生物活性因子对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响 被引量：2

1

作者 施巧婷 黄俊成 +4 位作者 杨梅 王立虎 李辉 玛依拉 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期131-135,共5页

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性... 免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性因子。结果表明ICP在浓度为 50 0ng/ml时对卵母细胞成熟有抑制作用 ,对胚胎发育无明显作用 ;EGF( 50ng/ml) 展开更多

关键词 牛 卵母细胞 胚胎 免疫活性肽 表皮生长因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

绵羊体细胞核移植实验研究 被引量：2

2

作者 王立虎 黄俊成 +5 位作者 杨梅 张家新 施巧婷 李辉 王红梅 郭志勤 《草食家畜》 2001年第2期17-19,共3页

用成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代。将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MⅡ期去核卵母细胞中 ,重构胚经电融合与化学激活后 ,在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下进行体外培养 (IVC)。用细胞松驰素B法与... 用成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代。将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MⅡ期去核卵母细胞中 ,重构胚经电融合与化学激活后 ,在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下进行体外培养 (IVC)。用细胞松驰素B法与离子霉素 +6-DMAP法在电融合后进行化学激活。重构胚卵裂率分别为 37.8%与 4 3.8% ( 51/135与 81/185) ,囊 /桑堪胚率分别为9.8%和 12 .3% ( 5/51和 10 /81)。在融合电压 1.5Kv/cm、持续时间 30us、脉冲次数为 2次的条件下 ,孤雌激活胚胎的卵裂率和囊 /桑堪胚率分别为 81.0 %和 12 .9%。 展开更多

关键词 绵羊 体细胞 核移植 克隆 电融合 化学激活方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

建立高效的转基因动物鉴定技术体系 被引量：1

3

作者 李文蓉 武坚 +3 位作者 刘明军 黄俊成 杨冬梅 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期45-50,共6页

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PC... 转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便。 展开更多

关键词 转基因动物鉴定 PCR 酶切

在线阅读 下载PDF 职称材料

加速胚胎移植技术产业化促进我国养牛业发展 被引量：6

4

作者 郭志勤 《中国工程科学》 2000年第3期12-17,共6页

从我国养牛业的现状和存在的主要问题 ,指出养牛业需要大力发展 ,当前必须大量引种和繁殖种牛。而胚胎移植是引种的一种最好手段 ,具有方法简便、成本低、缩短改良时间、减少疾病传播等优点。同时 ,进一步分析了我国胚胎移植技术的研究... 从我国养牛业的现状和存在的主要问题 ,指出养牛业需要大力发展 ,当前必须大量引种和繁殖种牛。而胚胎移植是引种的一种最好手段 ,具有方法简便、成本低、缩短改良时间、减少疾病传播等优点。同时 ,进一步分析了我国胚胎移植技术的研究概况 ,阐明了胚胎移植的主要技术关键及产业化的必要性和可能性。并根据我国养牛业的现状 ,提出奶牛。 展开更多

关键词 胚胎移植 产业化 养牛业 牛 繁育 中国

在线阅读 下载PDF 职称材料

乳蛋白基因结构及乳腺生物反应器研究进展 被引量：4

5

作者 刘明军 《草食家畜》 1998年第1期17-22,共6页

本文回顾了到目前为止国内外有关乳蛋白基因的结构、表达调控和动物乳腺生物反应器的研究进展。介绍了几种外源基因乳腺表达构件的建立方法。分析了目前通过动物乳腺表达生产药用蛋白尚存在的问题、影响因素和发展前景。

关键词 动物生物反应器 乳蛋白基因 动物乳腺表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡沙门氏菌外膜蛋白的免疫效果观察 被引量：7

6

作者 成进 李文蓉 +2 位作者 谷文喜 沙依然古丽 依米提 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第1期21-24,共4页

用含EDTA的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白(OMP) ,经琼脂扩散试验检测,与同源株抗血清出现特异性沉淀线,与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线,经SDS_PAGE分析,OMP抗原所含的蛋白质分子量介于14 ～67kD 之间,并用电洗脱方法分别... 用含EDTA的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白(OMP) ,经琼脂扩散试验检测,与同源株抗血清出现特异性沉淀线,与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线,经SDS_PAGE分析,OMP抗原所含的蛋白质分子量介于14 ～67kD 之间,并用电洗脱方法分别制备了分子量为20 ～30kD、30～43kD和43～67kD的OMP抗原组分,并将其用于免疫攻毒试验,结果表明,OMP铝剂苗对鸡的死亡保护率为89.4 % ,油剂苗组为97.5% 。 展开更多

