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绵羊肺炎支原体研究进展 被引量:1
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作者 魏婕 张妤 +2 位作者 米晓云 魏玉荣 郑文新 《草食家畜》 2024年第1期19-24,共6页
【现状】绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)是引起绵羊和山羊呼吸系统疾病的主要病原之一,病羊以咳嗽、气喘、流鼻液、消瘦等为主要临床症状。【问题】由于该病原具有广泛的寄主范围,病程长,体外培养困难,对抗菌药物的敏感性难... 【现状】绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)是引起绵羊和山羊呼吸系统疾病的主要病原之一,病羊以咳嗽、气喘、流鼻液、消瘦等为主要临床症状。【问题】由于该病原具有广泛的寄主范围,病程长,体外培养困难,对抗菌药物的敏感性难以测定,致使临床选药困难,用药依从性差。因此,目前该病防控缺乏便捷且行之有效的措施,具有较高的病死率,一旦发病对羊产业造成巨大经济损失。【对策】目前有效防控措施为疫苗免疫,但缺乏针对性强的商业化市售疫苗。根据目前抗病育种研究,可以针对绵羊肺炎支原体培育新抗病绵羊品种。【结论】疫苗防控是快速有效的防控措施之一,但由于流行病原无交叉保护性,且成本较高,无法满足新疆羊产业发展需要,因此,培育抗绵羊肺炎支原体的绵羊新品种十分必要且意义深远。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 流行病学 毒力 抗病育种
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牛冠状病毒N基因的原核表达和多克隆抗体的制备
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作者 刘文锴 曹兴旺 +9 位作者 汪萍 金映红 薛晶 李月 梁纤纤 李晓卓 韩翔舒 郑启铭 蒋松 夏俊 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期23-27,共5页
为制备牛冠状病毒N蛋白多克隆抗体,建立简单快捷的牛冠状病毒检测方法。根据牛冠状病毒N基因序列设计引物,将N基因重组至PET-30a载体上,经PCR及测序鉴定重组载体构建成功;将构建的PET-30a-N重组质粒转入大肠埃希氏菌DH5-α和Rosetta(DE3... 为制备牛冠状病毒N蛋白多克隆抗体,建立简单快捷的牛冠状病毒检测方法。根据牛冠状病毒N基因序列设计引物,将N基因重组至PET-30a载体上,经PCR及测序鉴定重组载体构建成功;将构建的PET-30a-N重组质粒转入大肠埃希氏菌DH5-α和Rosetta(DE3)感受态细胞,进行扩增和诱导表达,后经超声破碎后获取N蛋白并进行蛋白纯化;最后将纯化后的N蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫新西兰白兔,共制得35 mL抗N蛋白多克隆抗体血清,经Western blot和IFA鉴定,抗N蛋白多克隆抗体有良好的特异性,试验制备的抗N蛋白牛冠状病毒多克隆抗体可用于牛冠状病毒的检测。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 N蛋白 多克隆抗体 原核表达
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G8型牛轮状病毒VP7基因克隆及生物信息学分析
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作者 苗书魁 米晓云 +2 位作者 魏婕 魏玉荣 海力且木•买买提依明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1784-1795,共12页
【目的】克隆G8型牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)新疆分离株VP7基因,分析VP7蛋白分子遗传特征,为研究其生物学功能及研发新型疫苗提供理论依据。【方法】从BRV新疆分离株第6代病毒液中提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增VP7基因片段,克隆至... 【目的】克隆G8型牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)新疆分离株VP7基因,分析VP7蛋白分子遗传特征,为研究其生物学功能及研发新型疫苗提供理论依据。【方法】从BRV新疆分离株第6代病毒液中提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增VP7基因片段,克隆至pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒后酶切并测序;采用生物信息学软件分析VP7蛋白理化性质、跨膜结构、亲/疏水性、亚细胞定位和信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构同源建模及B、T细胞抗原表位。