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Klotho对滋养细胞侵袭的影响
被引量：
3
1
作者
薛筱蕾
成芳
+3 位作者
范翠芳
雷帝
胥保梅
蒋惠玲
《海南医学院学报》
CAS
2019年第10期754-757,共4页
目的:研究Klotho对绒膜外滋养细胞系HTR8/SVneo侵袭的影响。方法:用免疫组化检测子痫前期及正常孕妇胎盘组织Klotho蛋白表达情况。实验分组为对照组、Klotho重组蛋白组、Klotho siRNA组。Transwell小室法检测侵袭能力,Western Blot检测...
目的:研究Klotho对绒膜外滋养细胞系HTR8/SVneo侵袭的影响。方法:用免疫组化检测子痫前期及正常孕妇胎盘组织Klotho蛋白表达情况。实验分组为对照组、Klotho重组蛋白组、Klotho siRNA组。Transwell小室法检测侵袭能力,Western Blot检测细胞蛋白表达水平。结果:子痫前期胎盘组织Klotho表达水平明显低于正常胎盘组织。Klotho重组蛋白处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著增强、其表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达上调。Klotho siRNA处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱、其表达的MMP-2及MMP-9表达显著下调。结论:Klotho可能通过介导MMP-2和MMP-9的表达调节滋养细胞侵袭能力,为子痫前期发病机制的研究提供了新线索。
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关键词
子痫前期
KLOTHO
细胞侵袭
HTR-8/SVneo细胞
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职称材料
Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响
2
作者
薛筱蕾
胥保梅
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1528-1538,共11页
目的:探讨Klotho在子痫前期(PE)患者来源的胎盘外泌体(Exo)中的表达,阐明其对血管内皮细胞氧化应激的影响。方法:收集40例孕产妇的临床资料,其中正常妊娠(NP)者20名,PE患者20例,设为NP组和PE组,分离2组研究对象外周血中胎盘Exo。将oe-Kl...
目的:探讨Klotho在子痫前期(PE)患者来源的胎盘外泌体(Exo)中的表达,阐明其对血管内皮细胞氧化应激的影响。方法:收集40例孕产妇的临床资料,其中正常妊娠(NP)者20名,PE患者20例,设为NP组和PE组,分离2组研究对象外周血中胎盘Exo。将oe-Klotho和oe-NC质粒转染入人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,作为oe-Klotho组和oe-NC组,收集HTR-8/SVneo细胞Exo。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法和Western blotting法检测2组研究对象胎盘Exo和2组HTR-8/SVneo细胞Exo中Klotho mRNA及蛋白表达水平。取生长状态良好的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),按Exo来源不同将HUVECs分为PE-Exo组(与PE患者胎盘Exo共培养)、NP-Exo组(与NP胎盘Exo共培养)、oe-Klotho-Exo组(与转染oe-Klotho的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养)和oe-NC-Exo组(与转染oe-NC的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养)。采用透射电子显微镜(TEM)观察Exo形态表现,Western blotting法检测Exo标记分子CD63、TSG101和胎盘Exo标记分子PLAP蛋白表达水平以鉴定Exo,荧光显微镜观察HUVECs对Exo的摄取情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组HUVECs中一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,RT-qPCR法检测各组HUVECs中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HUVECs中eNOS蛋白表达水平。结果:与NP组比较,PE组患者收缩压和舒张压升高(P<0.05),新生儿体质量和胎盘质量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。TEM观察,来源于NP组和PE组研究对象的胎盘Exo均呈圆形和椭圆形的囊泡盘状结构,包膜完整,形状相似,直径为50~100 nm;2组研究对象胎盘Exo均高表达Exo标记蛋白CD63和TSG101及胎盘Exo特异性蛋白PLAP。纳米示踪分析(NTA)检测,胎盘Exo的粒径为50~200 nm,提示由外周血分离的囊泡均是胎盘来源Exo。TEM、Western blotting和NTA检测,来源于oe-NC组和oe-Klotho组滋养层细胞的囊泡具有Exo的典型结构、分子标志物和粒径大小特征。HUVECs中均可见到明显的Exo绿色荧光表达,提示Exo可被HUVECs摄取。ELISA法检测,与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中NO水平和SOD活性均明显降低(P<0.05或P<0.01),ROS和MDA水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-Klotho-Exo组HUVECs中NO水平和SOD活性升高(P<0.05),ROS和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。RT-qPCR法检测,与NP组比较,PE组研究对象胎盘Exo中Klotho mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中eNOS mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与oe-NC组比较,oe-Klotho组滋养层细胞Exo中Klotho mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-klotho-Exo组HUVECs中eNOS mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与NP组比较,PE组研究对象胎盘Exo中Klotho蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中eNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与oe-NC组比较,oe-Klotho组滋养层细胞Exo中Klotho蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-Klotho-Exo组HUVECs中eNOS蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:来源于PE患者的胎盘Exo可能通过抑制HUVECs中NO的产生和促进氧化应激反应以损伤内皮细胞功能,过表达Klotho的滋养层细胞Exo可减少HUVECs中NO的产生和氧化应激水平。
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关键词
KLOTHO蛋白
子痫前期
外泌体
血管内皮细胞
氧化应激
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职称材料
题名
Klotho对滋养细胞侵袭的影响
被引量：
3
1
作者
薛筱蕾
成芳
范翠芳
雷帝
胥保梅
蒋惠玲
机构
新疆医科大学第五附属医院产科
武汉
大学
人民
医院
产科
出处
《海南医学院学报》
CAS
2019年第10期754-757,共4页
基金
