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新疆褐牛和中国荷斯坦牛POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量的关联分析 被引量:3
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作者 林嘉鹏 贺三刚 +4 位作者 白杰 刘磊 杨波 谭立新 刘明军 《中国草食动物》 CAS 2009年第1期6-8,共3页
以新疆褐牛和中国荷斯坦牛为研究对象,应用PCR-RFLP方法对POU1F1基因第6外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。结果表明,新疆褐牛和中国荷斯坦牛的群体在该位点分别有2种等位基因(A/B),频率分别为0.43/0.57和0.33/0.67,B等位... 以新疆褐牛和中国荷斯坦牛为研究对象,应用PCR-RFLP方法对POU1F1基因第6外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。结果表明,新疆褐牛和中国荷斯坦牛的群体在该位点分别有2种等位基因(A/B),频率分别为0.43/0.57和0.33/0.67,B等位基因是优势等位基因。在新疆褐牛群体中,BB型个体的产奶量显著高于AA型(P<0.05)。 展开更多
关键词 新疆褐牛 中国荷斯坦牛 POU1F1 多态性 产奶量
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新疆褐牛与荷斯坦牛NF-κB基因表达与TOLL样受体4基因型的关系 被引量:2
2
作者 袁芳 刘明军 +2 位作者 白杰 林嘉鹏 李文蓉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期114-120,共7页
核转录因子NF-κB与动物机体的炎症反应、免疫应答、细胞分化和凋亡等密切相关,而Toll样受体(TLR)通过对侵入机体的病原微生物的抗原识别和信号转导,在NF-κB介导的炎症和免疫应答反应中发挥着重要作用。本研究在新疆褐牛和荷斯坦牛隐... 核转录因子NF-κB与动物机体的炎症反应、免疫应答、细胞分化和凋亡等密切相关,而Toll样受体(TLR)通过对侵入机体的病原微生物的抗原识别和信号转导,在NF-κB介导的炎症和免疫应答反应中发挥着重要作用。本研究在新疆褐牛和荷斯坦牛隐性乳房炎调查和TLR4外显子3+2021位点(E3+2021)SNP基因型与隐性乳房炎相关性研究的基础上,分析和比较了E3+2021 SNP位点3种不同基因型奶牛个体NF-κB信号通路上9个基因(NFκB1、NFκB2、RelA、c-Rel、RelB、IKKα、IKKβ、IKKγ和IκBα基因)转录水平的差异。结果显示,在BB基因型中,NFκB1和IKKα基因的mRNA转录水平在新疆褐牛与荷斯坦牛品种间差异显著(P<0.05),RelA、RelB、IKKβ、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异极显著(P<0.01)。在AB基因型中,IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异显著(P<0.05)。在对新疆褐牛的研究中发现,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异显著(P<0.05);而在荷斯坦牛检测的9个基因的mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异均不显著。因此,Toll样受体信号转导通路下游NFκB1、RelA、IKKβ、IKKγ和IκBα基因的mRNA转录水平在品种间的变化,可能与新疆褐牛乳汁中体细胞数(SCS)显著低于荷斯坦牛相关。在新疆褐牛中,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平的变化可能是AA基因型SCS显著高于AB基因型的原因之一。 展开更多
关键词 新疆褐牛 荷斯坦牛 NF-ΚB 基因型
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新疆褐牛,中国荷斯坦POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量关联分析 被引量:5
3
作者 林嘉鹏 贺三刚 +4 位作者 白杰 刘磊 杨波 谭立新 刘明军 《中国牛业科学》 2009年第1期1-4,共4页
[目的]为了研究POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量的关系。[方法]以新疆褐牛,中国荷斯坦为研究对象,利用PCR-RFLP对POU1F1基因第六外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。[结果]表明:新疆褐牛,中国荷斯坦牛的群体在该位点分... [目的]为了研究POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量的关系。[方法]以新疆褐牛,中国荷斯坦为研究对象,利用PCR-RFLP对POU1F1基因第六外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析。[结果]表明:新疆褐牛,中国荷斯坦牛的群体在该位点分别检测到2种等位基因A/B,频率分别为:0.43/0.57,0.33/0.67,B等位基因是优势等位基因。[结论]在新疆褐牛群体中,BB型个体的产奶量显著高于AA型,在荷斯坦奶牛中BB型比AA,AB型的产奶量高,但差异不显著。 展开更多