【结果】RT-PCR扩增获得大小为1 062 bp的BRV分离株VP7基因全长核苷酸序列,提交NCBI获得GenBank登录号:OR514136.1,该序列与RVA/Cow-wt/TUR/Amasya-1/2015/G8P[5]株(GenBank登录号:KX212865.1)核苷酸序列相似性最高(89.4%),同属A血清型G8基因型。生物信息学分析显示,BRV分离株VP7蛋白为疏水性不稳定蛋白,存在2个跨膜区,无信号肽,亚细胞定位于内质网膜,含有2个N-糖基化位点和132个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占36.20%和35.28%。VP7蛋白能与SWISS-MODEL数据库中模板(SMTL ID:8bp8.1)的氨基酸序列同源建模,两者序列相似性为82.82%,符合率较高,模型GMQE、QMEAN和Ramachandran favored值分别为0.75、0.79和95.52%,表明空间构象合理,模型准确可靠。该蛋白存在多个B、T细胞抗原表位,其中表位长度设为16个氨基酸,评分>0.8的B细胞表位数量为12条;表位长度设为9个氨基酸,选择4种等位基因,评分>0.5的CTL表位有6条;表位长度设为12~18个氨基酸,选择4种等位基因,评分>0.8的HTL表位有11条。【结论】本研究首次成功获得G8型BRV新疆分离株VP7基因全长核苷酸序列。VP7蛋白为不稳定蛋白,存在2个跨膜区,无信号肽,亚细胞定位于内质网膜,存在多个B、T细胞抗原表位。试验结果为G8型BRV的流行、诊断、病毒-宿主相互作用和VP7蛋白基因工程疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 牛轮状病毒(BRV) VP7基因 克隆 生物信息学
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牛羊布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验的建立与应用
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作者 刘丽娅 剡文亮 +8 位作者 曹瑞 叶锋 马晓菁 谷文喜 赵江山 张子荣 宋洁 李岩 易新萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期2063-2070,共8页
【目的】建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品。【方法】建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2287份、非免疫地区252份牛、羊血... 【目的】建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品。【方法】建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2287份、非免疫地区252份牛、羊血清。【结果】建立了NH-AGID方法,检测稳定,重复性好,具有较高的特异性;对自然感染阳性动物检测敏感性低于80%,对排菌动物的检测敏感性高于90%,检出布病阳性抗体的阈值高于RBT。免疫地区血清NH抗体平均检出率17.8%,LPS抗体平均检出率52.3%;非免疫地区血清NH抗体平均检出率40.9%,LPS抗体平均检出率54.8%。【结论】应用NH-AGID方法可鉴别区分免疫地区牛、羊布病感染动物和免疫动物。检出NH抗体动物处于布鲁氏菌活动期或排菌期为布病感染动物,应及时剔除出群。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 半抗原-琼脂扩散试验 诊断
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1株牛源冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 刘文锴 汪萍 +8 位作者 金映红 薛晶 李月 梁纤纤 李晓卓 韩翔舒 郑启铭 蒋松 夏俊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3100-3108,共9页
【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)... 【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)进行BCoV检测,将阳性样本经过处理后接种HCT-8细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和透射电镜对分离的病毒进一步鉴定,通过Reed-Muench法测定分离株的半数组织培养感染剂量(TCID50),将分离毒株进行全基因组测序,并对测序结果进行遗传进化分析。【结果】腹泻样品BCoV检出率为64.9%,接种HCT-8细胞后成功分离到1株BCoV,命名为XJ-SHZ-37(GenBank登录号:OR750853);IFA可观察到孵育病毒的细胞有绿色的特异性荧光,而对照组没有;Western blotting检测结果显示,该分离株与BCoV N蛋白多克隆抗体发生特异性反应;透射电镜可观察到呈皇冠状的病毒颗粒;Reed-Muench法测定分离株的TCID50为10-7.9/0.1 mL;基因组测序及遗传进化结果表明,XJ-SHZ-37与从牛中分离到的冠状病毒科冠状病毒属的BCoV分离株ZJNB2106相似性最高。【结论】新疆地区7个牛场有较高的BCoV检出率,成功分离出1株能稳定遗传且能与BCoV N蛋白多克隆抗体特异性结合的分离株,该分离株有较高的病毒滴度,且通过遗传进化关系表明与中国牛源毒株ZJNB2106株进化亲缘关系最近。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(BCoV) 分离鉴定 全基因测序 遗传进化
