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小鼠β趋化因子受体CCR_5基因的克隆 被引量:3
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作者 郭葆玉 久野耕嗣 +2 位作者 向田直史 原田明久 松岛纲治 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期231-234,共4页
目的:克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法:使用共同引物用RT-PCR方法,从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的Poly(A)+RNA中扩增出一0.5kbcDNA,再根据其序列,设计一特异引物,用Maratho... 目的:克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法:使用共同引物用RT-PCR方法,从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的Poly(A)+RNA中扩增出一0.5kbcDNA,再根据其序列,设计一特异引物,用MarathonPCR法扩增得一2.8kbcDNA,用Southern方法检测分析该基因,Northern方法分析其表达。结果:成功克隆出小鼠CCR5cDNA,其开放阅读框为1065bp,编码355个氨基酸,与人巨噬细胞炎性趋化蛋白5受体(huMIP-5R)同源性为81%,Southern结果显示该基因为单拷贝,Northern结果显示小鼠巨噬细胞、脾脏等有表达。结论:克隆得到小鼠CCR5基因,可作为研究HIV-1感染机制及AIDS治疗有价值的实验模型。 展开更多
关键词 受体 β趋化因子 CCR5基因 基因克隆
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克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物
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作者 郭葆玉 久野耕嗣 +1 位作者 张淑英 松岛纲治 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期101-105,共5页
目的:用同源引物克隆RNA低丰度表达的小鼠β-趋化因子受体。方法:将β-趋化因子受体小鼠MIP-1αR,人MCP-1R和大鼠IL-8R跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后,设计出同源引物,再用RT... 目的:用同源引物克隆RNA低丰度表达的小鼠β-趋化因子受体。方法:将β-趋化因子受体小鼠MIP-1αR,人MCP-1R和大鼠IL-8R跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后,设计出同源引物,再用RT-PCR扩增出DNA片段,经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物,用MarathonPCR扩增出该新基因。结果:成功克隆出小鼠β-趋化因子受体5(CCR5)cDNA全基因序列,序列全长2888bp,开放阅读框1065个核苷酸,编码355个氨基酸。该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员。结论:该克隆策略的引物设计思路较为新颖,能有效捕获超基因家族中的新基因。该克隆方法敏感、高效。 展开更多
关键词 克隆 超基因家族 同源引物 β趋化因子受体
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