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细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究
被引量：
2
1
作者
谭青青
李锴
+5 位作者
张静
高剑
吴宏烨
范俊杰
陆合
叶彬
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期45-52,59,共9页
目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以...
目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。结果免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。
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关键词
细粒棘球绦虫
水通道蛋白
多肽抗体
亚细胞定位
组织定位
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职称材料
细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究
2
作者
谭青青
吴宏烨
+6 位作者
高剑
李锴
范俊杰
李想
廖鹏
曹纹侨
叶彬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第21期2081-2092,共12页
目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培...
目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时期的转录表达。以细粒棘球蚴cDNA为模板,扩增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-16个基因编码区片段,同时,通过化学合成方法扩增另外6个EgAQPs(EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2)基因编码区片段,并在非洲爪蟾卵母细胞中检测这12个EgAQPs基因的透水功能,Western blot检测EgAQPs在卵母细胞膜上的表达。结果体外培养的原头蚴及感染小鼠的继发棘球蚴体积均随培养时间的延长而逐渐增大,棘球蚴囊内透明液体增多。RT-qPCR结果显示12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时间的转录表达水平均较低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母细胞的体积变化率和透水系数与阴性对照组差异无统计学意义,这12个EgAQPs基因在卵母细胞中未表现出水通道功能。Western blot检测12个EgAQPs基因在卵母细胞总蛋白、胞质蛋白与胞膜蛋白上的表达,结果均未观察到蛋白在预期的水通道蛋白理论分子量处表达。结论12个EgAQPs基因在原头蚴囊化形成棘球蚴过程中转录表达水平均较低,这些基因在爪蟾卵母细胞的异源表达均未表现出通透水的功能。
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关键词
细粒棘球绦虫
水通道蛋白
原头蚴
棘球蚴
转录谱
异源表达
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职称材料
题名
细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究
被引量：
2
1
作者
谭青青
李锴
张静
高剑
吴宏烨
范俊杰
陆合
叶彬
机构
重庆
医科大
学
基础医
学
院病原生物
学
教研室
重庆
医科大
学
分子医
学
与肿瘤研究中心
新疆医科大学寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期45-52,59,共9页
基金
国家自然科学基金面上项目(No.81672045)。
文摘
目的研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9(EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。方法根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。结果免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。
关键词
细粒棘球绦虫
水通道蛋白
多肽抗体
亚细胞定位
组织定位
Keywords
Echinococcus granulosus
aquaporin
polypeptide antibody
subcellular localization
tissue localization
分类号
R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究
2
作者
谭青青
吴宏烨
高剑
李锴
范俊杰
李想
廖鹏
曹纹侨
叶彬
机构
重庆
医科大
学
基础医
学
院病原生物
学
教研室
新疆医科大学寄生虫学教研室
重庆
医科大
学
基础医
学
院分子医
学
与肿瘤研究中心
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第21期2081-2092,共12页
基金
国家自然科学基金面上项目(81672045)。
文摘
目的探索细粒棘球蚴水通道蛋白(Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs)在棘球蚴液形成过程中的作用。方法收集体外培养不同时期的棘球蚴标本和BALB/c小鼠体内接种的继发棘球蚴标本,RT-qPCR方法检测12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时期的转录表达。以细粒棘球蚴cDNA为模板,扩增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-16个基因编码区片段,同时,通过化学合成方法扩增另外6个EgAQPs(EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2)基因编码区片段,并在非洲爪蟾卵母细胞中检测这12个EgAQPs基因的透水功能,Western blot检测EgAQPs在卵母细胞膜上的表达。结果体外培养的原头蚴及感染小鼠的继发棘球蚴体积均随培养时间的延长而逐渐增大,棘球蚴囊内透明液体增多。RT-qPCR结果显示12个EgAQPs基因在体内、体外培养不同发育时间的转录表达水平均较低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母细胞的体积变化率和透水系数与阴性对照组差异无统计学意义,这12个EgAQPs基因在卵母细胞中未表现出水通道功能。Western blot检测12个EgAQPs基因在卵母细胞总蛋白、胞质蛋白与胞膜蛋白上的表达,结果均未观察到蛋白在预期的水通道蛋白理论分子量处表达。结论12个EgAQPs基因在原头蚴囊化形成棘球蚴过程中转录表达水平均较低,这些基因在爪蟾卵母细胞的异源表达均未表现出通透水的功能。
关键词
细粒棘球绦虫
水通道蛋白
原头蚴
棘球蚴
转录谱
异源表达
Keywords
Echinococcus granulosus
aquaporin
protoscolex
hydatid
transcription profile
heterologous expression
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究
谭青青
李锴
张静
高剑
吴宏烨
范俊杰
陆合
叶彬
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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职称材料
2
细粒棘球绦虫囊化原头蚴AQP基因转录动态及异源表达实验研究
谭青青
吴宏烨
高剑
李锴
范俊杰
李想
廖鹏
曹纹侨
叶彬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
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