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犊牛腹泻症的病原学检测及鉴定
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作者 苗书魁 王俊伟 +6 位作者 陆桂丽 汪萍 王杰 魏玉荣 魏婕 米晓云 沙依兰·卡依扎 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1535-1543,共9页
【目的】研究新疆某规模化牛场犊牛腹泻症的主要病原。【方法】采用RT-PCR方法,检测14份腹泻犊牛粪便中的病毒,对4头死亡犊牛肝组织进行细菌分离培养及鉴定、小鼠致病性和药物敏感性试验。将分离的致病菌扩增16S rDNA基因片段并测序,并... 【目的】研究新疆某规模化牛场犊牛腹泻症的主要病原。【方法】采用RT-PCR方法,检测14份腹泻犊牛粪便中的病毒,对4头死亡犊牛肝组织进行细菌分离培养及鉴定、小鼠致病性和药物敏感性试验。将分离的致病菌扩增16S rDNA基因片段并测序,并将其结果在NCBI中用BLAST搜索同源序列,分析遗传进化特性。【结果】该牛场犊牛腹泻的病原为牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli,E.coli)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae)。14份粪便中,BCoV检出率为64.29%,BRV检出率为50.00%;4份肝组织中,E.coli检出率为100.00%,K.pneumoniae检出率为50.00%。分离的2种致病菌E.coli和K.pneumoniae对阿米卡星敏感,对其它16种抗生素均耐药。【结论】该牛场引起犊牛腹泻的主要病原为BCoV、BRV、E.coli和K.pneumoniae,存在病毒与细菌的混合感染。选择阿米卡星药物防治E.coli和K.pneumoniae。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 病原学 检测 鉴定
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荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌与牛肺炎支原体混合感染犊牛的诊断分析 被引量:1
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作者 李晓卓 冯继红 +3 位作者 梁纤纤 郑启铭 刘文锴 夏俊 《现代农业科技》 2024年第11期175-179,共5页
新疆某牛场的犊牛出现咳喘、鼻镜干燥、精神不振、食欲减退、呼吸困难甚至死亡的症状,通过剖检、细菌分离鉴定、PCR鉴定等方法对其进行检查。结果显示:死亡牛只肺部可见明显出血并且伴有肺部实质性肝变;牛肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌PC... 新疆某牛场的犊牛出现咳喘、鼻镜干燥、精神不振、食欲减退、呼吸困难甚至死亡的症状,通过剖检、细菌分离鉴定、PCR鉴定等方法对其进行检查。结果显示:死亡牛只肺部可见明显出血并且伴有肺部实质性肝变;牛肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌PCR检测都为阳性,溶血性曼氏杆菌PCR检测为阴性。通过实验室诊断,最终确定本次疾病为多杀性巴氏杆菌和牛肺炎支原体引起的混合感染。本研究通过病理变化、实验室诊断等方法找到病因,为此类疾病的防控提供借鉴。 展开更多
关键词 犊牛 多杀性巴氏杆菌 牛肺炎支原体 混合感染 分离鉴定 诊断
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牛冠状病毒纤突蛋白的结构与功能分析
8
作者 陆桂丽 苗书魁 +3 位作者 魏婕 魏玉荣 米晓云 海力且木·买买提依明 《新疆农业科学》 CSCD 北大核心 2024年第11期2844-2852,共9页
