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利用PCR技术检测537份新疆结核病人痰标本中的结核分枝杆菌 被引量:1
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作者 蔡宏 李君莲 +5 位作者 呼西旦 李淑霞 黄丽茜 陈银华 许苗 朱玉贤 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期65-67,共3页
目的 提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法 在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际... 目的 提高聚合酶链反应在检测人结核分枝杆菌中的特异性和敏感性。方法 在聚合酶链反应中对 4种DNA片段即结核杆菌特异插入序列IS6 110 ,IS10 81,和 16SrRNA ,6 5kDa摸板进行了比较 ;为获取较多的细菌DNA ,临床痰标本处理采用了国际标准化方法主要包括用一定量的N -乙酰 -L半胱胺酸和氢氧化钠处理痰标本 ;改进了RCR混和液的成份即添加了甘油 ,dUTP -尿嘧啶糖基化酶。结果 选择IS6 110作为结核杆菌特异性摸板用于检测细菌DNA ,制备出了 6批人结核杆菌PCR检测试剂盒 ,在对来自新疆结核病研究所的 5 37份痰标本的检测中发现 ,该试剂盒检测的特异性为 6 5 .97% ,敏感性为 93 .5 3 %。结论改良TB -PCR试剂盒显示有较高的敏感性 ,特异性还有待于进一步完善 ,该试剂盒在临床诊断中有一定的价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 痰标本 聚合酶链式反应 结核杆菌PCR检测试剂盒 结核病
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PCR指印技术对新疆结核病病原Bacter460液体培养标本进行菌株分型
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作者 李淑霞 蔡宏 +4 位作者 呼西旦 黄丽茜 张玲 李君莲 许苗 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期84-86,共3页
以结核分枝杆菌特异插入序列IS6 110两端序列为模板 ,设计一对外向PCR引物进行PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用IS6 110在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且IS6 110序列之间相距较近 ,... 以结核分枝杆菌特异插入序列IS6 110两端序列为模板 ,设计一对外向PCR引物进行PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用IS6 110在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且IS6 110序列之间相距较近 ,经PCR扩增呈现多条带型构成DNA指印。在对新疆结核病人的 31份液体培养标本的PCR检测呈现 6种指印 ,该PCR分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短 ,不需细菌再培养 ,DNA纯化和酶切、萨瑟恩转印或核酸杂交等繁琐步骤。证明该法是一种快速。 展开更多
关键词 人结核分枝杆菌 PCR扩增 指印分析 结核病
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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 被引量:7
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作者 蔡宏 李淑霞 +3 位作者 呼西旦 李君莲 许苗 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期175-179,共5页
5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌... 5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR 分型
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人结核病病原菌型的PCR指印分析
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作者 呼西旦 蔡宏 +3 位作者 李淑霞 张玲 李君莲 许苗 《西北农业学报》 CSCD 2000年第2期11-14,共4页
以结核分枝杆菌特异插入序列 IS61 1 0两端序列为模板 ,设计一对外向 PCR引物进行 PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用 IS61 1 0在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且 IS61 1 0序列之间相... 以结核分枝杆菌特异插入序列 IS61 1 0两端序列为模板 ,设计一对外向 PCR引物进行 PCR扩增 ,从而建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型技术 ,该试验的基础是利用 IS61 1 0在结核分枝杆菌染色体DNA中反复重复且 IS61 1 0序列之间相距较近 ,经 PCR扩增呈现多条带型构成 DNA指印。采用 PCR指印技术 ,对人结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌进行分型 ,57份痰标本呈现 7种 PCR指印。该 PCR分型技术对结核分枝杆菌的分型所需时间短 ,不需细菌再培养、DNA纯化和酶切 ,萨瑟恩转印或核酸杂交等繁琐步骤。经过对 57份标本的检测 ,证明该法是一种快速、准确的鉴定与分析方法 。 展开更多
