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GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位
1
作者
伍贤军
缪璇
+3 位作者
程秀
王妍青
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1024-1027,1175,共5页
目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP...
目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果:重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312bp的条带,与预期结果一致。测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列。在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符。荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合。结论:成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性。
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关键词
GFP-SUMO-3融合蛋白
重组蛋白质类
LNCAP细胞
基因表达
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职称材料
类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
2
作者
杨南扬
缪璇
+3 位作者
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1010-1014,共5页
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白...
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。
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关键词
类泛素化蛋白3
GST融合蛋白
蛋白纯化
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职称材料
题名
GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位
1
作者
伍贤军
缪璇
程秀
王妍青
辻一郎
李晓萌
机构
东北
师范
大学
生命科学
学院
遗传与细胞研究所
日本东北大学医学部公共卫生学院
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1024-1027,1175,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30871301
30700827)
+6 种基金
科技部国际合作项目资助课题(2010DFA31430)
国家高校基本科研业务费专项基金资助课题(09SSXT035
10SSXT147
10JCXK004)
吉林省科技厅科研基金资助课题(20080731
200905116)
国家大学生创新性实验计划项目资助课题(101020031)
文摘
目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-SUMO-3,观察GFP-SUMO-3融合蛋白在人前列腺癌细胞LNCaP中的表达与定位。方法:采用PCR扩增SUMO-3基因全长cDNA编码区序列,克隆入pEGFP-N1真核表达载体。重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3通过酶切和测序鉴定正确后,脂质体法将重组质粒转染至LNCaP中,利用GFP抗体通过Western blotting检测GFP-SUMO-3融合蛋白的表达,通过荧光显微镜观察其在细胞中的表达及分布。结果:重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,得到大小分别为4 700和312bp的条带,与预期结果一致。测序结果显示,GFP在N端,是阅读框正确的SUMO-3的基因序列。在LNCaP细胞中过表达GFP-SUMO-3融合蛋白,Western blotting得到相对分子质量为39 000的蛋白表达条带,与GFP-SUMO-3大小相符。荧光显微镜观察,转染重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3的细胞中呈绿色荧光,主要在细胞核内表达,与DAPI重合。结论:成功构建重组质粒pEGFP-N1-SUMO-3,并表达代绿色荧光蛋白的SUMO-3融合蛋白,鉴定出SUMO-3在LNCaP细胞中的核定位性。
关键词
GFP-SUMO-3融合蛋白
重组蛋白质类
LNCAP细胞
基因表达
Keywords
GFP-SUMO-3 fusion protein
recombinant protein
LNCaP cells
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
2
作者
杨南扬
缪璇
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
机构
东北
师范
大学
生命科学
学院
遗传与细胞研究所
日本东北大学医学部公共卫生学院
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1010-1014,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30871301
30700827)
+6 种基金
科技部国际合作项目资助课题(2010DFA31430)
教育部新世纪优秀人才支持计划资助课题(NCET-10-0316)
高校基本科研业务费专项资金资助课题(09SSXT035
10SSXT147
10JCXK004)
吉林省科技厅科研基金资助课题(20080731
200905116)
文摘
目的:构建pGEX-4T-1/SUMO3重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化出类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白。方法:采用PCR技术利用pcDNA3.1-SUMO3质粒为模板,扩增出SUMO3全长编码序列(312bp),并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,酶切、测序鉴定获得重组质粒。将重组质粒转化E.coli BL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-SUMO3的融合蛋白,并纯化获得相对分子质量为38 000的融合蛋白。结果:通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,确定了重组质粒pGEX-4T-1/SUMO3中包含有312bp的小片段,并测序鉴定该插入片段序列与SUMO3序列一致;在终浓度为0.1mmol·L-1的IPTG诱导时,GST-SUMO3的融合蛋白也被成功地表达和纯化。结论:成功地制备和纯化了类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白,为SUMO3多克隆抗体的制备提供了抗原基础,同时也为SUMO3及SUMO第二类家族功能的深入研究提供了保证。
关键词
类泛素化蛋白3
GST融合蛋白
蛋白纯化
Keywords
SUMO3
GST fusion protein
protein purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位
伍贤军
缪璇
程秀
王妍青
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
类泛素化修饰蛋白SUMO3/GST融合蛋白表达载体的构建及表达
杨南扬
缪璇
伍贤军
刘金美
辻一郎
李晓萌
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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