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小麦赤霉菌毒素合成机制及检测技术研究进展 被引量:13
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作者 范三红 胡小平 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期348-357,共10页
赤霉病的发生不仅会导致小麦严重减产,其病原菌产生的DON、NIV等毒素也会污染小麦籽粒,对人畜健康造成严重威胁,因此研发小麦赤霉病及赤霉菌毒素的监测与防控技术是小麦生产与消费领域的核心议题。本文从细胞、遗传、生化等角度全面综... 赤霉病的发生不仅会导致小麦严重减产,其病原菌产生的DON、NIV等毒素也会污染小麦籽粒,对人畜健康造成严重威胁,因此研发小麦赤霉病及赤霉菌毒素的监测与防控技术是小麦生产与消费领域的核心议题。本文从细胞、遗传、生化等角度全面综述了小麦赤霉菌毒素合成、转运和调控的分子机制,介绍了目前主流的赤霉菌毒素检测技术,并对各种方法的优缺点进行了系统比较。以上研究进展可启发赤霉菌毒素监测防控新技术的出现,有利于保障粮食供给和食品安全。 展开更多
关键词 小麦赤霉病 脱氧雪腐镰孢菌烯醇 生物合成通路 调控模型 毒素检测技术
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小麦愈伤组织再生相关基因TaTCP-1A的克隆及功能鉴定 被引量:3
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作者 黎飞飞 李波 +2 位作者 乔梦 闵东红 张小红 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期885-891,共7页
为深入探讨小麦再生分子机制、给建立高效的小麦遗传转化受体系统奠定基础,通过电子拼接、RT-PCR及RACE等方法在小麦品种郑麦7698中分离到一个与小麦愈伤组织再生相关的候选基因TaTCP-1A。序列分析表明,该基因的cDNA序列全长为2 163bp,... 为深入探讨小麦再生分子机制、给建立高效的小麦遗传转化受体系统奠定基础,通过电子拼接、RT-PCR及RACE等方法在小麦品种郑麦7698中分离到一个与小麦愈伤组织再生相关的候选基因TaTCP-1A。序列分析表明,该基因的cDNA序列全长为2 163bp,其中包含了一个1 623bp的开放阅读框,编码540个氨基酸。qRT-PCR结果表明,该基因具有组织表达特异性,在愈伤组织中表达量最高;在愈伤组织形成阶段,随诱导时间的延长,其表达量逐渐上升,当诱导11d时表达量达到峰值,随后呈下降趋势;此外,TaTCP-1A基因在胚性愈伤组织中的表达量高于非胚性愈伤组织。基因沉默结果表明,转TaTCP-1A RNAi小麦植株的再生率比对照降低了85.09%,这一结果初步证明该基因对小麦愈伤组织再生有一定的促进作用。 展开更多
关键词 小麦 愈伤组织 TaTCP-1A 遗传转化 RNAI QRT-PCR
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小麦α-双加氧酶cDNA克隆及表达分析
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作者 范三红 陈志刚 +3 位作者 王欣 魏少华 齐亚飞 单丽伟 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期39-45,共7页
以普通小麦陕225为材料,同源克隆小麦脂肪酸α-双加氧酶基因(TaDOX)cDNA,全面分析其基因结构、染色体定位、进化关系及蛋白结构特征,并利用实时定量RT-PCR分析其在PEG和盐胁迫下的表达模式。克隆的cDNA片段长1 854bp,编码617个氨基酸残... 以普通小麦陕225为材料,同源克隆小麦脂肪酸α-双加氧酶基因(TaDOX)cDNA,全面分析其基因结构、染色体定位、进化关系及蛋白结构特征,并利用实时定量RT-PCR分析其在PEG和盐胁迫下的表达模式。克隆的cDNA片段长1 854bp,编码617个氨基酸残基的小麦脂肪酸α-双加氧酶。TaDOX基因组DNA长5 529bp,位于小麦5D染色体长臂,包含10个外显子。小麦、水稻等禾本科植物α-DOX序列高度同源,聚集在同一独立进化枝,而双子叶植物存在2类DOX蛋白,聚集在另外2个分枝中。TaDOX具有脂肪酸α-双加氧酶以α-螺旋为主的空间结构特征,包含血红素结合位点及保守氨基酸His310、Thr315、Tyr378、Arg558组成的活性中心。TaDOX主要在叶和根中表达,花序和种子中也有痕量表达;叶片中TaDOX的表达在PEG和盐胁迫条件均明显下降;根中TaDOX的表达在PEG胁迫条件下无显著变化,但在盐胁迫条件下表达水平急剧升高。 展开更多
