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正交法用于真菌微卫星PCR体系优化
被引量：
6
1
作者
杨艳秋
贺丹
+4 位作者
王爽
郭亮
张宇
横山耕治
王丽
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期1108-1111,共4页
目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分...
目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定PCR适宜的退火温度及循环次数。结果:各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25μL),Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150μmol.L-1,引物0.25μmol.L-1为最佳。结论:采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。
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关键词
真菌
微卫星重复
聚合酶链反应
正交法
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职称材料
白色念珠菌总RNA的提取方法
被引量：
5
2
作者
张云峰
焦立新
+4 位作者
贺丹
宋文刚
孙文通
横山耕治
王丽
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期359-361,共3页
目的:探讨提取白色念珠菌总RNA的方法。方法:白色念珠菌标准菌株经SDA培养基培养后,采用改良的异硫氰酸胍一步法提取总RNA。以此为基础,进行反转录PCR反应。结果:得到的RNA经过紫外分光光度计检测浓度达到0.7g.L-1以上;琼脂糖凝胶电泳...
目的:探讨提取白色念珠菌总RNA的方法。方法:白色念珠菌标准菌株经SDA培养基培养后,采用改良的异硫氰酸胍一步法提取总RNA。以此为基础,进行反转录PCR反应。结果:得到的RNA经过紫外分光光度计检测浓度达到0.7g.L-1以上;琼脂糖凝胶电泳证实为完整、均一的总RNA;将此法提取的RNA反转录成cDNA后经过PCR扩增,可获得清晰的目的条带。结论:该方法简便、快速,提取的总RNA可以用于进一步基因克隆、表达。
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关键词
念珠菌
白色
聚合酶链反应
RNA提取
异硫氰酸胍法
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职称材料
题名
正交法用于真菌微卫星PCR体系优化
被引量：
6
1
作者
杨艳秋
贺丹
王爽
郭亮
张宇
横山耕治
王丽
机构
吉林
大学
基础
医学
院病原生物学教研室
日本国立千叶大学真菌医学研究中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期1108-1111,共4页
基金
国家自然科学基金资助课题(30571773)
吉林省科技厅科技发展计划重点项目资助课题(20050205-3)
文摘
目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定PCR适宜的退火温度及循环次数。结果:各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25μL),Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150μmol.L-1,引物0.25μmol.L-1为最佳。结论:采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。
关键词
真菌
微卫星重复
聚合酶链反应
正交法
分类号
R379 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
白色念珠菌总RNA的提取方法
被引量：
5
2
作者
张云峰
焦立新
贺丹
宋文刚
孙文通
横山耕治
王丽
机构
吉林
大学
基础
医学
院病原生物学教研室
日本国立千叶大学真菌医学研究中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期359-361,共3页
基金
国家自然科学基金资助课题(30571773)
文摘
目的:探讨提取白色念珠菌总RNA的方法。方法:白色念珠菌标准菌株经SDA培养基培养后,采用改良的异硫氰酸胍一步法提取总RNA。以此为基础,进行反转录PCR反应。结果:得到的RNA经过紫外分光光度计检测浓度达到0.7g.L-1以上;琼脂糖凝胶电泳证实为完整、均一的总RNA;将此法提取的RNA反转录成cDNA后经过PCR扩增,可获得清晰的目的条带。结论:该方法简便、快速,提取的总RNA可以用于进一步基因克隆、表达。
关键词
念珠菌
白色
聚合酶链反应
RNA提取
异硫氰酸胍法
分类号
R379.4 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
正交法用于真菌微卫星PCR体系优化
杨艳秋
贺丹
王爽
郭亮
张宇
横山耕治
王丽
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
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职称材料
2
白色念珠菌总RNA的提取方法
张云峰
焦立新
贺丹
宋文刚
孙文通
横山耕治
王丽
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
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