关键词 POU1F1 多态性 新疆褐牛 中国荷斯坦 产奶量
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新疆地区绵羊品种朊蛋白基因136、154和171位点的多态性 被引量:2
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作者 陈芯 贺三刚 刘明军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1159-1165,共7页
绵羊痒病是一种渐进性和致死性中枢神经系统疾病,绵羊朊蛋白基因(Prion protein gene,PRNP)多态性与痒病的易感或抗性有关,其中PRNP136位(V/A)、154位(H/R)和171位(H/Q/R)的基因多态性与该病发生最相关。为评价新疆地区主要绵羊品种对... 绵羊痒病是一种渐进性和致死性中枢神经系统疾病,绵羊朊蛋白基因(Prion protein gene,PRNP)多态性与痒病的易感或抗性有关,其中PRNP136位(V/A)、154位(H/R)和171位(H/Q/R)的基因多态性与该病发生最相关。为评价新疆地区主要绵羊品种对痒病的易感性,文章对新疆地区10个绵羊品种(阿勒泰、巴士拜、巴音布鲁克、多浪、和田、策勒黑、中国美利奴、德国肉用美利奴、特克赛尔和萨福克羊)共746只个体PRNP基因的136位(V/A)、154位(H/R)和171位(H/Q/R)的遗传多态性进行分析,检测到了ARQ、ARR、ARH、ARK、VRQ、AHR、AHQ、AHH8种等位基因,其中ARQ和ARR等位基因存在于所有品种中,且ARQ在所有品种中的基因频率最高。ARH存在于除萨福克和德国肉用美利奴羊外的8个绵羊品种中。仅在新疆地方品种阿勒泰、巴音布鲁克、巴士拜和多浪羊中检测到ARK等位基因。而VRQ、AHR、AHQ和AHH4种等位基因只在中国美利奴羊上存在,且频率极低。在10个品种中共检测到了ARQ/ARQ、ARQ/ARK、ARR/ARR、ARH/ARH、ARQ/ARR、ARH/ARQ、ARH/ARR、ARK/ARK、ARH/ARK、ARQ/VRQ、ARQ/AHQ、ARQ/AHR和ARH/AHH13种基因型,其中中度易感的ARQ/ARQ基因型频率最高,而抗性最强的ARR/ARR基因型仅存在于巴音布鲁克、策勒黑、中国美利奴、特克赛尔和德国肉用美利奴羊,且频率较低。文章首次在中国美利奴羊上发现了易感性很强的VRQ/ARQ基因型。上述结果提示新疆的主要绵羊品种对痒病的抗性较弱。 展开更多
关键词 PRNP多态性 基因型 痒病
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不同处理方法对萨福克肉羊超排回收效果的影响 被引量:11
5
作者 陈童 林嘉鹏 黄俊成 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期159-161,共3页
对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P<0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P>0.05);供体... 对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P<0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P>0.05);供体羊经第二情期或埋栓同期发情处理后均能达到预期的效果,但首次超排和二次超排供体羊胚胎回收率均差异显著(P<0.05)。 展开更多
关键词 萨福克肉羊 超排 输卵管冲胚 胚胎移植
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绵羊MSTN基因启动子区SNPs分析 被引量:5
6
作者 贺三刚 陈芯 +2 位作者 刘晨曦 刘国松 刘明军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期81-85,共5页
采用测序和PCR-RFLP的方法,分析了MSTN基因启动子区在7个品种绵羊中的单核苷酸多态性,结果表明:存在2个SNP位点(-959T/C,-784G/A),表现为6种基因型(TT、TC、CC、GG、GA、AA),在-959T/C位点中,国外肉用绵羊品种陶赛特、德国肉用美利奴及... 采用测序和PCR-RFLP的方法,分析了MSTN基因启动子区在7个品种绵羊中的单核苷酸多态性,结果表明:存在2个SNP位点(-959T/C,-784G/A),表现为6种基因型(TT、TC、CC、GG、GA、AA),在-959T/C位点中,国外肉用绵羊品种陶赛特、德国肉用美利奴及我区的巴士拜羊,TT为优势基因型,地方品种绵羊巴音布鲁克羊、多浪羊和阿勒泰羊在该位点中CC为优势基因型,经χ2检验,其群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态,群体遗传多态性分析表明,这6个绵羊品种中群体的多态信息含量(PIC)均处于0.25~0.50之间,为中度多态,特克赛尔羊在该位点未发生突变。在-784G/A位点中,除陶赛特与特克赛尔羊在该位点未发生突变,其他5个品种绵羊优势等位基因均为G等位基因。经χ2检验后,其群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态,群体遗传多态性分析表明,多浪羊、巴士拜羊和巴音布鲁克羊的群体多态信息含量(PIC)均处于0.25~0.50之间,为中度多态,而阿勒泰羊和德国肉用美利奴的群体多态信息含量(PIC)小于0.25,为低度多态。 展开更多
关键词 绵羊 MSTN 启动子 PCR-RFLP 多态性