关键词 小麦 脂肪酸α-双加氧酶 染色体定位 结构预测 表达模式
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拟南芥表皮细胞发育关键调控因子GL2的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 刘静文 张翔 +1 位作者 齐亚飞 安丽君 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第16期29-32,共4页
拟南芥HD-ZIP家族转录因子GLABRA2(GL2)是控制植物表皮毛、根毛分化和发育的关键调控因子。为了深入研究GL2调控植物表皮细胞分化发育的分子机制,对GL2蛋白进行了生物信息学分析,选择其保守性较低的C端区域(597~776 aa)作为抗原区,构建... 拟南芥HD-ZIP家族转录因子GLABRA2(GL2)是控制植物表皮毛、根毛分化和发育的关键调控因子。为了深入研究GL2调控植物表皮细胞分化发育的分子机制,对GL2蛋白进行了生物信息学分析,选择其保守性较低的C端区域(597~776 aa)作为抗原区,构建了pET28a/GL2原核表达系统。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导获得了融合蛋白rGL2^(597^776),分子量约为19.6 ku。利用纯化得到的融合蛋白免疫家兔,获得了抗GL2的多克隆抗体,并利用抗原亲和纯化了GL2多克隆抗体。GL2多克隆抗体的制备及纯化为进一步通过染色体免疫共沉淀等方法筛选和鉴定其下游作用靶基因奠定了基础。 展开更多
关键词 表皮毛 根毛 GL2转录因子 抗体制备 原核表达
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拟南芥自噬蛋白ATG8e的原核表达及多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 刘希 李远凤 +1 位作者 齐亚飞 郁飞 《江苏农业科学》 2018年第18期47-51,共5页
构建拟南芥自噬相关基因ATG8e的原核表达载体p GEX-4T-1-ATG8e,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到融合蛋白GST-ATG8e。GST-ATG8e蛋白首先用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂亲和纯化,然后用凝血酶酶切去除... 构建拟南芥自噬相关基因ATG8e的原核表达载体p GEX-4T-1-ATG8e,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到融合蛋白GST-ATG8e。GST-ATG8e蛋白首先用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂亲和纯化,然后用凝血酶酶切去除谷胱甘肽S移换酶(glutathione S-transferase,简称GST)标签,最后十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)割胶纯化,用纯化后14 ku的ATG8e蛋白免疫家兔4次得到抗血清,纯化抗血清制备高效ATG8e多克隆抗体。提取野生型拟南芥和ATG8e超表达植株叶片总蛋白做免疫印迹检测,结果在2种基因型植物叶片蛋白样品中均能检测到与ATG8e分子量大小一致的条带,且ATG8e超表达植物中ATG8e积累量明显高于野生型。成功制备了拟南芥ATG8e蛋白多克隆抗体,为研究ATG8e在自噬中的作用奠定了试验基础。 展开更多
关键词 自噬蛋白 ATG8e 蛋白纯化 多克隆抗体制备 免疫印迹
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拟南芥表皮毛突变体abt2基因克隆及功能研究 被引量:1
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作者 王岩 张翔 安丽君 《江苏农业科学》 2018年第15期23-27,共5页
