CA1区神经元磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)下游底物丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt Ser-473/Thr-308)磷酸化(Akt[pS473]/Akt[pT308])的调控,探讨Akt信号转导通路在缺血PC脑保护中的作用机制。方法... 目的:了解缺血后适应(PC)对树鼩脑缺血时海马CA1区神经元磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)下游底物丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt Ser-473/Thr-308)磷酸化(Akt[pS473]/Akt[pT308])的调控,探讨Akt信号转导通路在缺血PC脑保护中的作用机制。方法:以树鼩为实验动物,用光化学诱导法复制局部脑缺血,并于脑缺血后3 h 30 min反复夹闭缺血侧颈总动脉3个循环(5 min 1个循环)以制备后适应模型。在光镜、电镜下观察海马CA1区神经元损伤及其超微结构变化的同时,采用免疫组化法了解脑缺血树鼩海马CA1区神经元Akt[pS473]/Akt[pT308]的分布及定位,并以灰度值检测磷酸化强度。结果:脑缺血可导致树鼩海马损伤及细胞超微结构的明显异常;而缺血PC可使海马CA1区神经元超微结构的异常明显改善。免疫组化结果显示,对照组海马CA1区Akt[pS473]及Akt[pT308]的磷酸化为阴性。缺血PC组与缺血组在不同时点的胞浆、胞膜均出现Akt[pS473],但缺血72h Akt[pS473]减弱(灰度值146.6±2.9)。缺血组Akt[pT308]仅在4 h明显增强(灰度值135.5±2.2),随后则未检测到(灰度值分别为165.3±3.7,163.3±2.5)。而缺血PC组4 h时点Akt[pT308]呈阴性,随后24 h、72 h则持续显著的阳性。结论:缺血PC能明显减轻海马CA1区神经元的缺血性损伤,其保护机制可能与Akt Ser-473和Thr-308 2个位点磷酸化导致PI-3K/Akt信号转导途径的激活有关。 展开更多
关键词 脑缺血 缺血后适应 磷脂酰肌醇-3激酶/Akt 信号转导 树鼩
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缺血后适应对树鼩海马CA1区脑血流及星形胶质细胞活化的影响及可能机制 被引量:19
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作者 李树清 罗海芸 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1090-1095,共6页
目的:研究缺血后适应(PC)对树鼩局部脑缺血海马CA1区脑血流(rCBF)与星形胶质细胞(AS)活化的影响,探讨缺血PC影响AS表达胶质纤维酸蛋白(GFAP)的可能机制。方法:建立树鼩血栓性局部脑缺血及缺血PC模型,通过激光多普勒(LD)血流计测量脑缺血... 目的:研究缺血后适应(PC)对树鼩局部脑缺血海马CA1区脑血流(rCBF)与星形胶质细胞(AS)活化的影响,探讨缺血PC影响AS表达胶质纤维酸蛋白(GFAP)的可能机制。方法:建立树鼩血栓性局部脑缺血及缺血PC模型,通过激光多普勒(LD)血流计测量脑缺血后4h、8h、12h、24h及72h海马CA1区rCBF的改变;用免疫组化法测定脑缺血上述时间海马GFAP的表达,并用图像分析系统测定其平均灰度值。于脑缺血后4h重复3次夹闭缺血侧颈总动脉实施缺血PC,并观察其对海马CA1区rCBF和AS活化以及GFAP表达的影响。结果:树鼩脑缺血后4h海马CA1区GFAP阳性细胞数增多,AS表达GFAP增强,24h可见AS胀亡;72h海马CA1区AS表达GFAP达高峰(120.0±2.1,P<0.01)。脑缺血时海马CA1区rCBF逐渐降低,以24h的改变最显著,为(2.55±0.28)PU,P<0.01;72h时海马CA1区rCBF略有增加,为(9.84±1.22)PU。实施缺血PC后,海马CA1区rCBF逐渐增加,72h最显著,为(18.74±1.60)PU,P<0.01;此时海马GFAP表达进一步增强(111.0±1.3),P<0.01。但AS胀亡的病理改变基本消失。结论:多次短暂的闭塞动物的颈动脉可延长树鼩脑缺血治疗的"时间窗";缺血PC的脑保护机制可能与增加海马rCBF、调控AS活化及改善海马微环境有关。 展开更多