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母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达 被引量:5
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作者 侯敏 林嘉鹏 +5 位作者 白洁 赵云程 汪立琴 陈世彬 叶小芳 黄俊成 《中国草食动物》 CAS 2010年第2期5-10,共6页
为探讨母源基因在绵羊卵母细胞和胚胎发育过程中的表达模式,运用Real-time PCR技术研究4种母源基因:Gdf9(生长分化因子9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)及Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)的mRNAs在绵羊GV期卵母细胞,24h成熟... 为探讨母源基因在绵羊卵母细胞和胚胎发育过程中的表达模式,运用Real-time PCR技术研究4种母源基因:Gdf9(生长分化因子9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)及Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)的mRNAs在绵羊GV期卵母细胞,24h成熟卵母细胞,2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞胚胎以及囊胚中的含量变化情况。结果表明:在GV期卵中Zar1、Mater、Gdf9以及Dnmt1m RNA相对含量最高(P<0.05);从2-细胞胚胎开始,4种基因的mRNA相对含量显著降低(P<0.05),各基因mRNA的含量在不同发育阶段的卵母细胞和胚胎中存在动态变化,这对卵子生长和胚胎发育有重要意义。 展开更多
关键词 卵母细胞成熟 早期胚胎发育 母源基因 实时定量PCR 基因表达
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策勒黑羊BMPR-IB、ESR基因型与生殖激素水平的相关性研究 被引量:5
8
作者 冯利君 史洪才 +2 位作者 白杰 牛志刚 王金富 《中国草食动物》 CAS 2010年第6期12-15,共4页
多胎主效基因和生殖激素水平都是影响绵羊繁殖力的重要因素。为探讨策勒黑羊BMPR-IB和ESR不同基因型个体与雌二醇和孕酮两种生殖激素水平的关系,试验以黄体期的47只经产母羊和64只妊娠母羊为研究对象,通过PCR-RFLP技术检测这些母羊BMPR... 多胎主效基因和生殖激素水平都是影响绵羊繁殖力的重要因素。为探讨策勒黑羊BMPR-IB和ESR不同基因型个体与雌二醇和孕酮两种生殖激素水平的关系,试验以黄体期的47只经产母羊和64只妊娠母羊为研究对象,通过PCR-RFLP技术检测这些母羊BMPR-1B和ESR的基因型,采用酶联免疫吸附法测定经产母羊的血清雌二醇含量和妊娠母羊的血清孕酮含量,分析这两种激素水平与BMPR-IB、ESR不同基因型个体间的相关性。结果表明:策勒黑羊BMPR-IB和ESR三种不同基因型个体的雌二醇含量差异不显著(P>0.05);妊娠策勒黑羊BMPR-IB和ESR三种不同基因型个体的孕酮含量差异也不显著(P>0.05)。结论:BMPR-IB和ESR基因上的突变没有影响母羊的雌二醇和孕酮的分泌水平。 展开更多
关键词 策勒黑羊 BMPR-IB ESR 雌二醇 孕酮
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奶牛乳房炎与核转录因子κB基因的表达调控 被引量:3
9
作者 袁芳 刘明军 +2 位作者 白杰 林嘉鹏 侯敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期129-133,共5页
核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,参与机体的免疫反应、细胞黏附、细胞分化、细胞增殖与凋亡及应激反应等。在奶牛感染乳房炎时,大部分涉及中性白细胞移行和激活的炎性蛋白质的编码基... 核转录因子(nuclear factor-κB,NF-κB)是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,参与机体的免疫反应、细胞黏附、细胞分化、细胞增殖与凋亡及应激反应等。在奶牛感染乳房炎时,大部分涉及中性白细胞移行和激活的炎性蛋白质的编码基因在他们的启动子区都包含一个可结合NF-κB的κB位点,因此在一定程度上依赖NF-κB调控这些基因的表达。笔者详细的阐述NF-κB基因在奶牛乳房炎发病过程中的特点、作用和表达机制,为从分子水平认识和治疗奶牛乳房炎提供一定的文献支持。 展开更多
关键词 NF-ΚB 奶牛乳房炎 奶牛
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Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞复合体、裸卵及卵丘细胞中的表达 被引量:1
10
作者 林嘉鹏 侯敏 +3 位作者 白杰 赵云程 汪立芹 黄俊成 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期25-29,共5页