关键词 鸡沙门氏菌 外膜蛋白 免疫效果

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡伤寒白痢沙门氏菌灭活菌苗的研制 被引量：10

7

作者 成进 沙依然古丽 +3 位作者 谷文喜 李文蓉 依米提 王泉 《西北农业学报》 CSCD 2000年第1期20-23,共4页

由鸡沙门氏菌株 C79-1 3和 C79-2 0及新疆分离株 AS97-1 9和 AS96-4四株菌 ,经自制的改良硫代硫酸钠培养基 ,通气搅拌培养 ,甲醛灭活制成氢氧化铝佐剂苗 ,经免疫接种健康鸡。免疫后 2 1 d抗体水平达到最高 ,经 ANAE方法和 T淋巴细胞 E... 由鸡沙门氏菌株 C79-1 3和 C79-2 0及新疆分离株 AS97-1 9和 AS96-4四株菌 ,经自制的改良硫代硫酸钠培养基 ,通气搅拌培养 ,甲醛灭活制成氢氧化铝佐剂苗 ,经免疫接种健康鸡。免疫后 2 1 d抗体水平达到最高 ,经 ANAE方法和 T淋巴细胞 E花环方法检测 ,免疫组的细胞免疫水平明显高于非免疫对照组 ,差异极显著 ,1 0 LD剂量强毒株攻菌试验 ,死亡保护率达 94 .7%,免疫组分离菌率为 3 .1 %,表明该苗具有良好的安全性和免疫效果。 展开更多

关键词 鸡伤寒沙门氏菌 鸡白痢沙门氏菌 鸡沙门氏菌灭活菌苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同成熟时间对牛卵母细胞发育及去核效率的影响 被引量：9

8

作者 施巧婷 黄俊成 +4 位作者 杨梅 张家新 王力虎 李辉 郭志勤 《草食家畜》 2001年第2期1-3,共3页

本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明 ,牛卵母细胞在成熟 16h时极体出现率达 69.3%、分裂率为 54.7%、囊胚率仅为 6.2 5% ;而成熟 2 4h时极体出现率达 ... 本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明 ,牛卵母细胞在成熟 16h时极体出现率达 69.3%、分裂率为 54.7%、囊胚率仅为 6.2 5% ;而成熟 2 4h时极体出现率达 76.9%、分裂率为 70 .0 %、囊胚率为2 7.7% ,差异均显著 (P <0 .0 5)。成熟 16h的卵母细胞刚刚排出第一极体 ,细胞核与极体非常近 ,此时去核率较高 ;而成熟 2 展开更多

关键词 牛 卵母细胞 体外成熟 第一极体 细胞发育 去核效率 成熟时间

在线阅读 下载PDF 职称材料

精子载体介导法生产转基因绵羊的研究 被引量：10

9

作者 武坚 刘明军 +3 位作者 李文蓉 黄俊成 史洪才 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期186-190,202,共6页

采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原... 采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原位PCR结果证实牛、山羊和绵羊的精子经处理能携带外源基因 ,精子携带外源DNA的比率分别为 :绵羊 2 7.1 2 %、山羊 30 .57%、牛 31 .1 6 % ;同时外源基因进入到精子细胞并定位于核及其外周区域。研究还提示使用精子载体介导法时必须充分洗涤精液以除去精清 。 展开更多

关键词 精子载体介导 转基因 乳腺表达 药用蛋白质

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同环境对山羊超排效果的影响 被引量：12

10

作者 黄俊成 张健 +3 位作者 牛志宏 宋小兰 王绍允 郭志勤 《草食家畜》 1998年第4期32-34,共3页

本试验比较了不同环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出，塔城本地山羊与奶山羊在呼图壁的起数排卵效果无明显差异（P＞0．05），而与奶山羊在塔城的超数排卵效果有显著差异（P＜0．05），并且，同一批奶山羊在塔城... 本试验比较了不同环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出，塔城本地山羊与奶山羊在呼图壁的起数排卵效果无明显差异（P＞0．05），而与奶山羊在塔城的超数排卵效果有显著差异（P＜0．05），并且，同一批奶山羊在塔城地区种羊场和在呼图壁种牛场分别进行超数排卵处理，结果排卵效果有极显著的差异（P＜0．01）。这主要是由于塔城地区1998年9-10月份气温比呼图壁1997年9-10月份气温偏低，从而影响了奶山羊的超数排卵效果。 展开更多

关键词 山羊 超数排卵 环境气候

在线阅读 下载PDF 职称材料

山羊的超排处理及影响因素的研究 被引量：6

11

作者 黄俊成 史洪才 +3 位作者 杨梅 武坚 杨冬梅 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期107-109,共3页