关键词 光化学 脑缺血 缺血后处理 脑局邵血流 星形细胞 树嗣
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CsA对树鼩海马微灌流谷氨酸和钙所致线粒体应激的影响 被引量:3
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作者 张颖 李树清 刘跃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期514-518,共5页
目的:观察环孢菌素A(CsA)对树鼩海马由谷氨酸(Glu)及钙(Ca2+)引起微环境改变所致线粒体应激的影响,并探讨其分子机制。方法:单泵等速微灌流系统行树鼩海马Glu及Ca2+微灌流,24 h后免疫组化法检测海马神经元细胞色素C(Cyt C)蛋白表达;低... 目的:观察环孢菌素A(CsA)对树鼩海马由谷氨酸(Glu)及钙(Ca2+)引起微环境改变所致线粒体应激的影响,并探讨其分子机制。方法:单泵等速微灌流系统行树鼩海马Glu及Ca2+微灌流,24 h后免疫组化法检测海马神经元细胞色素C(Cyt C)蛋白表达;低温差速离心分离海马神经元线粒体和胞质部分,免疫印迹(West-ern blotting)法检测Cyt C在胞内表达空间分布;实时荧光定量PCR技术检测海马caspase-3及caspase-9 mRNA的含量。微灌流Glu和Ca2+溶液后6 h于舌下iv CsA40 mg/kg BW,24 h后观察上述指标的改变。结果:树鼩海马微灌流Glu和Ca2+溶液后24 h,海马神经元Cyt C表达增强,而线粒体Cyt C含量显著下降,同时胞质部分可见CytC;海马组织caspase-3、caspase-9mRNA明显升高;微灌流后6 h静脉注射CsA组,海马神经元Cyt C表达显著减少,而线粒体Cyt C含量则显著增加,胞质部分未见Cyt C;海马组织caspase-3、caspase-9 mRNA降低。结论:海马微环境中Glu与Ca2+的大量堆积,可促进线粒体Cyt C释放,激活caspase级联反应而导致线粒体应激;CsA的神经保护效应可与其抑制线粒体通透性转导孔(MPT)开放,防止Cyt C释放及减少caspase-3和caspase-9的活化有关。 展开更多
关键词 树鼩 海马 谷氨酸 细胞色素C 环孢菌素
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体外血小板活化因子对神经元和星形胶质细胞的作用 被引量:1
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作者 张敬各 李树清 李凡 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1393-1396,共4页
目的:研究血小板活化因子(PAF)对神经元活力及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:分别取BALB/c胎鼠和新生小鼠大脑皮层,纯化培养神经元和星形胶质细胞,设正常对照组和实验组,实验组中分别加入4、8和16μmol/L的PAF并... 目的:研究血小板活化因子(PAF)对神经元活力及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:分别取BALB/c胎鼠和新生小鼠大脑皮层,纯化培养神经元和星形胶质细胞,设正常对照组和实验组,实验组中分别加入4、8和16μmol/L的PAF并分别作用4h、24h和72h,用MTT法和免疫组织化学方法测定神经元活力和星形胶质细胞表达GFAP的平均灰度值。结果:PAF作用后,神经元活力降低;星形胶质细胞数量减少,但存活细胞GFAP表达增加。两者均呈浓度依赖关系。结论:PAF不仅直接作用于神经元,且可通过作用于星形胶质细胞间接影响神经元的存活。 展开更多
关键词 血小板活化因子 细胞培养 神经元 星形细胞 神经胶质原纤维酸性蛋白质
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