为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,... 为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,应用Rael-time PCR技术,检测母源基因Gdf9(生长分化因子9),Zar1(合子阻滞因子1),Mater(胚胎必要的母体抗原),Dnmt1(DNA甲基化酶1)在不同卵母细胞和卵丘细胞中mRNA的含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于24 h成熟培养的卵母细胞(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在致密卵丘细胞包裹的卵母细胞的表达量均高于自然裸卵(DOs)(P<0.05),Zar1和Mater在24 h卵丘-卵母细胞复合体的表达量低于24 h裸卵(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在24 h共成熟卵丘细胞中表达量均高于未培养的卵丘细胞(P<0.05)。结果提示,这4个母源基因对卵母细胞成熟有重要影响,且可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,本研究结果为提高卵母细胞的体外成熟效率提供了依据及理论基础。 展开更多
关键词 卵母细胞 卵丘细胞 裸卵 基因表达
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IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响 被引量:1
11
作者 林嘉鹏 唐淑红 +2 位作者 吴阳升 汪立芹 黄俊成 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期498-502,共5页
【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不... 【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P<0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P>0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。 展开更多
关键词 绵羊 冷冻精液 稀释液 IGF-Ι 顶体完整性 质膜完整性 DNA完整性
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BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析 被引量:1
12
作者 王静 石庆华 +4 位作者 林嘉鹏 陈博 汪立芹 赵云程 黄俊成 《中国草食动物》 CAS 2010年第5期5-9,共5页
卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和... 卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性,判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关,为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中,细胞质着蓝色的为BCB+,没着蓝色的为BCB-;并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mate(r胚胎必要的母体抗原)和Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同质量绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明:BCB染色筛选后,阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性高(P<0.01),这充分证明,BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞,这4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟有关。 展开更多
关键词 BCB染色 母源基因 荧光实时定量PCR
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补喂瘤胃液制备物对羔羊肠道黏膜及血浆中免疫球蛋白含量的影响 被引量:1
13
作者 吴婷婷 韩冰 +2 位作者 聂彪彪 董伟伟 杨开伦 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3811-3818,共8页
本试验旨在研究补喂瘤胃液制备物对羔羊肠道黏膜和血浆中免疫球蛋白含量的影响,探讨瘤胃液制备物对新生羔羊肠道黏膜免疫及体液免疫的影响。选取50只初生体重接近的新生羔羊为模型动物,随机分为5组,每组10只。试验组羔羊1日龄开始补喂... 本试验旨在研究补喂瘤胃液制备物对羔羊肠道黏膜和血浆中免疫球蛋白含量的影响,探讨瘤胃液制备物对新生羔羊肠道黏膜免疫及体液免疫的影响。选取50只初生体重接近的新生羔羊为模型动物,随机分为5组,每组10只。试验组羔羊1日龄开始补喂健康成年绵羊瘤胃液制备物[瘤胃液(Ⅰ)、灭菌瘤胃液(Ⅱ)、超声波破碎瘤胃液(Ⅲ)和灭菌超声波破碎瘤胃液(Ⅳ)],对照组羔羊补喂等量生理盐水,每天1次,连续5 d。在24日龄时每组选取3只羔羊屠宰,采集肠道黏膜;在羔羊14和28日龄时颈静脉采血并分离血浆。测定肠道黏膜及血浆中免疫球蛋白含量。结果显示:1)小肠黏膜蛋白质中,各试验组免疫球蛋白A(Ig A)、分泌型免疫球蛋白A(SIg A)和免疫球蛋白G(Ig G)总量均高于对照组。其中,试验Ⅲ组Ig A总量极显著高于对照组(P<0.01),显著高于其他试验组(P<0.05);试验组SIg A和Ig G总量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。总体来说,免疫球蛋白含量变化趋势为回肠>十二指肠>空肠,试验Ⅲ组免疫球蛋白总量较对照组增加较多。2)血浆中,羔羊28日龄时免疫球蛋白含量均高于14日龄。14日龄时试验各组血浆中Ig A含量差异不显著(P>0.05),但28日龄时试验Ⅰ组显著高于对照组(P<0.05),极显著高于其他试验组(P<0.01);试验各组Ig G含量在14和28日龄时差异均不显著(P>0.05)。结果表明,给新生羔羊补喂不同处理的瘤胃液制备物均能提高羔羊肠黏膜免疫能力,补喂超声波破碎瘤胃液效果最佳。 展开更多
