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基于重组聚合酶扩增技术检测弓形虫方法的建立及应用被引量：1: 1; 作者宋绍征顾乐盈 +3 位作者武颖超孟雅琴于康英黄晓华《中国人兽共患病学报》北大核心 2025年第2期107-112,共6页; 目的旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作... 展开更多; 关键词重组聚合酶扩增弓形虫检测灵敏度特异性; 在线阅读下载PDF 职称材料

白芷在神经病理性疼痛中对MrgprD-TRPA1通路的调控作用分析被引量：3: 2; 作者顾乐盈杨妞妞 +2 位作者于康英孟雅琴宋绍征《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-229,共11页; 目的本研究拟通过建立坐骨神经慢性缩窄损伤(chronic constriction injury,CCI)小鼠模型,分析和探讨白芷在神经病理性疼痛中的镇痛效果及其对MrgprD-TRPA1信号通路的调控作用。方法无菌外科手术结扎缠绕30只小鼠坐骨神经制备CCI小鼠模型... 展开更多; 关键词小鼠白芷神经病理性疼痛 MrgprD TRPA1; 在线阅读下载PDF 职称材料

GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析: 3; 作者宋绍征李丹 +3 位作者何正义张婷成勇周鸣鸣《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1649-1656,共8页; 目的旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况。方法利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质... 展开更多; 关键词双转基因小鼠表达超数排卵显微注射整合; 在线阅读下载PDF 职称材料

