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BVDV囊膜蛋白E2重组腺病毒的构建及免疫效果研究
1
作者
吕雯雯
塞力克·杰恩斯
+4 位作者
叶鸿艳
张亚平
刘芯怡
史慧君
付强
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期1065-1071,共7页
为构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E2重组腺病毒并分析其免疫效果。本研究通过PCR扩增获得目的基因BVDV E2,将其与穿梭载体pDC316-CMV-EFla-copGFP连接得到重组腺病毒载体,抽提质粒后酶切鉴定。将目的质粒与腺病毒骨架质粒p BHGlox-...
为构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E2重组腺病毒并分析其免疫效果。本研究通过PCR扩增获得目的基因BVDV E2,将其与穿梭载体pDC316-CMV-EFla-copGFP连接得到重组腺病毒载体,抽提质粒后酶切鉴定。将目的质粒与腺病毒骨架质粒p BHGlox-ΔE1,3cre采用AdMax系统共转染至Low Passage 293细胞中得到重组腺病毒rAdv-E2,同时包装重组腺病毒rAdv-EGFP用于阴性对照并均经PCR和测序鉴定;将重组腺病毒rAdv-E2和rAdv-EGFP分别感染Low Passage 293细胞后扩繁,并采用RT-PCR和TCID_(50)检测目的基因的表达及腺病毒滴度;将BVDV E2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达后经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化获得重组E2蛋白(rE2),用于后续特异性抗体的检测;以1×10^(8)TCID_(50)/只分别将重组腺病毒r Adv-E2和r Adv-EGFP经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,分别于第0、14 d两次免疫,首免后分别于7 d、14 d、21 d、28 d断尾采血,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清抗体水平;于首免后21 d时分别以BVDV TC株攻毒,于攻毒后0、5 d、10 d及15 d从各组小鼠中随机剖杀3只,取肝脏、肺脏、肾脏组织,使用福尔马林溶液固定小鼠各组织后,经脱水浸蜡、包埋、切片、HE染色后观察攻毒后各组小鼠的组织病理变化情况。结果显示,RT-PCR鉴定结果表明重组腺病毒r Adv-E2表达E2基因;ELISA检测结果显示,rAdv-E2组小鼠在免疫后7 d、14 d、21 d时抗体水平升高,28 d时显著升高,rAdv-EGFP组小鼠抗体水平无明显变化,rAdv-E2组小鼠的抗体水平整体极显著高于rAdv-EGFP组(P<0.001、P<0.0001),表明rAdv-E2诱导小鼠产生了良好的体液免疫反应;组织病理切片观察结果显示,BVDV攻毒后,接种rAdv-EGFP的对照组小鼠肝脏组织出现肝细胞变性坏死、水肿、炎性细胞增多,中央静脉有淤血产生;肺脏组织病变特征主要为肺泡破裂融合,炎性细胞浸润、出血、充血,黏膜脱落;肾脏组织有炎症产生,出现淋巴细胞浸润等病变特征,rAdv-E2免疫组小鼠各组织仅出现较轻的细胞病变,表明重组腺病毒r Adv-E2可以保护BALB/c小鼠免受BVDV的感染而致病。综上结果表明,重组腺病毒r Adv-E2将有望成为防控BVDV感染的新型疫苗。
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关键词
牛病毒性腹泻病毒
囊膜蛋白E2
腺病毒载体
免疫效果
病理变化
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职称材料
牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
被引量：
1
2
作者
郑启铭
梁纤纤
+6 位作者
李晓卓
李月
刘文锴
韩翔舒
冯继红
翟少华
夏俊
《草食家畜》
2024年第1期31-36,共6页
【目的】新疆昌吉市周边某牛场大量犊牛严重腹泻,排黄色水样稀便,有的带血,并出现精神萎靡、食欲不振等症状,为确定此次发病的病原并提供治疗参考。【方法】通过对该牛场出现的犊牛腹泻粪样进行细菌鉴定及分型并进行耐药性分析。【结果...