关键词 瘤胃液制备物 新生羔羊 肠道黏膜 血浆 免疫球蛋白
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牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响
14
作者 林嘉鹏 王静 +4 位作者 赵云程 陈童 汪立芹 陈博 黄俊成 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第2期134-139,共6页
目的将处于生发泡期(GV期)和体外成熟期(IVM)的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻-解冻,对其卵裂率和囊胚率以及一些与发育相关基因的mRNA表达量进行评价。方法玻璃化冷冻GV期(n=224)和IVM期(n=235)牛卵母细胞,解冻后对其进行体外培养并采用quan... 目的将处于生发泡期(GV期)和体外成熟期(IVM)的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻-解冻,对其卵裂率和囊胚率以及一些与发育相关基因的mRNA表达量进行评价。方法玻璃化冷冻GV期(n=224)和IVM期(n=235)牛卵母细胞,解冻后对其进行体外培养并采用quantitative real time-PCR技术对冷冻-解冻后的GV和IVM期卵母细胞中Bax、Dnmt1、Hdac1、Cyclinb1、Cdc2和Cu Zn SOD等基因的mRNA表达量进行检测。结果 GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(14.7%~89.4%,34.5%~89.4%,P<0.001)及囊胚率(3.0%~28.4%,12.3%~28.4%,P<0.001)均极显著低于对照组(n=238),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率(14.7%~34.5%,P<0.001)和囊胚率(3.0%~12.3%,P<0.001)极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞;GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,Dnmt1和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因mRNA表达量变化不显著;对M期卵母细胞而言,Bax基因mRNA表达量极显著低于对照组(P<0.01),Cyclinb1、Cdc2和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因表达量没有发生显著变化。结论对牛GV期或IVM卵母细胞进行玻璃化冷冻可能会导致基因mRNA表达量降低,可能会对胚胎发育产生负面影响。 展开更多
关键词 玻璃化冷冻 基因表达 牛卵母细胞 发育能力
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绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达
15
作者 贺三刚 张宁 +2 位作者 张雪梅 刘明军 李文蓉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1-7,共7页
根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载... 根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。 展开更多
关键词 绵羊 Noggin基因 序列分析 原核表达
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静脉滴注心房利钠肽对阿勒泰羊血液生理生化指标的影响
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作者 陈勇 韩冰 +1 位作者 马维英 杨斌 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第7期35-41,共7页