植物表皮毛广泛地分布在陆生植物地上部分,是植物表皮组织的一种特化结构,具有多种重要的生物学功能。通过甲基磺酸乙酯(ethylmethanesulphonate,EMS)诱变获得了1个莲座叶表皮毛分支明显增加的突变体,将其命名为aberrant trichome 2(ab... 植物表皮毛广泛地分布在陆生植物地上部分,是植物表皮组织的一种特化结构,具有多种重要的生物学功能。通过甲基磺酸乙酯(ethylmethanesulphonate,EMS)诱变获得了1个莲座叶表皮毛分支明显增加的突变体,将其命名为aberrant trichome 2(abt2)。遗传分析结果表明,abt2突变体是由细胞核单基因控制的隐性突变。图位克隆和遗传互作结果显示,abt2的表型是由KAKTUS(KAK)基因第+6 881处核苷酸发生突变所导致的,这为进一步研究植物表皮毛的发育调控机制提供新的遗传材料。 展开更多
关键词 拟南芥 表皮毛发育 KAK 核内复制 分支 图位克隆 遗传 调控机制
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拟南芥细胞周期调控因子KRP2的原核表达及蛋白纯化 被引量:3
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作者 杨旭颖 安丽君 《江苏农业科学》 2019年第12期63-65,共3页
表皮毛是由高等植物地上部组织表皮细胞发育而来的一种特殊结构,细胞周期调控因子在植物表皮毛细胞形态的建成过程中发挥着重要作用。利用原核表达系统,构建pET-28a-KRP2-FLAG融合表达载体,在大肠杆菌中对拟南芥细胞周期依赖激酶抑制因... 表皮毛是由高等植物地上部组织表皮细胞发育而来的一种特殊结构,细胞周期调控因子在植物表皮毛细胞形态的建成过程中发挥着重要作用。利用原核表达系统,构建pET-28a-KRP2-FLAG融合表达载体,在大肠杆菌中对拟南芥细胞周期依赖激酶抑制因子KRP2进行了体外表达,并利用蛋白标签FLAG和His对目的蛋白进行纯化。结果表明,在大肠杆菌系统中成功对KRP2-FLAG进行了体外表达并得到了纯化的蛋白,蛋白量为0.87mg。这为进一步研究KRP2在表皮毛细胞发育过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 表皮毛 细胞周期调控因子 KRP2 原核表达 FLAG标签 His标签 蛋白纯化 拟南芥 基因克隆 重组蛋白
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大麦基因组中Helitron转座元件的计算预测
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作者 武泽峰 于慧云 范三红 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1183-1189,共7页
Helitron是一类新发现的DNA转座元件,具有捕获宿主基因片段的能力,因而对植物基因及基因组的进化具有重要意义。为了研究麦类作物中这类元件对基因组的进化所起的作用,本研究采用一种改进的局部组合变量(LCV)方法对大麦基因组中的Helit... Helitron是一类新发现的DNA转座元件,具有捕获宿主基因片段的能力,因而对植物基因及基因组的进化具有重要意义。为了研究麦类作物中这类元件对基因组的进化所起的作用,本研究采用一种改进的局部组合变量(LCV)方法对大麦基因组中的Helitron转座元件进行了预测,共鉴定了16 560个潜在的Helitron元件,去除假阳性后这些元件约占基因组的2.2%。基于序列分歧的计算发现,绝大多数Helitron形成于最近的900万年内,并且在大约250和550万年前各经历了一次剧烈扩张。在大麦基因组中发现了3个自主型Helitron元件,它们包含Rep和Helicase结构域的编码区。基因片段捕获分析发现,66.5%的元件平均捕获了1.9个基因片段,除了反转座和转座相关的基因外,参与发育调控的NAM家族转录因子和参与水分运输和环境胁迫响应的软木脂素合成酶基因也被高频捕获,表明Helitron转座元件不仅影响大麦基因组的结构,同时可以驱动特定功能基因的扩增。 展开更多
关键词 大麦 Helitron 转座子 基因捕获 LCV算法
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