【目的】研究新疆牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行株的遗传变异规律,分析纤突(Spike,S)蛋白结构与功能特征。【方法】对新疆巴楚县某牛场BCoV阳性的犊牛粪便,提取病毒RNA,采用RT-PCR方法扩增S基因,通过序列测定和拼接,获得BCo... 【目的】研究新疆牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行株的遗传变异规律,分析纤突(Spike,S)蛋白结构与功能特征。【方法】对新疆巴楚县某牛场BCoV阳性的犊牛粪便,提取病毒RNA,采用RT-PCR方法扩增S基因,通过序列测定和拼接,获得BCoV S基因全长序列,对其开展生物信息学分析和遗传进化分析。【结果】获得BCoV S基因核苷酸序列(GenBank索引号:OR136878.1)。S基因全长4092核苷酸(nucleotide,nt),编码1363氨基酸(amino acid,aa)。BCoV S蛋白分子量为150.67 Ku,等电点为5.29,有1个跨膜螺旋区,亲水性较弱,疏水性略强。S蛋白主要分布于宿主细胞的内质网膜和高尔基体,具有信号肽的概率为0.9842,是分泌型蛋白,含有14个潜在的N-糖基化位点和132个磷酸化位点。S蛋白具有3个结构域,其中受体结合结构域(Receptor binding domain,RBD)共含有215 aa,无规则卷曲(Coiled coil,Cc)占比最高(62.79%),其次为延伸链(Extended strand,Es)(20.47%)和α-螺旋(α-helix,Hh)(12.56%),β-转角(β-turn,Tt)占比最少(4.19%)。筛选出S蛋白15个优势B细胞表位和11个T细胞表位。S蛋白能与SWISS-MODEL数据库中模板(SMTL ID:7sbw.1.C)同源建模,二者序列相似性为92.00%,模型GMQE值为0.76,QMEAN值为0.82,符合率较高,拉氏图(Ramachandran plots)的Ramachandran favored值为96.14%,表明空间构象合理,模型准确可靠。遗传进化试验扩增的BCoV S基因序列,与2016年我国新疆的BCV-Aks-01株处于同一小分支,两者S基因核苷酸序列同源性为99.1%。【结论】BCoV S蛋白存在多个抗原表位。RBD在病毒进入宿主细胞时具有重要作用,可针对RBD序列设计疫苗靶点,阻止病毒与宿主受体结合。采用生物信息学方法首次分析BCoV S蛋白理化性质、信号肽和亚细胞定位、磷酸化位点、糖基化位点、结构域、抗原表位、三级结构和RBD二级结构等特征,为BCoV S基因遗传进化、结构与功能研究、疫苗研发、靶向药物设计提供参考。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 纤突蛋白 生物信息学分析
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基于网络药理学和试验验证分析小檗碱治疗鸡沙门菌感染的作用机制 被引量:4
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作者 张旭梅 魏玉荣 +4 位作者 许丞惠 杨彤 史慧君 付强 杨莉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3557-3570,共14页
采用网络药理学、分子对接、分子动力学模拟等方法,结合沙门菌攻毒试验初步验证小檗碱(berberine,BBR)干预肉鸡肠炎的潜在靶点及作用机制。首先利用PharMapper数据库和Swisstargets数据库预测药物靶点;通过GeneCards数据库收集疾病靶点... 采用网络药理学、分子对接、分子动力学模拟等方法,结合沙门菌攻毒试验初步验证小檗碱(berberine,BBR)干预肉鸡肠炎的潜在靶点及作用机制。首先利用PharMapper数据库和Swisstargets数据库预测药物靶点;通过GeneCards数据库收集疾病靶点,并筛选出药物和疾病靶点的交集,将得到的交集靶点构建蛋白质互作网络及GO与KEGG富集分析;对筛选出的核心靶点进行分子对接验证和动力学模拟;后续建立肉鸡肠道炎症模型,观察其肠道组织形态变化,并利用RT-qPCR验证BBR对靶点蛋白mRNA表达量的影响。结果显示:最终筛选得到BBR潜在靶点374个,与肠炎交集174个;GO与KEGG富集分析分别得到197条目和73条目,主要涉及信号转导、蛋白磷酸化过程及PI3K-Akt、趋化因子及Ras等信号通路;分子对接和动力学模拟结果显示,BBR与核心靶点之间均能较好地结合,主要通过疏水作用力、氢键结合;组织切片结果发现,BBR可显著缓解肠道组织损伤;RT-qPCR结果显示,给药后仔鸡盲肠组织中HSP90AA1表达量显著下降(P<0.001),PIK3CA表达量显著上升(P<0.01)。通过网络药理学和试验验证发现,BBR可能通过调节HSP90AA1和PIK3CA表达量来调控肠道炎症的发生发展,可能涉及PI3K-Akt、cAMP、AMPK等信号通路,为深入进行BBR治疗肠炎的作用机制研究提供新思路与新方法。 展开更多
关键词 网络药理学 小檗碱 肠炎 分子对接 作用机制
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奶山羊CAEV感染血清抗体的消长规律 被引量:1
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作者 王登峰 古努尔·吐尔逊 +4 位作者 李建军 洪都孜·波拉提 杨学云 孟肖潇 吴建勇 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1555-1560,共6页