乌鲁木齐市科学技术计划项目(Y131310002)~~
文摘
目的:研究Klotho对绒膜外滋养细胞系HTR8/SVneo侵袭的影响。方法:用免疫组化检测子痫前期及正常孕妇胎盘组织Klotho蛋白表达情况。实验分组为对照组、Klotho重组蛋白组、Klotho siRNA组。Transwell小室法检测侵袭能力,Western Blot检测细胞蛋白表达水平。结果:子痫前期胎盘组织Klotho表达水平明显低于正常胎盘组织。Klotho重组蛋白处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著增强、其表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达上调。Klotho siRNA处理细胞后,HTR8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱、其表达的MMP-2及MMP-9表达显著下调。结论:Klotho可能通过介导MMP-2和MMP-9的表达调节滋养细胞侵袭能力,为子痫前期发病机制的研究提供了新线索。
关键词
子痫前期
KLOTHO
细胞侵袭
HTR-8/SVneo细胞
Keywords
Preeclampsia
Klotho
Cell invasion
HTR-8/SVneo cell line
分类号
R714.244 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响
2
作者
薛筱蕾
胥保梅
机构
新疆医科大学第五附属医院产科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期1528-1538,共11页
基金
新疆维吾尔自治区科技厅自然科学基金项目(2020D01C224)。
文摘
目的:探讨Klotho在子痫前期(PE)患者来源的胎盘外泌体(Exo)中的表达,阐明其对血管内皮细胞氧化应激的影响。方法:收集40例孕产妇的临床资料,其中正常妊娠(NP)者20名,PE患者20例,设为NP组和PE组,分离2组研究对象外周血中胎盘Exo。将oe-Klotho和oe-NC质粒转染入人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,作为oe-Klotho组和oe-NC组,收集HTR-8/SVneo细胞Exo。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法和Western blotting法检测2组研究对象胎盘Exo和2组HTR-8/SVneo细胞Exo中Klotho mRNA及蛋白表达水平。取生长状态良好的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),按Exo来源不同将HUVECs分为PE-Exo组(与PE患者胎盘Exo共培养)、NP-Exo组(与NP胎盘Exo共培养)、oe-Klotho-Exo组(与转染oe-Klotho的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养)和oe-NC-Exo组(与转染oe-NC的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养)。采用透射电子显微镜(TEM)观察Exo形态表现,Western blotting法检测Exo标记分子CD63、TSG101和胎盘Exo标记分子PLAP蛋白表达水平以鉴定Exo,荧光显微镜观察HUVECs对Exo的摄取情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组HUVECs中一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,RT-qPCR法检测各组HUVECs中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HUVECs中eNOS蛋白表达水平。结果:与NP组比较,PE组患者收缩压和舒张压升高(P<0.05),新生儿体质量和胎盘质量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。TEM观察,来源于NP组和PE组研究对象的胎盘Exo均呈圆形和椭圆形的囊泡盘状结构,包膜完整,形状相似,直径为50~100 nm;2组研究对象胎盘Exo均高表达Exo标记蛋白CD63和TSG101及胎盘Exo特异性蛋白PLAP。纳米示踪分析(NTA)检测,胎盘Exo的粒径为50~200 nm,提示由外周血分离的囊泡均是胎盘来源Exo。TEM、Western blotting和NTA检测,来源于oe-NC组和oe-Klotho组滋养层细胞的囊泡具有Exo的典型结构、分子标志物和粒径大小特征。HUVECs中均可见到明显的Exo绿色荧光表达,提示Exo可被HUVECs摄取。ELISA法检测,与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中NO水平和SOD活性均明显降低(P<0.05或P<0.01),ROS和MDA水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-Klotho-Exo组HUVECs中NO水平和SOD活性升高(P<0.05),ROS和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。RT-qPCR法检测,与NP组比较,PE组研究对象胎盘Exo中Klotho mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中eNOS mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与oe-NC组比较,oe-Klotho组滋养层细胞Exo中Klotho mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-klotho-Exo组HUVECs中eNOS mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与NP组比较,PE组研究对象胎盘Exo中Klotho蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与NP-Exo组比较,PE-Exo组HUVECs中eNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与oe-NC组比较,oe-Klotho组滋养层细胞Exo中Klotho蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与oe-NC-Exo组比较,oe-Klotho-Exo组HUVECs中eNOS蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:来源于PE患者的胎盘Exo可能通过抑制HUVECs中NO的产生和促进氧化应激反应以损伤内皮细胞功能,过表达Klotho的滋养层细胞Exo可减少HUVECs中NO的产生和氧化应激水平。
关键词
KLOTHO蛋白
子痫前期
外泌体
血管内皮细胞
氧化应激
Keywords
Klotho protein
Pre-eclampsia
Exosomes
Vascular endothelial cell
Oxidative stress
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
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被引量
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1
Klotho对滋养细胞侵袭的影响
薛筱蕾
成芳
范翠芳
雷帝
胥保梅
蒋惠玲
《海南医学院学报》
CAS
2019
3
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职称材料
2
Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响
薛筱蕾
胥保梅
《吉林大学学报（医学版）》
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CSCD
北大核心
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