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牛羊早期妊娠诊断技术研究进展
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作者 张振良 吕占民 +3 位作者 卢守亮 卢春霞 倪建宏 刘长彬 《福建农业学报》 北大核心 2025年第1期91-98,共8页
规模化养殖中,母畜空怀将使养殖场遭受严重的经济损失,应用早期妊娠诊断技术,可有效降低空怀母畜数量,缩短产犊(羔)间隔,提高养殖效益。本文从诊断方法、诊断时间、诊断准确率等方面对牛羊早期妊娠临床诊断法和妊娠相关标志物诊断法进... 规模化养殖中,母畜空怀将使养殖场遭受严重的经济损失,应用早期妊娠诊断技术,可有效降低空怀母畜数量,缩短产犊(羔)间隔,提高养殖效益。本文从诊断方法、诊断时间、诊断准确率等方面对牛羊早期妊娠临床诊断法和妊娠相关标志物诊断法进行综述。在临床诊断中,B超妊娠诊断较普遍,妊娠28~35 d超声检查可以获得比较可靠的结果,但其可靠性很大程度上取决于所用设备频率、操作者技能。在妊娠相关标志物诊断中,孕酮(Progesterone,P_(4))浓度检测法操作繁琐,对检测环境要求高,难以在生产中大面积推广。早期妊娠因子是受精后最早出现的特异性指标,但目前其检测完全依赖于使用玫瑰花环抑制试验,后续需开发简便的检测方法。干扰素刺激基因和外泌体miRNAs可能有助于牛羊早期妊娠诊断,但这些技术尚处于研究开发阶段。商业化的妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)检测试剂盒可作为B超妊娠诊断的替代方法,用于确定牛羊的早期妊娠或晚期胚胎损失。未来需要研发国产的商业化PAG检测试剂盒,以降低检测成本。本文通过总结不同检测方法的优缺点及实际应用效果,为生产者选择早期妊娠诊断方法提供参考,为牛羊早期妊娠诊断方法后期研究方向提供参考。 展开更多
关键词 妊娠诊断 MIRNAS PAGs
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新疆图木舒克市牛梨形虫感染情况调查
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作者 张玉霞 李维蓬 +4 位作者 张艳艳 王正荣 孙艳 贾春英 薄新文 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期11-15,共5页
为掌握新疆图木舒克市牛梨形虫感染情况,采用PCR方法对采自10个采样点的862份牛全血样品进行了梨形虫检测,并对阳性产物进行了序列对比和系统发育树构建。结果显示:牛梨形虫总感染率为41.53%(358/862),新发现1例东方泰勒虫感染,其余均... 为掌握新疆图木舒克市牛梨形虫感染情况,采用PCR方法对采自10个采样点的862份牛全血样品进行了梨形虫检测,并对阳性产物进行了序列对比和系统发育树构建。结果显示:牛梨形虫总感染率为41.53%(358/862),新发现1例东方泰勒虫感染,其余均为环形泰勒虫感染,并未发现巴贝斯虫感染;不同样点检测结果显示,样点4梨形虫阳性率最高(64.91%),其次是样点9(61.11%),样点1与样点3梨形虫阳性率较低,样点10未发现梨形虫感染;不同时间检测结果显示,样点1、2、3、6、7、9梨形虫阳性率呈下降趋势,样点4、5阳性率呈上升趋势;系统进化树显示,环形泰勒虫与我国新疆来源虫株(EU083799)同源性为100%,在进化树上聚为一个分支,东方泰勒虫与波斯尼亚和黑塞哥维那虫株(ON148462)同源性为99%,亲缘关系较近。结果说明:梨形虫在图木舒克市牛群中普遍存在,但不同地点阳性率存在差异;环形泰勒虫为图木舒克市的优势梨形虫种。建议养殖场根据当地的养殖方式及梨形虫感染情况制定针对性防控方案,同时加强牛梨形虫的监测工作。 展开更多
关键词 牛梨形虫 PCR检测 序列分析 感染
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反刍动物瘤胃可溶碳和可溶氮降解平衡研究进展
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作者 刘洋 张振斌 +2 位作者 臧俞 张军 王梦芝 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第18期25-33,共9页
反刍动物氮的利用率低,瘤胃内可溶性碳和可溶性氮平衡这一原理有助于解决这一问题。文章总结了可溶性碳和可溶性氮在瘤胃的代谢过程、评价可溶性碳/可溶性氮平衡的指标、可溶性碳/可溶性氮对反刍动物代谢影响以及调控可溶性碳/可溶性氮... 反刍动物氮的利用率低,瘤胃内可溶性碳和可溶性氮平衡这一原理有助于解决这一问题。文章总结了可溶性碳和可溶性氮在瘤胃的代谢过程、评价可溶性碳/可溶性氮平衡的指标、可溶性碳/可溶性氮对反刍动物代谢影响以及调控可溶性碳/可溶性氮平衡措施,以期为提高反刍动物氮利用率提供参考依据。 展开更多
关键词 反刍动物 可溶性碳/可溶性氮平衡 氮利用率
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细粒棘球绦虫EgBAL蛋白的生物信息学分析及原核表达
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作者 赵文卿 薄新文 +6 位作者 普娜 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 齐萌 王正荣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期801-810,共10页