同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响被引量：1: 4; 作者李丹周鸣鸣 +2 位作者何正义吴赵曼秋宋绍征《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期182-190,共9页; 【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因(hLF)打靶山羊β-乳球蛋白基因(BLG)座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG-/hLF+基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位... 展开更多; 关键词山羊 CRISPR/Cas9 基因打靶同源臂长度 β-乳球蛋白基因(BLG) 人乳铁蛋白基因(hLF); 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于重组聚合酶扩增技术检测弓形虫方法的建立及应用被引量：1: 1; 作者宋绍征顾乐盈武颖超孟雅琴于康英黄晓华; 机构无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系江阴市领峰宠物医院; 出处《中国人兽共患病学报》北大核心 2025年第2期107-112,共6页; 基金江苏省高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师项目(苏教师函[2021]11号) 江苏省高校自然科学基金(No.19KJB180030,No.23KJD180008) 企业委托横向课题(No.23WURD088)联合资助。; 文摘目的旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作为标准品,建立荧光RPA反应体系。将质粒标准品10倍比稀释成不同浓度作为检测模板,进行灵敏度测试;分别以弓形虫、隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等几种寄生虫基因组DNA作为模板,进行特异性测试;同时应用荧光RPA法和RT-PCR法对52例阳性和40例阴性猫临床样本进行检测,比较分析2种方法检测结果的符合率。结果本实验成功建立了一种以PTRep重组质粒为标准品、ToxD-F/ToxD-R为引物、RepD-P为荧光探针的RPA反应体系,反应恒定温度为39℃,反应时间为30 min,检测灵敏度为1拷贝/μL,与隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等寄生虫无任何明显交叉反应,特异性良好。共检测了92例猫临床粪便样本,荧光RPA检测方法的阳性符合率高于常规RT-PCR法(98.08%vs.82.69%),阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=1.392,P>0.05)。结论本研究成功建立的弓形虫荧光RPA检测方法,具有快速、灵敏、特异、准确等特点,有可能作为弓形虫临床现场快速检测方法。; 关键词重组聚合酶扩增弓形虫检测灵敏度特异性; Keywords recombinant polymerase amplification Toxoplasma gondii detecting sensitivity specificity; 分类号 R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名白芷在神经病理性疼痛中对MrgprD-TRPA1通路的调控作用分析被引量：3: 2; 作者顾乐盈杨妞妞于康英孟雅琴宋绍征; 机构无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系扬州大学医学院; 出处《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-229,共11页; 基金江苏省高校自然科学基金(20KJB360007) 江苏省高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师项目(苏教师函[2021]11号) 国家自然科学基金青年项目(81904212)。; 文摘目的本研究拟通过建立坐骨神经慢性缩窄损伤(chronic constriction injury,CCI)小鼠模型,分析和探讨白芷在神经病理性疼痛中的镇痛效果及其对MrgprD-TRPA1信号通路的调控作用。方法无菌外科手术结扎缠绕30只小鼠坐骨神经制备CCI小鼠模型;VonFrey实验检测白芷对小鼠机械刺激疼痛行为学变化,热辐射实验评估白芷对小鼠热痛觉过敏情况;Western Blot、免疫荧光、RT-PCR检测白芷对小鼠MrgprD和TRPA1蛋白表达水平、DRG阳性神经元数量、MrgprD和TRPA1 mRNA水平的影响;通过对HEK293细胞分别单转染和共转染MrgprD、TRPA1质粒后的钙成像实验,分析荧光信号强度差异性。结果共成功制备了25只CCI小鼠模型,造模率达到83.33%(25/30);白芷灌胃的CCI小鼠机械性阈值和缩足潜伏时间均显著大于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠DRG中MrgprD和TRPA1阳性神经元的数量显著低于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1 mRNA相对表达水平均显著低于对照组(P<0.05);共转染MrgprD和TRPA1质粒的HEK293细胞中荧光强度显著高于单转染和对照组(P<0.05)。结论本研究通过探究白芷在CCI小鼠模型中镇痛的效果,证明了MrgprD-TRPA1是神经病理性疼痛的重要作用靶点,揭示了白芷可以通过调控MrgprD-TRPA1信号转导通路来抑制神经病理性疼痛程度,这为后续开发新型临床镇痛药物及镇痛机制的深入研究奠定了基础。; 关键词小鼠白芷神经病理性疼痛 MrgprD TRPA1; Keywords mouse Angelica dahurica neuropathic pain MrgprD TRPA1; 分类号 Q95-33 [生物学—动物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析: 3; 作者宋绍征李丹何正义张婷成勇周鸣鸣; 机构无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心扬州大学兽医学院//江苏省转基因动物制药工程研究中心; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1649-1656,共8页; 基金江苏省高校自然科学基金(19KJB180030) 江苏省高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师项目(苏教师函[2021]11号) +1 种基金赣南医学院第一附属医院博士启动资金(QD066)。; 文摘目的旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况。方法利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠(7♂,9♀),13只GH/tPA双转基因小鼠(8♂,5♀),双基因整合率为16.9%;P05系小鼠共获得175枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔34只,经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠(5♂,7♀),7只GH/tPA双转基因小鼠(3♂,4♀),双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5μg/mL、674μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因(P<0.05)。在小鼠的整个生长周期内,单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异(P>0.05)。结论本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠,结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平,且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响,这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。; 关键词双转基因小鼠表达超数排卵显微注射整合; Keywords double transgenic rabbits expression superovulation microinjection gene integration; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响被引量：1: 4; 作者李丹周鸣鸣何正义吴赵曼秋宋绍征; 机构无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系扬州大学兽医学院/江苏省转基因动物制药工程研究中心; 出处《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期182-190,共9页; 基金国家重点研发计划项目(2016YFE0126000) 江西省卫生健康委员会科技计划项目(202130627) +1 种基金江苏省高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师项目(苏教师函〔2021〕11号)。; 文摘【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因(hLF)打靶山羊β-乳球蛋白基因(BLG)座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG-/hLF+基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位点定向精准分子修饰的遗传育种提供借鉴。【方法】针对山羊BLG基因第一外显子区域设计构建sgBLG/Cas9载体,电转染山羊胎儿成纤维细胞,PCR验证BLG基因座位点致突变活性;以BLC14乳腺特异性表达载体为基础构建3种同源臂长度(6.0、3.5和1.2 kb)的hLF基因打靶载体,分别与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经500μg/mLG418筛选后,采用PCR检测基因打靶情况。【结果】sgBLG/Cas9载体在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座附近切割DNA双链的致突变活性效率在30%~35%。构建获得3种同源臂长度的hLF基因打靶载体(BLC14-1、BLC14-2和BLC14-3),对应的同源臂长度分别为6.0、3.5和1.2 kb;将3种hLF基因打靶载体与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经5次电转染和G418筛选,分别获得83、77和86株药物抗性细胞,经PCR同源重组检测最终获得42、38和44株BLG-/hLF+基因打靶细胞株,即hLF基因在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座的平均打靶效率分别为50.6%(42/83)、49.4%(38/77)和51.2%(44/86)。3种不同长度同源臂构建的hLF基因打靶载体在山羊BLG基因座位点的打靶效率在统计学上无显著差异(P>0.05),表明同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊BLG基因座位点无显著影响。【结论】利用CRISPR/Cas9系统介导hLF基因打靶山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座位点能成功获得多株hLF+/BLG-基因打靶细胞株(BLG基因座定点打靶hLF基因),但打靶载体同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导BLG位点定向整合hLF基因的打靶效率无明显影响。; 关键词山羊 CRISPR/Cas9 基因打靶同源臂长度 β-乳球蛋白基因(BLG) 人乳铁蛋白基因(hLF); Keywords goat CRISPR/Cas9 gene targeting homology arm length β-lactoglobulin gene(BLG) human lactoferrin gene(hLF); 分类号 S814.8 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于重组聚合酶扩增技术检测弓形虫方法的建立及应用	宋绍征顾乐盈武颖超孟雅琴于康英黄晓华	《中国人兽共患病学报》北大核心	2025	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	白芷在神经病理性疼痛中对MrgprD-TRPA1通路的调控作用分析	顾乐盈杨妞妞于康英孟雅琴宋绍征	《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析	宋绍征李丹何正义张婷成勇周鸣鸣	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响	李丹周鸣鸣何正义吴赵曼秋宋绍征	《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	1	在线阅读下载PDF 职称材料