心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)是利钠肽家族成员之一,具有促进人脂肪细胞脂解的作用。研究旨在通过静脉滴注ANP观察其对绵羊血液中脂肪、碳水化合物和蛋白质代谢指标的影响。试验选取11月龄阿勒泰大尾羊10只,试验第1~4天... 心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)是利钠肽家族成员之一,具有促进人脂肪细胞脂解的作用。研究旨在通过静脉滴注ANP观察其对绵羊血液中脂肪、碳水化合物和蛋白质代谢指标的影响。试验选取11月龄阿勒泰大尾羊10只,试验第1~4天为对照期,通过静脉滴注生理盐水100 mL/45 min;试验第5~8天为试验期,通过静脉按照25.0 ng/kg BW/min滴注合成的ANP生理盐水溶液100 mL/45min。试验的第2~4天和6~8天分别于滴注前(即0 min)、滴注后第15、30、45、60、90和120 min采集血液样本,用于测定血液生理生化指标。结果表明,静脉滴注ANP后,血液中甘油三酯(TG)的水平提高35.71%(P<0.001),游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平分别降低25.66%(P<0.001)、12.56%(P<0.001)、17.16%(P<0.001)和16.48%(P<0.001);血糖水平和乳酸脱氢酶(LDH)的活性分别降低7.83%(P=0.001)和10.37%(P<0.001);血液中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性分别降低10.46%(P=0.001)和14.02%(P<0.001),但血液尿素氮(BUN)水平无显著变化(P>0.05)。静脉滴注ANP可影响绵羊脂肪、蛋白质和糖代谢,具体机制需进一步研究。 展开更多
关键词 心房利钠肽 静脉滴注 绵羊 脂代谢 糖代谢 蛋白质代谢
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牛杀菌通透性增加蛋白N端在原核和真核细胞中的表达
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作者 姚楠 白杰 +2 位作者 张雪梅 吴卫东 李文蓉 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第5期592-597,共6页
比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和HEK293细胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白N端的功能奠定基础。采用RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白N端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达... 比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和HEK293细胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白N端的功能奠定基础。采用RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白N端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pLEX-MCS后,再分别转化大肠杆菌BL21菌株、感染HEK293细胞进行重组蛋白的表达。Western blotting检测重组BPI蛋白N端在原核和真核细胞中的表达。结果显示:BPI蛋白N端的原核表达载体pGEX-BPI714和真核表达载体pLEX-BPI714导入原核和真核细胞中均得到表达。Western blotting检测显示,重组GST-BPI714融合蛋白在大肠杆菌中仅能低水平表达,且大都以包涵体形式存在;相反,构建的真核表达载体pLEX-BPI714转染到HEK293细胞后,特异的目的蛋白能高效表达。本研究成功构建了牛源BPI714原核表达载体和真核表达载体,重组BPI714在大肠杆菌中表达不稳定,在HEK293细胞中能够稳定表达。 展开更多
关键词 BPI 原核表达 真核表达
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早期补喂瘤胃液对羔羊血浆免疫球蛋白、细胞因子和小肠黏膜免疫相关细胞的影响
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作者 吴婷婷 韩冰 +2 位作者 刘振 何周瑞 杨开伦 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3943-3951,共9页
本试验旨在研究早期补喂瘤胃液对羔羊血浆免疫球蛋白、细胞因子含量和小肠黏膜免疫相关细胞数量的影响。选取12只特克赛尔(Texel)初生羔羊,随机分成2组,每组6只。试验组羔羊出生后连续补喂瘤胃液14 d,每天1次,对照组羔羊补喂等量生理盐... 本试验旨在研究早期补喂瘤胃液对羔羊血浆免疫球蛋白、细胞因子含量和小肠黏膜免疫相关细胞数量的影响。选取12只特克赛尔(Texel)初生羔羊,随机分成2组,每组6只。试验组羔羊出生后连续补喂瘤胃液14 d,每天1次,对照组羔羊补喂等量生理盐水。羔羊7、14、21和28日龄时,颈静脉采血并分离血浆;28日龄时,屠宰收集肠道内容物。测定血浆中免疫球蛋白[免疫球蛋白A(Ig A)和免疫球蛋白G(Ig G)]、细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)],肠道内容物中Ig G和免疫球蛋白Fc片段(Fc)含量。结果表明:试验组21日龄血浆中Ig A和Ig G含量显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),其他日龄组间差异不显著(P>0.05);试验组血浆中IL-1β和IL-6含量较对照组高,但差异不显著(P>0.05);试验组血浆TNF-α含量在14日龄时显著高于对照组(P<0.05),在其他日龄差异不显著(P>0.05);试验组羔羊血浆IFN-γ含量低于对照组,但差异不显著(P>0.05);给新生羔羊补喂瘤胃液对28日龄羔羊肠道内容物中Ig G和Fc含量无显著影响(P>0.05);试验组肠道上皮内淋巴细胞数量较对照组增加,尤其在回肠,与对照组差异显著(P<0.05);肠道肥大细胞数量各肠段组间无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,早期补喂瘤胃液对羔羊体液免疫无显著影响,可在一定程度上增强由免疫细胞介导的免疫功能;早期补喂瘤胃液对羔羊小肠转运母源免疫球蛋白无显著影响;早期补喂瘤胃液能刺激羔羊小肠黏膜免疫系统的发育,使免疫屏障功能尽早完善。 展开更多
