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鼠β-防御素2抗宫颈癌的实验研究 被引量:2
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作者 魏晓丽 丁剑冰 +2 位作者 蒋忠华 温浩 李明远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1186-1188,共3页
目的:建立BALB/c小鼠U14宫颈癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,探讨mBD2对小鼠机体免疫功能的影响。方法:采用无内毒素质粒大抽试剂盒抽提pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2和pcDNA3.1(+)质粒DNA。将荷瘤小鼠随机分为5组,分别采用pcDNA... 目的:建立BALB/c小鼠U14宫颈癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情况,探讨mBD2对小鼠机体免疫功能的影响。方法:采用无内毒素质粒大抽试剂盒抽提pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2和pcDNA3.1(+)质粒DNA。将荷瘤小鼠随机分为5组,分别采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2质粒治疗,同时设立pcDNA3.1(+)、顺铂和PBS组对照;观察肿瘤生长状况、荷瘤小鼠存活时间,绘制小鼠生存曲线。结果:成功建立了BALB/c小鼠U14移植瘤模型。采用pcDNA3.1(+)/mBD2、pcDNA3.1(+)/rmBD2、pcDNA3.1(+)治疗造模成功的荷瘤小鼠,结果显示:pcDNA组及PBS组肿瘤生长迅速,出现大范围出血、坏死,并于治疗后7d全部死亡;mBD2组与rmBD2组小鼠肿瘤生长相对缓慢,出现局部出血坏死等现象,至治疗2周,出现死亡,至治疗结束时,每组仍有3只小鼠存活,而Pt组小鼠肿瘤生长慢,小鼠生长较为活跃,至治疗21d,开始出现死亡,pcDNA和PBS组与mBD2组和rmBD2组及Pt组与mBD2组和rmBD2组生存时间比较,结果有统计学意义(P<0.05),mBD2组和rmBD2生存时间比较,也具有统计学意义(P<0.05)。结论:mBD2能够抑制移植瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存时间。在抑瘤效果上,mBD2优于外加信号肽重组mBD2作用。 展开更多
关键词 U14 mBD2 宫颈肿瘤 生存曲线
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棘球绦虫感染犬粪抗原检测研究新进展 被引量:6
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作者 张瑞妮 吾拉木.马木提 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期398-402,共5页
棘球绦虫(Echinococcus spp.)感染的犬目前是人畜棘球蚴病主要传染源,因此对感染犬的动态监测、合理驱虫治疗是预防和彻底消灭包虫病流行的关键性措施之一。近年来,为了克服槟榔碱导泻法鉴定虫种和虫卵以及检测血清特异性循环抗原及抗... 棘球绦虫(Echinococcus spp.)感染的犬目前是人畜棘球蚴病主要传染源,因此对感染犬的动态监测、合理驱虫治疗是预防和彻底消灭包虫病流行的关键性措施之一。近年来,为了克服槟榔碱导泻法鉴定虫种和虫卵以及检测血清特异性循环抗原及抗体等方法的不足,各实验室开始应用ELISA双抗夹心法,试图建立棘球绦虫感染犬粪抗原的快速检测系统。本文对犬感染棘球绦虫的特异性粪抗原检测技术的最新进展作一综述。 展开更多
关键词 棘球绦虫 ELISA双抗夹心法 抗体 EgAgB8 3重组蛋白
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细粒棘球绦虫AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原表达系统的构建 被引量:1
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作者 古力帕丽.麦曼提依明 马海梅 +5 位作者 吾拉木.马木提 陈洁 陈璐 丁剑冰 马秀敏 温浩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期502-505,510,共5页
目的构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后... 目的构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达。方法从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,人工合成EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性。通过对pUCm-T/AgB8/1-AgB8/2重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确后,转化至E.coliBL21(DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1-AgB8/2重组嵌合蛋白。用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。结果测序表明,AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组嵌合蛋白得到成功表达,在相对分子量约38 kD处有表达条带。结论成功构建了pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1-AgB8/2嵌合重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原 原核表达质粒
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pTWIN1-EgAgB8/3自剪切融合蛋白原核表达载体的构建及表达 被引量:1
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作者 张瑞妮 吾拉木·马木提 +1 位作者 于春洋 法蒂玛·木特力甫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期154-158,共5页
目的表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3)。方法根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表... 目的表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3)。方法根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表达质粒pTWIN1上,并转化至大肠杆菌ER2566,IPTG诱导表达CBD-intein1-EgAgB8/3融合蛋白后进行纯化,用SDS-PAGE电泳和western blot分析鉴定融合蛋白与目的蛋白rEgAgB8/3的表达量和纯度。结果成功克隆获得EgAgB8/3基因目的片段和具有蛋白自剪切功能的重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,并鉴定其表达的融合蛋白主要以可溶形式存在;构建的重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein1)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成。结论成功的构建重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,获得高表达融合蛋白CBD-intein1-EgAgB8/3,并经简单后续处理即可获得含极少任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白rEgAgB8/3,尽可能保证了其原有的结构和活性,为抗rEgAgB8/3特异性单克隆抗体的快速制备奠定了基础。 展开更多
关键词 棘球绦虫 EgAgB8/3 pTWIN1表达载体 诱导表达纯化 WESTERN BLOT
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小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究
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作者 魏晓丽 金一帮 +2 位作者 朱明 李亮 温浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期95-99,共5页
构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时... 构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。 展开更多
关键词 小鼠beta防御素2(mBD2) 原核表达 SDS-PAGE 抑菌作用
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