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miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡
被引量：
5
1
作者
徐华
买尔哈巴·阿不力孜
+1 位作者
赵婉竹
何丽娟
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期285-294,共10页
近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertol...
近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)损伤中的靶向调控机制。MTT法、乳酸脱氢酶法和TUNEL法结果显示,CSE干预后的TM4细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞毒性显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);RT-PCR和Western印迹结果证明,10%CSE干预TM4细胞后,凋亡前体基因p53、促凋亡基因Bak和胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白质表达水平显著上调(P<0.05);在TM4细胞中转染miRNA-138-5p过表达质粒后同样进行CSE干预,结果显示,支持细胞存活率较转染前显著升高(P<0.05),凋亡阳性细胞数较转染前显著降低(P<0.05),凋亡前体p53基因、促凋亡基因Bak和Caspase-3的mRNA和蛋白质表达较转染前显著下调(P<0.05);沉默miRNA-138-5p后,Bak、胱天蛋白酶3的mRNA和蛋白质表达水平显著增加(P<0.05);在线数据库分析显示,miRNA-138-5p与胱天蛋白酶3具有较高的匹配预测值,双荧光素酶报告基因结果显示,Bak未结合至miRNA-138-5p,而胱天蛋白酶3可以靶向结合至miRNA-138-5p。以上结果提示,miRNA-138-5p可靶向调控胱天蛋白酶3,减缓吸烟所致睾丸支持细胞凋亡,具有支持细胞的保护作用。
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关键词
香烟烟雾暴露
TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)
miRNA-138-5p
在线阅读
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职称材料
miRNA-138-5p过表达对香烟烟雾暴露所致大鼠睾丸支持细胞损伤的调控作用
2
作者
仲春雪
徐华
+1 位作者
张晨
何丽娟
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期692-701,共10页
目的:探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用,阐明微小RNA-138-5p(miR-138-5p)在此过程中发挥的保护作用。方法:200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组(每天给予每只大鼠10、20和30支香烟),分别于2、4...
目的:探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用,阐明微小RNA-138-5p(miR-138-5p)在此过程中发挥的保护作用。方法:200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组(每天给予每只大鼠10、20和30支香烟),分别于2、4、6、8和12周麻醉处死动物,检测各组大鼠血浆中抑制素B水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平,免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸支持细胞中波形蛋白表达水平。体外培养睾丸TM4细胞(对照组),将制备好的香烟烟雾提取物(CSE)原液稀释至5%和10%,并处理TM4细胞,作为5%CSE组和10%CSE组。采用MTT法检测各组细胞存活率和各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞凋亡率。睾丸TM4细胞转染过表达miR-138-5p质粒后,分为对照组、5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组,采用上述方法检测各组细胞生存率、细胞中LDH活性和细胞凋亡率。结果:与对照组比较,各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低;与对照组比较,第8周高剂量香烟暴露组和第12周各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低(P<0.05)。光镜下观察,对照组大鼠睾丸细胞胞质出现阳性黄染,香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸组织波形蛋白表达水平逐渐降低;与对照组比较,不同时间高剂量香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸波形蛋白表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,第8周时中和高剂量香烟暴露组及12周时各剂量香烟暴露组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平均降低(P<0.05)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组睾丸TM4细胞存活率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组大鼠睾丸TM4细胞中LDH活性降低(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-138-5p后,与对照组比较,5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率降低(P<0.05或P<0.01);与5%CSE组比较,5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05或P<0.01);与10%CSE CSE组比较,10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:长期大量香烟烟雾暴露可引起睾丸支持细胞不可逆性损伤,miR-138-5p在其中发挥了重要的保护作用。
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关键词
香烟烟雾暴露
睾丸
支持细胞
细胞损伤
微小RNA138-5p
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职称材料
题名
miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡
被引量：
5
1
作者
徐华
买尔哈巴·阿不力孜
赵婉竹
何丽娟
机构
新疆医科大学
第一附属医院生殖助孕中心
新疆医科大学
公共卫生
学院
社会医学教研室
新疆医科大学
公共卫生
学院
卫生毒理学教研室
新疆医科大学药学院博士后流动站
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期285-294,共10页
