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Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
1
作者
刘莉
林嘉鹏
+3 位作者
吴阳升
汪立芹
田永芝
黄俊成
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期1102-1106,共5页
为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达...
为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白质,计算转染率。结果表明Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒直径在100 nm左右,结构为六边形。200μg/ml的纳米颗粒浓度下细胞活性为87%,达到500μg/ml时细胞活性快速降至44%;DNA与LDH的质量比为4/50时转染率达到11.17%,质量比为10/50时,转染效率为3.93%;DNA与LDH作用时间在15 min时转染率为6.93%,30 min时反而下降至4.8%;转染细胞培养24 h时转染率达到17.4%,72 h后下降至3.7%。纳米颗粒的分子较小,比较容易被细胞膜胞吞,并且Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒能有效地与eGFP质粒相结合;在DNA与LDH质量比4/50的情况下,结合能力最高;最佳结合时间为15 min;转染时间在48 h时效果最好。HEK 293T细胞对Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒的最优耐受浓度为200μg/ml;同样条件下C2C12细胞的转染效率比HEK 293T细胞的转染效率高。
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关键词
Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒
基因转染
载体
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职称材料
绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究
被引量：
5
2
作者
安静
张雪梅
+1 位作者
刘晨曦
刘明军
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2014年第4期15-21,共7页
【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区，构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体，分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA，通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列，经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接，构建pLEX...
【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区，构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体，分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA，通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列，经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接，构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒，并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞，并用重组慢病毒使其感染，建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线，分析过表达IGF1对绵羊成肌细胞生长的影响；采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518 bp的IGF1 CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体，其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示，IGF1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达，细胞生长曲线显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快（第1天差异显著（P＜0.05），第2～6天差异极显著（P＜0.01））；细胞周期测定结果显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期，且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。
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关键词
绵羊IGF1基因
慢病毒表达载体
细胞生长曲线
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职称材料
题名
Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
1
作者
刘莉
林嘉鹏
吴阳升
汪立芹
田永芝
黄俊成
机构
新疆
农业
大学农
学院
新疆
畜牧
科学院
生物技术
研究
中心
新疆维吾尔自治区
动物
生物技术
重点
开放实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期1102-1106,共5页
基金
国家转基因重大专项(2013ZX08008-003)
国家自然科学基金项目(U1203381)
+1 种基金
新疆维吾尔自治区科技计划项目(201111113)
新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201291147)
文摘
为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白质,计算转染率。结果表明Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒直径在100 nm左右,结构为六边形。200μg/ml的纳米颗粒浓度下细胞活性为87%,达到500μg/ml时细胞活性快速降至44%;DNA与LDH的质量比为4/50时转染率达到11.17%,质量比为10/50时,转染效率为3.93%;DNA与LDH作用时间在15 min时转染率为6.93%,30 min时反而下降至4.8%;转染细胞培养24 h时转染率达到17.4%,72 h后下降至3.7%。纳米颗粒的分子较小,比较容易被细胞膜胞吞,并且Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒能有效地与eGFP质粒相结合;在DNA与LDH质量比4/50的情况下,结合能力最高;最佳结合时间为15 min;转染时间在48 h时效果最好。HEK 293T细胞对Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒的最优耐受浓度为200μg/ml;同样条件下C2C12细胞的转染效率比HEK 293T细胞的转染效率高。
关键词
Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒
基因转染
载体
Keywords
Mg2Al-Cl-LDH nanoparticle
gene transfection
carrier
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究
被引量：
5
2
作者
安静
张雪梅
刘晨曦
刘明军
机构
新疆畜牧科学院生物技术研究中心新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室
[
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2014年第4期15-21,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100307)
文摘
【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区，构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体，分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA，通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列，经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接，构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒，并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞，并用重组慢病毒使其感染，建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线，分析过表达IGF1对绵羊成肌细胞生长的影响；采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518 bp的IGF1 CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体，其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示，IGF1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达，细胞生长曲线显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快（第1天差异显著（P＜0.05），第2～6天差异极显著（P＜0.01））；细胞周期测定结果显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期，且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。
关键词
绵羊IGF1基因
慢病毒表达载体
细胞生长曲线
Keywords
sheep IGF1 gene
lentiviral vector
cell growth curve
分类号
S826 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
刘莉
林嘉鹏
吴阳升
汪立芹
田永芝
黄俊成
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究
安静
张雪梅
刘晨曦
刘明军
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2014
5
在线阅读
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职称材料
已选择
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