本试验比较了FSH的剂量、供体羊的年龄与经产情况、不同季节及环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出 ,不同批号的FSH超数排卵用的剂量不完全相同 ,并且同一批号的FSH剂量在其一定的剂量范围内变化时 ,对本地山羊和... 本试验比较了FSH的剂量、供体羊的年龄与经产情况、不同季节及环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出 ,不同批号的FSH超数排卵用的剂量不完全相同 ,并且同一批号的FSH剂量在其一定的剂量范围内变化时 ,对本地山羊和奶山羊的超数排卵效果影响不显著 (P >0 .0 5) ;经产羊做供体的超排效果明显好于青年羊 (P <0 .0 5) ;在供体羊体况良好的情况下 ,经合适的同期化及超排处理 ,春季山羊的超排效果并不比秋季差 ;塔城本地山羊与奶山羊在呼图壁的超数排卵效果无明显差异 (P >0 .0 5) ,而与奶山羊在塔城的超数排卵效果有显著差异 (P <0 .0 5) ,并且 ,同一批奶山羊在塔城地区种羊场和在呼图壁种牛场分别进行超数排卵处理 ,结果排卵效果有极显著的差异 (P <0 .0 1 ) ,这主要是由于塔城地区 1 0月份气温比呼图壁的气温偏低 。 展开更多

关键词 山羊 超数排卵 FSH 年龄 季节 环境气候

在线阅读 下载PDF 职称材料

EDTA对绵羊精清中脱氧核糖核酸酶的抑制作用 被引量：6

12

作者 李文蓉 武坚 +1 位作者 史洪才 郭志勤 《草食家畜》 1999年第1期27-30,共4页

为提高精子与外源ＤＮＡ共孵育时结合ＤＮＡ的效率，弄清精清在这一过程中的作用，将与精清孵育后的外源ＤＮＡ样品进行琼脂糖核酸电泳，比较电泳行为的差异。结果证实，精清中含有脱氧核糖核酸酶能降解外源ＤＮＡ，在精清中加入一定浓... 为提高精子与外源ＤＮＡ共孵育时结合ＤＮＡ的效率，弄清精清在这一过程中的作用，将与精清孵育后的外源ＤＮＡ样品进行琼脂糖核酸电泳，比较电泳行为的差异。结果证实，精清中含有脱氧核糖核酸酶能降解外源ＤＮＡ，在精清中加入一定浓度的ＥＤＴＡ能有效地抑制该酶的作用，保护其中的外源ＤＮＡ。这为进一步改进精子载体转基因技术提供了实验依据。 展开更多

关键词 精清 外源DNA 降解 EDTA 抑制 绵羊

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用动物耳皮肤组织培养成纤维细胞的研究 被引量：12

13

作者 王红梅 黄俊成 +3 位作者 刘明军 王立虎 计巧灵 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期210-214,共5页

对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维... 对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维细胞出现及可进行传代时间上有所差别。对于在体细胞传代培养中出现的上皮样细胞与成纤维样细胞混合生长的问题根据两者贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5%的胰酶—EDTA对其进行不同时间的消化 ,将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。纯化的体细胞经数次传代培养后进行冷冻—解冻后仍具有正常的传代能力。对不同代次绵羊和牛的体细胞进行的核型分析表明 ,在体外培养至 2 0～ 30代 (绵羊胎儿细胞培养至 45代 ) 展开更多

关键词 皮肤 细胞系 体外培养

在线阅读 下载PDF 职称材料

移植方法和培养液对显微注射生产转基因小鼠的影响 被引量：1

14

作者 史洪才 玛依拉 +3 位作者 黄俊成 刘明军 李建华 郭志勤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第2期6-8,共3页

研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 %... 研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P<0 .0 5 ) ,差异显著。用 M2和改良的 M2培养液作为显微注射及移植工作液 ,体外培养的囊胚率分别为 17%和 35 % (P<0 .0 1) ,差异极显著 ,体内发育的情况也与这一结果相似 ,妊娠率分别为 35 .9%和 6 2 .5 % (P<0 .0 5 )。表明改良的 M2培养液的成分结构更适合小鼠胚胎发育的要求。 展开更多

关键词 转基因小鼠 显微注射 移植方法 培养液 动物模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胰岛素原基因在转基因小鼠乳汁中的表达 被引量：1

15

作者 黄俊成 史洪才 +3 位作者 李文蓉 武坚 杨冬梅 郭志勤 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期65-68,共4页

将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 ... 将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 2只小鼠泌乳 ,经放免检测小鼠乳汁中人胰岛素原的质量浓度分别为 37.44mg/L和 39.99mg/L。另外 3只异常消瘦而不孕 ,其中 展开更多