基金
新疆特殊环境与健康研究重点实验室开放课题项目(No.SKL-SEHR-2021-04)
国家自然科学基金(No.82260651)
博士后科研启动金资助。
文摘
近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)损伤中的靶向调控机制。MTT法、乳酸脱氢酶法和TUNEL法结果显示,CSE干预后的TM4细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞毒性显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);RT-PCR和Western印迹结果证明,10%CSE干预TM4细胞后,凋亡前体基因p53、促凋亡基因Bak和胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白质表达水平显著上调(P<0.05);在TM4细胞中转染miRNA-138-5p过表达质粒后同样进行CSE干预,结果显示,支持细胞存活率较转染前显著升高(P<0.05),凋亡阳性细胞数较转染前显著降低(P<0.05),凋亡前体p53基因、促凋亡基因Bak和Caspase-3的mRNA和蛋白质表达较转染前显著下调(P<0.05);沉默miRNA-138-5p后,Bak、胱天蛋白酶3的mRNA和蛋白质表达水平显著增加(P<0.05);在线数据库分析显示,miRNA-138-5p与胱天蛋白酶3具有较高的匹配预测值,双荧光素酶报告基因结果显示,Bak未结合至miRNA-138-5p,而胱天蛋白酶3可以靶向结合至miRNA-138-5p。以上结果提示,miRNA-138-5p可靶向调控胱天蛋白酶3,减缓吸烟所致睾丸支持细胞凋亡,具有支持细胞的保护作用。
关键词
香烟烟雾暴露
TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)
miRNA-138-5p
Keywords
cigarette smoke exposure(CSE)
testicular Sertoli cells of normal mice
miRNA-138-5p
分类号
R114 [医药卫生—卫生毒理学]
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职称材料
题名
miRNA-138-5p过表达对香烟烟雾暴露所致大鼠睾丸支持细胞损伤的调控作用
2
作者
仲春雪
徐华
张晨
何丽娟
机构
新疆医科大学
第五附属医院教学科研办公室和中心实验室
新疆医科大学
第一附属医院生殖助孕中心
新疆医科大学
公共卫生
学院
社会医学教研室
新疆医科大学药学院博士后流动站
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期692-701,共10页
基金
新疆维吾尔自治区科技厅特殊环境与健康研究重点实验室开放课题资助项目(SKL-SEHR-2021-05)。
文摘
目的:探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸支持细胞的损伤作用,阐明微小RNA-138-5p(miR-138-5p)在此过程中发挥的保护作用。方法:200只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中及高剂量香烟暴露组(每天给予每只大鼠10、20和30支香烟),分别于2、4、6、8和12周麻醉处死动物,检测各组大鼠血浆中抑制素B水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平,免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸支持细胞中波形蛋白表达水平。体外培养睾丸TM4细胞(对照组),将制备好的香烟烟雾提取物(CSE)原液稀释至5%和10%,并处理TM4细胞,作为5%CSE组和10%CSE组。采用MTT法检测各组细胞存活率和各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术和TUNEL法检测各组细胞凋亡率。睾丸TM4细胞转染过表达miR-138-5p质粒后,分为对照组、5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组,采用上述方法检测各组细胞生存率、细胞中LDH活性和细胞凋亡率。结果:与对照组比较,各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低;与对照组比较,第8周高剂量香烟暴露组和第12周各剂量香烟暴露组大鼠血浆中抑制素B水平降低(P<0.05)。光镜下观察,对照组大鼠睾丸细胞胞质出现阳性黄染,香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸组织波形蛋白表达水平逐渐降低;与对照组比较,不同时间高剂量香烟暴露组大鼠睾丸TM4细胞中睾丸波形蛋白表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,第8周时中和高剂量香烟暴露组及12周时各剂量香烟暴露组大鼠睾丸组织中miR-138-5p表达水平均降低(P<0.05)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组睾丸TM4细胞存活率明显降低(P<0.01)。与对照组比较,5%CSE组和10%CSE组大鼠睾丸TM4细胞中LDH活性降低(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-138-5p后,与对照组比较,5%CSE组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组、5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组、10%CSE组、10%CSE+Pri-miRNA-138-5p Ctrl组和10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率降低(P<0.05或P<0.01);与5%CSE组比较,5%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05或P<0.01);与10%CSE CSE组比较,10%CSE+Pri-miRNA-138-5p组大鼠睾丸TM4细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:长期大量香烟烟雾暴露可引起睾丸支持细胞不可逆性损伤,miR-138-5p在其中发挥了重要的保护作用。
关键词
香烟烟雾暴露
睾丸
支持细胞
细胞损伤
微小RNA138-5p
Keywords
Cigarette smoke exposure
Testis
Sertoli cells
Cell damage
MicroRNA-138-5p
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡
徐华
买尔哈巴·阿不力孜
赵婉竹
何丽娟
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
5
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职称材料
2
miRNA-138-5p过表达对香烟烟雾暴露所致大鼠睾丸支持细胞损伤的调控作用
仲春雪
徐华
张晨
何丽娟
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
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