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陆地棉GhUGP1基因的克隆与表达分析
1
作者
足木热木·吐尔逊
李晨宇
+5 位作者
陈明
于月华
李晓荣
杨洋
王勇攀
李波
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期2038-2047,共10页
为进一步了解UGPase在棉花中的作用,根据全基因组测序结果,筛选且克隆了在陆地棉纤维发育过程中的关键基因GhUGP1。利用生物信息学方法对其核苷酸和氨基酸序列进行分析,通过同源重组技术,将GhUGP1基因的编码序列构建到原核表达载体pMAL-...
为进一步了解UGPase在棉花中的作用,根据全基因组测序结果,筛选且克隆了在陆地棉纤维发育过程中的关键基因GhUGP1。利用生物信息学方法对其核苷酸和氨基酸序列进行分析,通过同源重组技术,将GhUGP1基因的编码序列构建到原核表达载体pMAL-C4x上,通过IPTG诱导蛋白表达来确定IPTG诱导蛋白的最佳条件,最后利用Western Blot鉴定重组蛋白。结果显示,GhUGP1(XP_040931642.1)全长序列6572 bp,编码区1404 bp,编码467个氨基酸,预测分子质量约为51.493 ku,等电点为5.86。氨基酸序列比对分析发现在陆地棉、亚洲棉、木槿等不同物种间UGP序列的相似率为90.63%。进化树分析结果显示GhUGP1蛋白与亚洲棉UGP蛋白亲缘关系最近,同源性最高并在一个分支上。亚细胞定位结果显示该蛋白为核膜共定位。蛋白诱导时由于IPTG浓度梯度结果差别不明显,选择IPTG终浓度为0.3 mmol/L,而温度梯度和时间梯度结果差异明显,确定最佳诱导温度为28℃,最佳诱导时间为6 h,蛋白溶解及纯化的温度和时间为28℃诱导6 h。Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确,最终成功获得了大小为95.9 ku的pMAL-C4x-GhUGP1重组蛋白,为后期对GhUGP1功能深度解析提供帮助。
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关键词
陆地棉
GhUGP1基因
克隆
序列分析
原核表达
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职称材料
题名
陆地棉GhUGP1基因的克隆与表达分析
1
作者
足木热木·吐尔逊
李晨宇
陈明
于月华
李晓荣
杨洋
王勇攀
李波
机构
新疆
农业
科学院核技术生物技术研究所
新疆
农业
大学农学院
新疆绿洲驼铃农业发展有限公司
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期2038-2047,共10页
基金
新疆维吾尔自治区自然科学基金(2022D01E57)
新疆现代农业产业技术体系项目(XJARS-3)
国家自然科学基金(32460504)。
文摘
为进一步了解UGPase在棉花中的作用,根据全基因组测序结果,筛选且克隆了在陆地棉纤维发育过程中的关键基因GhUGP1。利用生物信息学方法对其核苷酸和氨基酸序列进行分析,通过同源重组技术,将GhUGP1基因的编码序列构建到原核表达载体pMAL-C4x上,通过IPTG诱导蛋白表达来确定IPTG诱导蛋白的最佳条件,最后利用Western Blot鉴定重组蛋白。结果显示,GhUGP1(XP_040931642.1)全长序列6572 bp,编码区1404 bp,编码467个氨基酸,预测分子质量约为51.493 ku,等电点为5.86。氨基酸序列比对分析发现在陆地棉、亚洲棉、木槿等不同物种间UGP序列的相似率为90.63%。进化树分析结果显示GhUGP1蛋白与亚洲棉UGP蛋白亲缘关系最近,同源性最高并在一个分支上。亚细胞定位结果显示该蛋白为核膜共定位。蛋白诱导时由于IPTG浓度梯度结果差别不明显,选择IPTG终浓度为0.3 mmol/L,而温度梯度和时间梯度结果差异明显,确定最佳诱导温度为28℃,最佳诱导时间为6 h,蛋白溶解及纯化的温度和时间为28℃诱导6 h。Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确,最终成功获得了大小为95.9 ku的pMAL-C4x-GhUGP1重组蛋白,为后期对GhUGP1功能深度解析提供帮助。
关键词
陆地棉
GhUGP1基因
克隆
序列分析
原核表达
Keywords
Gossypium hirsutum
GhUGP1 gene
Cloning
Sequence analysis
Prokaryotic expression
分类号
S562 [农业科学—作物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
陆地棉GhUGP1基因的克隆与表达分析
足木热木·吐尔逊
李晨宇
陈明
于月华
李晓荣
杨洋
王勇攀
李波
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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