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一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
被引量：
3
1
作者
张磊
韩延峰
+4 位作者
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第1期100-105,共6页
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和Dn...
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和DnaseI的消化液,经弹拨分散、手法震荡,提前一次离心后种植培养的皮质神经元。接种后的第1、3、5、6、7 d,显微镜观察细胞形态,第7 d用免疫荧光法对神经元细胞进行鉴定以及检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果与传统的胰酶提取方法相比,改良后获得的皮质神经元生长状态更优,突触发育良好,双极神经元形态典型,杂质细胞及碎片含量少,背景干净,且具有高纯度和高存活率的特性。结论本研究在组织细胞分离消化,弹拨分散、手法震荡,提前一次离心,多重细节方面进行了探索与改良后成功建立了一种结果稳定,简单可行的皮质神经元原代培养方法,是研究神经科学领域较为理想的模型。
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关键词
大脑皮质神经元
Tryple
Express
神经元特异性烯醇化酶
乳酸脱氢酶
免疫荧光染色
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职称材料
精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
被引量：
1
2
作者
张磊
戴朝
+4 位作者
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第2期182-186,共5页
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶...
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。
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关键词
皮质神经元细胞
自噬
自噬流
OGD/R
检测
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职称材料
题名
一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
被引量：
3
1
作者
张磊
韩延峰
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
机构
石河子大学医学院第一附属医院神经外科
新疆生产建设兵团第十师疾病预防控制中心
新疆生产建设兵团
第十
师
北屯医院
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第1期100-105,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81960222)
新疆兵团中青年科技创新领军人才(2020CB011)
石河子大学国际科技合作促进计划项目(GJHZ201704)。
文摘
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和DnaseI的消化液,经弹拨分散、手法震荡,提前一次离心后种植培养的皮质神经元。接种后的第1、3、5、6、7 d,显微镜观察细胞形态,第7 d用免疫荧光法对神经元细胞进行鉴定以及检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果与传统的胰酶提取方法相比,改良后获得的皮质神经元生长状态更优,突触发育良好,双极神经元形态典型,杂质细胞及碎片含量少,背景干净,且具有高纯度和高存活率的特性。结论本研究在组织细胞分离消化,弹拨分散、手法震荡,提前一次离心,多重细节方面进行了探索与改良后成功建立了一种结果稳定,简单可行的皮质神经元原代培养方法,是研究神经科学领域较为理想的模型。
关键词
大脑皮质神经元
Tryple
Express
神经元特异性烯醇化酶
乳酸脱氢酶
免疫荧光染色
Keywords
cerebral cortical neurons
tryple express
neuron-specific enolase NSE
LDH
immunofluorescence staining
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
被引量：
1
2
作者
张磊
戴朝
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
机构
石河子大学第一附属医院神经外科
新疆生产建设兵团
第十
师
北屯医院外科
新疆生产建设兵团第十师疾病预防控制中心
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第2期182-186,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81960222)
石河子大学国际科技合作促进计划(编号:GJHZ201704)
兵团财政科技计划项目(编号:2020CB011)。
文摘
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。
关键词
皮质神经元细胞
自噬
自噬流
OGD/R
检测
Keywords
cortical neuron cells
autophagy
autophagic flux
OGD/R
detect
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
张磊
韩延峰
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022
3
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职称材料
2
精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
张磊
戴朝
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022
1
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