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多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量:3
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作者 吴小霞 赵莉 +11 位作者 王冰洁 班万里 穆尼拉·特列吾汗 马长丽 乌云花 布于其其格 陈云英 段兰利 岳城 徐晶 艾沙江 张壮志 《动物医学进展》 北大核心 2021年第8期1-6,共6页
建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为... 建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑。以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪。结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1:10000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原。表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 双抗体夹心ELISA 粪抗原
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细粒棘球绦虫体外不同发育时期Eg M9基因差异表达研究 被引量:3
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作者 陈云英 王冰洁 +12 位作者 潘星羽 余婉容 吾力江·卡马力 赵莉 班万里 刘帅 郭璐 段兰利 徐晶 穆尼拉·特列吾汗 喻昌盛 乌云花 张壮志 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期784-789,共6页
目的探究Eg M9基因在细粒棘球绦虫体外不同发育时期的表达情况。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴(protoscoleces,PSCs)向成虫方向发育;收集不同发育时期的虫体,通过H&E染色进行虫体形态学观察;运用荧光定量PCR方法,以β-Actin作为... 目的探究Eg M9基因在细粒棘球绦虫体外不同发育时期的表达情况。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴(protoscoleces,PSCs)向成虫方向发育;收集不同发育时期的虫体,通过H&E染色进行虫体形态学观察;运用荧光定量PCR方法,以β-Actin作为内参基因,使用2^(-ΔΔCt)法计算虫体不同发育时期Eg M9基因的表达情况,用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析。结果最终成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴向成虫方向发育的体外培养模型,培养虫体至50 d;体外培养的虫体在第50 d时可产生3个节片;体外培养第50 d的虫体Eg M9基因的表达量最高,与其他时期虫体表达量差异有统计学意义(F=11.32,P<0.05)。结论Eg M9基因是细粒棘球绦虫成虫阶段高表达的基因,可能与虫体性器官发育有关。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 体外培养 Eg M9 荧光定量PCR
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线粒体NADH1基因和微卫星标记在棘球绦虫感染检测中的应用
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作者 吕凤军 王冰洁 +11 位作者 丁伟强 赵莉 班万里 段兰利 穆尼拉·特列吾汗 吴小霞 徐晶 陈云英 郭涛 王方 乌云花 张壮志 《草食家畜》 2020年第4期43-51,共9页
(目的)利用线粒体NADH脱氢酶亚基1基因(NADH1)和微卫星标记进行棘球绦虫感染的基因型和遗传多样性分析。(方法)对不同地区牛、羊肝/肺包囊(8份)、野生鼠肝包囊(4份)和狐狸肠道寄生棘球绦虫成虫(2份)共14个样本提取DNA后,分别用棘球绦虫... (目的)利用线粒体NADH脱氢酶亚基1基因(NADH1)和微卫星标记进行棘球绦虫感染的基因型和遗传多样性分析。(方法)对不同地区牛、羊肝/肺包囊(8份)、野生鼠肝包囊(4份)和狐狸肠道寄生棘球绦虫成虫(2份)共14个样本提取DNA后,分别用棘球绦虫线粒体NADH1基因和微卫星标记进行检测。(结果)PCR扩增分别得到大小约为510 bp的NADH1核苷酸片段和200~300 bp不等的微卫星标记片段,产物的长度与引物设计的预期产物长度一致;序列比对发现不同地区、不同宿主来源的样品序列存在碱基的颠/转换和碱基缺失现象;测序发现8份牛、羊肝/肺包囊样本均为细粒棘球蚴G1基因型感染,4份野生鼠肝包囊均为多房棘球蚴感染,2份狐狸肠道寄生棘球绦虫样本为多房棘球绦虫感染。(结论)线粒体NADH1基因和微卫星标记均适用于棘球绦虫种间和种内的鉴别、分类及系统进化分析研究。 展开更多
关键词 棘球绦虫 NADH脱氢酶亚基1基因 微卫星
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Eg犬粪抗原与多克隆抗体结合的条件筛选与纯化
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作者 徐晶 班万里 +11 位作者 王冰洁 赵莉 穆尼拉·特列吾汗 吴小霞 陈云英 段兰利 艾沙江 郭涛 王方 乌云花 布于其其格 张壮志 《草食家畜》 2020年第3期39-50,共12页
包虫病又称棘球蚴病,此病是由细粒棘球绦虫引起的一类严重的人兽共患寄生虫病,它严重危害人类与家畜的健康,并对畜牧业造成危害与阻碍。了解终末宿主犬科动物粪样中细粒棘球绦虫虫体蛋白组成,寻找特异性的靶抗原能对包虫病的预防和提高... 包虫病又称棘球蚴病,此病是由细粒棘球绦虫引起的一类严重的人兽共患寄生虫病,它严重危害人类与家畜的健康,并对畜牧业造成危害与阻碍。了解终末宿主犬科动物粪样中细粒棘球绦虫虫体蛋白组成,寻找特异性的靶抗原能对包虫病的预防和提高双抗夹心ELISA检测的敏感性与特异性提供重要依据。本文通过对缓冲溶液的筛选,多克隆血清与粪抗原结合条件的筛选,确定抗体与抗原结合最佳配比浓度,用亲和层析与凝胶层析对抗原抗体结合物纯化分离,并检测纯化后样品的敏感性和特异性。最终确定PBST和柠檬酸缓冲液都能用于溶解犬粪中细粒棘球绦虫可溶性抗原,且抗原抗体最佳结合浓度选用溶液体积不变情况下,多克隆血清占比20%与粪抗原结合。抗原抗体结合物通过凝胶层析柱在A峰(45.5~50.5 min附近)接收的样品中含有纯化的抗原抗体结合物。本研究的结果与方法可以为以后筛选鉴定靶抗原,提高粪抗原ELISA检测试剂盒的敏感性与特异性提供重要依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 棘球蚴 抗原抗体结合物
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