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NOTCH1基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
2
1
作者
邵新宏
韩渊
+1 位作者
于游
张才全
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期312-316,共5页
目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性。方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中;使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA;使...
目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性。方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中;使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA;使用lipofectamine 2000转染试剂将重组质粒或空质粒和miR-34a inhibitor或control真核表达载体共转染HEK293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果:得到含NOTCH1基因3'-UTR(1 648 bp)序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。NOTCH1基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点;用重组质粒和miR-34a inhibitor共转染的HEK293T组的荧光素酶活性比空质粒组高45%。结论:含NOTCH1基因3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功,miR-34a对NOTCH1基因有调控作用。
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关键词
NOTCH1
微小RNA
3'非编码区
双荧光素酶报告载体
基因调控
基因转染
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职称材料
题名
NOTCH1基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
被引量：
2
1
作者
邵新宏
韩渊
于游
张才全
机构
新疆医科大学
第五
附属
医院
普
外科
新疆医科大学第二附属医院肿瘤外科
重庆
医科大
学
附属
第一
医院
胃肠
外科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期312-316,共5页
文摘
目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性。方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中;使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA;使用lipofectamine 2000转染试剂将重组质粒或空质粒和miR-34a inhibitor或control真核表达载体共转染HEK293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果:得到含NOTCH1基因3'-UTR(1 648 bp)序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证。NOTCH1基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点;用重组质粒和miR-34a inhibitor共转染的HEK293T组的荧光素酶活性比空质粒组高45%。结论:含NOTCH1基因3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功,miR-34a对NOTCH1基因有调控作用。
关键词
NOTCH1
微小RNA
3'非编码区
双荧光素酶报告载体
基因调控
基因转染
Keywords
NOTCHI
microRNA
3＇-UTR
Dual luciferase reporter vector
Gene regulation
Gene transfection
分类号
R392.4 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NOTCH1基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
邵新宏
韩渊
于游
张才全
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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