关键词 人胰岛素原基因 转基因小鼠 基因表达 乳汁 糖尿

在线阅读 下载PDF 职称材料

氨基酸对绵羊体外受精胚胎发育的影响 被引量：4

16

作者 张家新 侯健 +3 位作者 史洪才 玛依拉 陈玉琦 郭志勤 《草食家畜》 2000年第3期27-30,共4页

本文研究了Eagle氏氨基酸对绵羊胚胎发育的影响：①比较了不同浓度Eagle氏非必需氨基酸(NEAA)(0、025×、05×、1×)对绵羊胚胎的影响，结果表明，NEAA可明显提高绵羊胚胎的囊胚发育率，其中1×NEAA组的囊胚率为42％。

关键词 绵羊 体外受精 氨基酸 培养液 胚胎发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

超排处理奶山羊获得可注射受精卵 被引量：4

17

作者 黄俊成 张健 +5 位作者 王安江 李强 史洪才 牛志宏 玛依拉 郭志勤 《黑龙江动物繁殖》 1999年第1期3-5,共3页

通过对奶山羊在春秋两季分别进行同期发情及超排处理发现．季节对奶山羊的超排效果影响不大．在注射LH后50-54h是奶山羊原核注射的最佳时期。

关键词 奶山羊 排卵 超数排卵 显微注射

在线阅读 下载PDF 职称材料

家畜胚胎冷冻保存的研究进展 被引量：19

18

作者 史洪才 《草食家畜》 1999年第1期31-34,共4页

胚胎的冷冻保存已成为许多家畜胚胎移植中的常规技术环节之一，许多专家学者对冷冻方法进行了广泛深入的研究。在最近几年间，有关家畜胚胎冷冻保存的研究主要集中在冷冻／解冻方法（一步细管法，玻璃化法，快速冷冻法）上，增加胚胎解... 胚胎的冷冻保存已成为许多家畜胚胎移植中的常规技术环节之一，许多专家学者对冷冻方法进行了广泛深入的研究。在最近几年间，有关家畜胚胎冷冻保存的研究主要集中在冷冻／解冻方法（一步细管法，玻璃化法，快速冷冻法）上，增加胚胎解冻后的活力以及摸索一种有效的低温保护液（４—１０），对不同低温保护剂的理化性质的研究，添加各种大分子物质以及植物和动物的抗冻蛋白的分离和应用，这些都给胚胎冷冻增加了新的内容。本文综述了家畜胚胎冷冻保存研究的新进展。 展开更多

关键词 胚胎 冷冻保存 玻璃化冷冻 抗冻蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

山羊超排效果分析 被引量：3

19

作者 范进江 魏荣安 +7 位作者 张恒堂 陈玲香 何其宏 程建兵 刘革胜 张富强 黄俊成 张健 《草食家畜》 2000年第3期19-20,共2页

使用不同批号及剂量的FSH对山羊进行超排处理，FSH可直接影响超排的效果。因此，在使用不同批号及剂量的FSH时，应先做小群预试。

关键词 山羊 超排处理 批量 剂量 FSH

在线阅读 下载PDF 职称材料

三种不同激活方法对牛卵母细胞孤雌激活效果的研究 被引量：1

20

作者 杨梅 黄俊成 +2 位作者 王立虎 李辉 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期203-205,共3页

本试验以体外成熟培养 (IVM ) 2 2～ 2 4h的牛卵母细胞为对象 ,采用以下 3种激活方法 :①电激活 ( 2次直流脉冲 ,时间 30us,强度 1 .8KV/cm ,时间间隔 70us) +环己酰胺 +细胞松弛素B法 ;②电激活 (同上 ) +离子霉素 + 6 -DMAP(二甲基 -... 本试验以体外成熟培养 (IVM ) 2 2～ 2 4h的牛卵母细胞为对象 ,采用以下 3种激活方法 :①电激活 ( 2次直流脉冲 ,时间 30us,强度 1 .8KV/cm ,时间间隔 70us) +环己酰胺 +细胞松弛素B法 ;②电激活 (同上 ) +离子霉素 + 6 -DMAP(二甲基 -氨基嘌呤 )法 ;③ 7%乙醇 +环己酰胺直接激活的方法对体外成熟牛卵母细胞进行孤雌激活实验 ,观察激活后 48h卵母细胞的早期分裂情况。结果表明 ,方法①的卵母细胞分裂率为 31 .32 % ( 2 6 /83) ;方法②的分裂率为 2 7.5% ( 32 /1 1 6 ) ;方法③的分裂率为44.1 1 % ( 45/1 0 2 ) ,与前两种方法相比差异显著 ( p <0 .0 5)。 展开更多

关键词 牛 卵母细胞 孤雌激活

在线阅读 下载PDF 职称材料