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重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk的构建及在细胞内的热诱导表达
被引量：
1
1
作者
唐秋莎
陈道桢
张东生
《医学研究生学报》
CAS
2008年第11期1132-1137,共6页
目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆...
目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α,克隆PCR法筛选菌落,测序鉴定后大量抽提质粒。磁性转染法将pHT导入SMMC-7721,加热处理后,用RT-PCR法检测tk基因的整合。结果:获得重组的hsv-tk基因条带。结论:成功构建了pHT质粒,可用于进行靶向性基因治疗研究。
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关键词
真核表达
pHsp70-hsv-tk
构建
热诱导表达
重组真核表达质粒
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职称材料
肝癌组织中线粒体DNA D-Loop区碱基变异与ROS水平
被引量：
13
2
作者
黄学文
赵琪
+1 位作者
陈道桢
张丽珊
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期14-20,共7页
为了探讨ROS水平与突变的关系,对原发性肝癌线粒体DNAD Loop区的突变情况进行研究,同时对原发性肝癌患者组织细胞内ROS进行测定。选择20例原发性肝癌组织及其邻近的癌旁组织,用PCR方法将线粒体DNAD Loop扩增后测序。组织内ROS的水平采...
为了探讨ROS水平与突变的关系,对原发性肝癌线粒体DNAD Loop区的突变情况进行研究,同时对原发性肝癌患者组织细胞内ROS进行测定。选择20例原发性肝癌组织及其邻近的癌旁组织,用PCR方法将线粒体DNAD Loop扩增后测序。组织内ROS的水平采用流式细胞技术测定。结果表明:在20对原发性肝癌组织中存在8对mtDNAD Loop突变,突变率为40%,共发现突变位点53个,包括2个插入,11个缺失,40个点突变,其中T C,C T的转换占75%,4个属于微卫星结构。癌组织突变一般伴有癌旁组织突变,癌组织突变位点高于癌旁组织。发现一例标本的癌组织和癌旁组织均有大片段丢失。原发性肝癌组织内ROS水平明显高于癌旁对照(P<0.01),同时发现在D Loop区发生突变的患者的组织中ROS水平明显高于未发生突变的肝癌组织标本(P<0.01),发生突变的癌旁组织内ROS水平明显高于未发生突变的癌旁组织(P<0.01)。结论:(1)线粒体DNAD Loop区是一个高度多态性和突变性的区域,在原发性肝癌中突变率较高。(2)肝癌患者组织细胞内ROS异常,提示肝癌的线粒体DNA发生的点突变及肝癌的发生可能与ROS升高有关。
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关键词
线粒体DNA
D-LOOP区
原发性肝癌
突变
活性氧类物质
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职称材料
题名
重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk的构建及在细胞内的热诱导表达
被引量：
1
1
作者
唐秋莎
陈道桢
张东生
机构
东南大学基础医学
院
无锡市妇幼保健院中心实验室
出处
《医学研究生学报》
CAS
2008年第11期1132-1137,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:30500601)
国家863计划资助项目(批准号:2007AA03Z356)
无锡市医院管理中心重大技术项目资助(批准号:ZD0604)
文摘
目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α,克隆PCR法筛选菌落,测序鉴定后大量抽提质粒。磁性转染法将pHT导入SMMC-7721,加热处理后,用RT-PCR法检测tk基因的整合。结果:获得重组的hsv-tk基因条带。结论:成功构建了pHT质粒,可用于进行靶向性基因治疗研究。
关键词
真核表达
pHsp70-hsv-tk
构建
热诱导表达
重组真核表达质粒
Keywords
Eukaryotic expression
pHsp70-hsv-tk
Construction
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
肝癌组织中线粒体DNA D-Loop区碱基变异与ROS水平
被引量：
13
2
作者
黄学文
赵琪
陈道桢
张丽珊
机构
上海华东疗养
院
检验科
江苏省
无锡市
第一人民医
院
检验科
江苏省
无锡市妇幼保健院中心实验室
东南大学医学遗传
中心
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期14-20,共7页
文摘
为了探讨ROS水平与突变的关系,对原发性肝癌线粒体DNAD Loop区的突变情况进行研究,同时对原发性肝癌患者组织细胞内ROS进行测定。选择20例原发性肝癌组织及其邻近的癌旁组织,用PCR方法将线粒体DNAD Loop扩增后测序。组织内ROS的水平采用流式细胞技术测定。结果表明:在20对原发性肝癌组织中存在8对mtDNAD Loop突变,突变率为40%,共发现突变位点53个,包括2个插入,11个缺失,40个点突变,其中T C,C T的转换占75%,4个属于微卫星结构。癌组织突变一般伴有癌旁组织突变,癌组织突变位点高于癌旁组织。发现一例标本的癌组织和癌旁组织均有大片段丢失。原发性肝癌组织内ROS水平明显高于癌旁对照(P<0.01),同时发现在D Loop区发生突变的患者的组织中ROS水平明显高于未发生突变的肝癌组织标本(P<0.01),发生突变的癌旁组织内ROS水平明显高于未发生突变的癌旁组织(P<0.01)。结论:(1)线粒体DNAD Loop区是一个高度多态性和突变性的区域,在原发性肝癌中突变率较高。(2)肝癌患者组织细胞内ROS异常,提示肝癌的线粒体DNA发生的点突变及肝癌的发生可能与ROS升高有关。
关键词
线粒体DNA
D-LOOP区
原发性肝癌
突变
活性氧类物质
Keywords
mitochondrial DNA
D-Loop region
primary hepatocellular carcinoma
mutation
reactive oxygen species(ROS)
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk的构建及在细胞内的热诱导表达
唐秋莎
陈道桢
张东生
《医学研究生学报》
CAS
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
肝癌组织中线粒体DNA D-Loop区碱基变异与ROS水平
黄学文
赵琪
陈道桢
张丽珊
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2005
13
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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引证文献
统计分析
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