关键词 人结核分枝杆菌 PCR扩增 指印分析
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牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析 被引量:8
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作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李君莲 周文来 谷登峰 陈永福 《中国畜禽传染病》 CSCD 1996年第6期13-16,共4页
牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源,其染色体DNA中含有插入序列IS1081,属于结核杆菌类特异性基因片段,在牛结核杆菌染色体中含有6个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分... 牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源,其染色体DNA中含有插入序列IS1081,属于结核杆菌类特异性基因片段,在牛结核杆菌染色体中含有6个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体D避的特民插入片段即IS1081为模闰于IS1081中438-459和664-685碱基 的两个片段为引物。利用PCR技术扩增出一段248bp的特异性片段。 展开更多
关键词 牛病 结核分枝杆菌 结核病 核酸探针 克隆
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牛结核分枝杆菌基因文库的构建 被引量:2
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作者 蔡宏 陈东 +3 位作者 李淑霞 呼西旦 李君莲 陈永福 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期114-116,共3页
以国际标准牛型结核分枝杆菌(M.bovis)TMC410为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3A部分消化后,纯化回收9~25Kb片段,并将其用T4DNA连接酶与经BamHI酶切为粘性末端的LambdaEMB... 以国际标准牛型结核分枝杆菌(M.bovis)TMC410为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶Sau3A部分消化后,纯化回收9~25Kb片段,并将其用T4DNA连接酶与经BamHI酶切为粘性末端的LambdaEMBL3左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌LE392。所获重组子为6×104,因为牛结核杆菌基因组大小约为4×106Kb则以99%概率筛到任一基因,要求的重组子数为1.08×103。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 基因文库
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动员全社会、积极开展防痨科普工作——新疆防痨科普工作经验介绍
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《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2002年第z1期55-57,共3页
  新疆属于结核病疫情较高的省区之一,作为卫V项目贷款者,在各级政府领导下和各级卫生行政部门医疗单位支持协作下,结核病控制工作取得了一定的成绩.在各项工作中,我们深深感到防痨科普宣传教育工作确实起到了排头兵的作用,甚至关系...   新疆属于结核病疫情较高的省区之一,作为卫V项目贷款者,在各级政府领导下和各级卫生行政部门医疗单位支持协作下,结核病控制工作取得了一定的成绩.在各项工作中,我们深深感到防痨科普宣传教育工作确实起到了排头兵的作用,甚至关系到防痨事业的成败.众所周知,防痨科普宣传教育工作是以控制结核病为目标的专业性宣传鼓动与健康教育工作,同时也是一项广泛的社会性群众性及艺术性很强的科普教育工作,其目的是通过广泛的宣传教育,使不同人群改变不正确的认识与行为、提高结核病防治的知识水平,这也是结核病控制工作的一项战略性措施.…… 展开更多
关键词 结核病防治 结防工作 卫生行政 科普宣传活动 新疆 宣传教育工作
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采用PCR法和限制性内切酶分析对12种分枝杆菌进行鉴定
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作者 蔡宏 李淑霞 +4 位作者 呼西旦 李君莲 武坚 张曼夫 陈永福 《西北农业学报》 CAS CSCD 1999年第2期6-10,共5页
采用65KDa热激蛋白基因为模板,选择位于398-836基因序列处的一对分枝杆菌通用引物,扩增出439bp的基因片段。将12种标准分枝杆菌的PCR扩增产物即439bp用BstEⅡ限制性内切酶作酶切分析,根据酶切带型的... 采用65KDa热激蛋白基因为模板,选择位于398-836基因序列处的一对分枝杆菌通用引物,扩增出439bp的基因片段。将12种标准分枝杆菌的PCR扩增产物即439bp用BstEⅡ限制性内切酶作酶切分析,根据酶切带型的大小、强弱以及带型数量进行分枝杆菌菌种鉴定。通过对12种分枝杆菌的PCR反应和限制性酶切分析,可将被检标本中大部分的分枝杆菌鉴定到种。本试验无需进行杂交或使用放射性物质,24h即可完成。 展开更多
关键词 分枝杆菌 PCR 限制性酶切分析
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