【目的】新疆昌吉市周边某牛场大量犊牛严重腹泻,排黄色水样稀便,有的带血,并出现精神萎靡、食欲不振等症状,为确定此次发病的病原并提供治疗参考。【方法】通过对该牛场出现的犊牛腹泻粪样进行细菌鉴定及分型并进行耐药性分析。【结果】PCR鉴定结果显示为大肠杆菌阳性,染色镜检结果符合大肠杆菌形态特征,分离菌株具有K99黏附性基因。药敏试验结果显示该分离菌株仅对多黏菌素B中介(既不敏感也不耐药),对其他所有受试抗菌药物耐药。在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】结果表明,该牛场犊牛腹泻粪便中分离的菌株为产肠毒素性大肠杆菌,携带K99毒力基因,对多黏菌素B中介,具有一定致病力。
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关键词
犊牛腹泻
大肠杆菌
药敏试验
K99
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职称材料
题名
BVDV囊膜蛋白E2重组腺病毒的构建及免疫效果研究
1
作者
吕雯雯
塞力克·杰恩斯
叶鸿艳
张亚平
刘芯怡
史慧君
付强
机构
新疆
农业大学
动物
医学学院
新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期1065-1071,共7页
基金
新疆维吾尔自治区“天山英才”项目(2022TSYCCX0049)
新疆维吾尔自治区自然基金项目(2022D01E15)
+1 种基金
国家自然科学基金项目(32060042)
新疆农业大学大学生创新项目(dxscx2023202)。
文摘
为构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E2重组腺病毒并分析其免疫效果。本研究通过PCR扩增获得目的基因BVDV E2,将其与穿梭载体pDC316-CMV-EFla-copGFP连接得到重组腺病毒载体,抽提质粒后酶切鉴定。将目的质粒与腺病毒骨架质粒p BHGlox-ΔE1,3cre采用AdMax系统共转染至Low Passage 293细胞中得到重组腺病毒rAdv-E2,同时包装重组腺病毒rAdv-EGFP用于阴性对照并均经PCR和测序鉴定;将重组腺病毒rAdv-E2和rAdv-EGFP分别感染Low Passage 293细胞后扩繁,并采用RT-PCR和TCID_(50)检测目的基因的表达及腺病毒滴度;将BVDV E2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达后经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化获得重组E2蛋白(rE2),用于后续特异性抗体的检测;以1×10^(8)TCID_(50)/只分别将重组腺病毒r Adv-E2和r Adv-EGFP经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,分别于第0、14 d两次免疫,首免后分别于7 d、14 d、21 d、28 d断尾采血,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清抗体水平;于首免后21 d时分别以BVDV TC株攻毒,于攻毒后0、5 d、10 d及15 d从各组小鼠中随机剖杀3只,取肝脏、肺脏、肾脏组织,使用福尔马林溶液固定小鼠各组织后,经脱水浸蜡、包埋、切片、HE染色后观察攻毒后各组小鼠的组织病理变化情况。结果显示,RT-PCR鉴定结果表明重组腺病毒r Adv-E2表达E2基因;ELISA检测结果显示,rAdv-E2组小鼠在免疫后7 d、14 d、21 d时抗体水平升高,28 d时显著升高,rAdv-EGFP组小鼠抗体水平无明显变化,rAdv-E2组小鼠的抗体水平整体极显著高于rAdv-EGFP组(P<0.001、P<0.0001),表明rAdv-E2诱导小鼠产生了良好的体液免疫反应;组织病理切片观察结果显示,BVDV攻毒后,接种rAdv-EGFP的对照组小鼠肝脏组织出现肝细胞变性坏死、水肿、炎性细胞增多,中央静脉有淤血产生;肺脏组织病变特征主要为肺泡破裂融合,炎性细胞浸润、出血、充血,黏膜脱落;肾脏组织有炎症产生,出现淋巴细胞浸润等病变特征,rAdv-E2免疫组小鼠各组织仅出现较轻的细胞病变,表明重组腺病毒r Adv-E2可以保护BALB/c小鼠免受BVDV的感染而致病。综上结果表明,重组腺病毒r Adv-E2将有望成为防控BVDV感染的新型疫苗。
关键词
牛病毒性腹泻病毒
囊膜蛋白E2
腺病毒载体
免疫效果
病理变化
Keywords
bovine viral diarrhea virus
capsule membrane protein E2
adenovirus vector
Immune effect
pathological change
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
被引量：
1
2
作者
郑启铭
梁纤纤
李晓卓
李月
刘文锴
韩翔舒
冯继红
翟少华
夏俊
机构
新疆
农业大学
动物
医学学院
新疆草食动物新药研究与创制自治区重点实验室
新疆
畜牧科学院兽医
研究
所/
新疆
畜牧科学院
动物
临床医学
研究
中心
农业农村部
草食动物
疫病防控
重点
实验室
(省部共建)
石河子大学
动物
科技学院
新疆
维吾尔
自治区
呼图壁县农业农村局
出处
《草食家畜》
2024年第1期31-36,共6页
基金
新疆维吾尔自治区重大科技专项“新疆畜禽疫病防控体系质量提升工程”(2023A02007)
新疆维吾尔自治区天山英才青年科技拔尖人才项目“牛羊幼畜群发病防控关键技术研究”(2022196128)。
文摘
【目的】新疆昌吉市周边某牛场大量犊牛严重腹泻,排黄色水样稀便,有的带血,并出现精神萎靡、食欲不振等症状,为确定此次发病的病原并提供治疗参考。【方法】通过对该牛场出现的犊牛腹泻粪样进行细菌鉴定及分型并进行耐药性分析。【结果】PCR鉴定结果显示为大肠杆菌阳性,染色镜检结果符合大肠杆菌形态特征,分离菌株具有K99黏附性基因。药敏试验结果显示该分离菌株仅对多黏菌素B中介(既不敏感也不耐药),对其他所有受试抗菌药物耐药。在致病性试验中,小鼠在15 h内陆续死亡,说明该菌株具有一定致病力。【结论】结果表明,该牛场犊牛腹泻粪便中分离的菌株为产肠毒素性大肠杆菌,携带K99毒力基因,对多黏菌素B中介,具有一定致病力。
关键词
犊牛腹泻
大肠杆菌
药敏试验
K99
Keywords
calf diarrhea
escherichia coli
antimicrobial susceptibility test
K99
分类号
S858.23 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
BVDV囊膜蛋白E2重组腺病毒的构建及免疫效果研究
吕雯雯
塞力克·杰恩斯
叶鸿艳
张亚平
刘芯怡
史慧君
付强
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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下载PDF
职称材料
2
牛肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
郑启铭
梁纤纤
李晓卓
李月
刘文锴
韩翔舒
冯继红
翟少华
夏俊
《草食家畜》
2024
1
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