【目的】研究山羊感染关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)后血清总抗体的消长规律,为CAEV检疫、净化方案的制订提供参考数据。【方法】采用我国分离的CAEV山东株(试验组)、参考株ATCC VR-905(参考株对照组)和... 【目的】研究山羊感染关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)后血清总抗体的消长规律,为CAEV检疫、净化方案的制订提供参考数据。【方法】采用我国分离的CAEV山东株(试验组)、参考株ATCC VR-905(参考株对照组)和细胞培养基(阴性对照组)经颈静脉注射感染3~5月龄关中奶山羊9只(每组3只),选用OIE推荐的CAEV/MVV总抗体检测试剂盒(IDEXX)定期检测抗体。【结果】阴性对照组始终为阴性,试验组和参考株对照组在感染后第24 d出现抗体转阳个体,试验组在第42 d时全部转阳,参考株对照组在第71 d时全部转阳,且在后续监测期内抗体OD值均处较高水平并。【结论】山羊感染CAEV后能够产生较好的体液免疫应答,前2个月内抗体水平差异较大,抗体刺激起来后将持续处在较高水平。血清中CAEV总抗体水平可作为山羊CAE检疫的判断标准,但必须进行间隔期不少于60 d的2次以上的检疫。 展开更多
关键词 奶山羊 动物感染试验 山羊关节炎-脑炎病毒 抗体消长规律
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一例多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌及肺炎支原体混合感染绵羊的诊断 被引量:2
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作者 刘文锴 汪阳 +7 位作者 金映红 薛晶 张凌 梁纤纤 李晓卓 郑启铭 蒋松 夏俊 《草食家畜》 2023年第2期33-37,共5页
【目的】2022年7月新疆某地区羊场600只2月龄羔羊,其中100只出现反应迟钝、食欲下降、腹泻、体温高达40℃、死亡羔羊高达60只,部分出现不同程度的气喘、流鼻液和呼吸障碍,为了诊断该羊场出现的疾病。【方法】通过观察患病羊群的临床发... 【目的】2022年7月新疆某地区羊场600只2月龄羔羊,其中100只出现反应迟钝、食欲下降、腹泻、体温高达40℃、死亡羔羊高达60只,部分出现不同程度的气喘、流鼻液和呼吸障碍,为了诊断该羊场出现的疾病。【方法】通过观察患病羊群的临床发病情况、对病死羊群的解剖检查、流行病学研究以及实验室检查。【结果】根据临床症状和解剖特征初步判断为肺炎,细菌检测为杆状革兰氏阴性菌,PCR检测多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性、绵羊肺炎支原体检测为阳性。【结论】确定了新疆某地区羊场的呼吸道病变是由多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌及绵羊肺炎支原体的混合感染造成的。 展开更多
关键词 绵羊 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 绵羊肺炎支原体 分离鉴定 诊断
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弓形虫TgERP基因的原核表达及间接ELISA方法的建立
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作者 苗书魁 王陆宝 +5 位作者 陆桂丽 汪萍 魏玉荣 夏俊 魏婕 米晓云 《中国动物检疫》 CAS 2023年第8期89-93,共5页
为原核表达弓形虫的TgERP基因,参照GenBank中弓形虫GTl株的TgERP基因序列设计引物,通过PCR扩增分离的一株猫源弓形虫(TC株)的TgERP基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,通过IPTG诱导表达蛋白,应用带His标签的重力柱纯化蛋白,采用BCA... 为原核表达弓形虫的TgERP基因,参照GenBank中弓形虫GTl株的TgERP基因序列设计引物,通过PCR扩增分离的一株猫源弓形虫(TC株)的TgERP基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中,通过IPTG诱导表达蛋白,应用带His标签的重力柱纯化蛋白,采用BCA方法测定蛋白浓度,利用重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果成功表达了TgERP蛋白,且蛋白以上清形式表达,相对分子质量约16 ku。将纯化的重组蛋白pET-28-TgERP作为诊断抗原,初步建立了间接ELISA方法;利用间接ELISA、改良凝集试验(MAT)和间接血凝试验(IHA)3种方法分别检测472份羊、犬、猫血清样品,发现阳性率分别为1.0%、3.8%、3.4%,验证了建立的间接ELISA方法可区分动物感染弓形虫的途径。本研究为弓形虫病快速诊断方法的建立和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 TgERP基因 原核表达 反应活性
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