关键词 新生羔羊 瘤胃液 血浆 免疫球蛋白 细胞因子 黏膜免疫相关细胞
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Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
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作者 刘莉 林嘉鹏 +3 位作者 吴阳升 汪立芹 田永芝 黄俊成 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1102-1106,共5页
为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达... 为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白质,计算转染率。结果表明Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒直径在100 nm左右,结构为六边形。200μg/ml的纳米颗粒浓度下细胞活性为87%,达到500μg/ml时细胞活性快速降至44%;DNA与LDH的质量比为4/50时转染率达到11.17%,质量比为10/50时,转染效率为3.93%;DNA与LDH作用时间在15 min时转染率为6.93%,30 min时反而下降至4.8%;转染细胞培养24 h时转染率达到17.4%,72 h后下降至3.7%。纳米颗粒的分子较小,比较容易被细胞膜胞吞,并且Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒能有效地与eGFP质粒相结合;在DNA与LDH质量比4/50的情况下,结合能力最高;最佳结合时间为15 min;转染时间在48 h时效果最好。HEK 293T细胞对Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒的最优耐受浓度为200μg/ml;同样条件下C2C12细胞的转染效率比HEK 293T细胞的转染效率高。 展开更多
关键词 Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒 基因转染 载体
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绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究 被引量:5
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作者 安静 张雪梅 +1 位作者 刘晨曦 刘明军 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第4期15-21,共7页
【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区,构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体,分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX... 【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区,构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体,分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒,并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞,并用重组慢病毒使其感染,建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线,分析过表达IGF1对绵羊成肌细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518 bp的IGF1 CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体,其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示,IGF1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达,细胞生长曲线显示,稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快(第1天差异显著(P<0.05),第2~6天差异极显著(P<0.01));细胞周期测定结果显示,稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期,且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。 展开更多
关键词 绵羊IGF1基因 慢病毒表达载体 细胞生长曲线
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