[目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(Ge... [目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(GenBank登录号:HM748917),设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,通过PCR扩增并克隆EgBAL基因。使用Mega 7.0软件,通过邻接法(NJ)构建系统进化树,运用生物信息学软件对EgBAL蛋白理化性质和结构特征进行预测分析。构建含EgBAL基因重组pET-22b质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达EgBAL重组蛋白,通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,并进行纯化。利用Western blotting分析重组蛋白的免疫原性。[结果]细粒棘球绦虫EgBAL基因片段大小为1 020 bp。系统进化树显示,EgBAL蛋白与中华树鼩EgBAL蛋白处于同一分支,进化距离较近,相似性高达99.60%。生物信息学分析显示,EgBAL基因全长1 014 bp,编码337个氨基酸,EgBAL蛋白分子质量为37 089.59 u,理论等电点为4.77,不稳定指数为44.72,为不稳定蛋白,脂肪系数为66.11,亲水性为-0.429,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽。EgBAL蛋白具有14个潜在B细胞抗原表位,二级结构包括α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲,分别占27.90%、12.76%、12.76%和56.08%。此外,EgBAL蛋白含有35个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸磷酸化位点、16个苏氨酸磷酸化位点和7个酪氨酸磷酸化位点。本研究成功构建重组pET-22b-EgBAL质粒,诱导表达得到EgBAL重组蛋白大小约38 ku。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被细粒棘球绦虫感染的昆明小鼠和犬的阳性血清识别,具有良好的免疫原性。[结论]本研究成功克隆了细粒棘球绦虫EgBAL基因、表达了EgBAL重组蛋白,并初步证实重组EgBAL蛋白具有较好的免疫原性,提示其有作为囊型棘球蚴病疫苗或诊断候选抗原的潜力,为进一步研究EgBAL蛋白的功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgBAL基因 生物信息学分析 原核表达
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转录组测序分析细粒棘球绦虫原头蚴刺激后巨噬细胞Raw264.7 lncRNA表达的研究 被引量:4
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作者 王正荣 马勋 +3 位作者 张艳艳 刘乙 孟季蒙 薄新文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期759-766,共8页
为了解巨噬细胞Raw264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)刺激时其长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达规律,本研究采用Illumina Hiseq 3000高通量RNA sequencing测序技术对PSC处理以及PBS处理的Raw264.7细胞进行lncRNA测序和生物信息学分析... 为了解巨噬细胞Raw264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)刺激时其长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达规律,本研究采用Illumina Hiseq 3000高通量RNA sequencing测序技术对PSC处理以及PBS处理的Raw264.7细胞进行lncRNA测序和生物信息学分析后,进一步采用GO和KEGG数据库分别对差异表达的lncRNAs进行富集分析。结果显示,和PBS对照组相比,PSC处理组有60个lncRNA分子的表达出现显著差异变化,其中17个表达上调,43个表达下调。GO分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要与钠离子跨膜转运体活性调节,2型免疫反应正向调节以及自然杀伤细胞凝集素样受体结合等相关;KEGG分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要参与VEGF信号、Toll样受体信号通路、NOD样受体等信号通路。本研究进一步分析了与Raw264.7细胞固有免疫相关的lncRNA分子,结果发现有11个模式识别受体(PRR)相关的lncRNA分子。随机选取6个差异表达的lncRNA分子进行了qRT-PCR验证,结果显示其表达趋势与lncRNA测序结果一致。本研究首次系统解析了巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时其lncRNA的差异表达谱特性,为进一步解析lncRNA在巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时的免疫调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 巨噬细胞Raw264.7 长链非编码RNA 固有免疫
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绵羊血清蛋白双向凝胶电泳技术的建立 被引量:3
6
作者 张译元 唐红 +3 位作者 郭延华 王新华 王立民 周平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期190-196,共7页
【目的】建立和优化绵羊血清蛋白双向电泳体系(2-DE)。【方法】从样品提取及处理、IPG胶条的选择、SDS-PAGE浓度的选择等多个方面对双向电泳分离条件进行比较。【结果】采用10%TCA/丙酮沉淀法处理血清蛋白质,18 cm p H 4~7的IPG胶条2.5... 【目的】建立和优化绵羊血清蛋白双向电泳体系(2-DE)。【方法】从样品提取及处理、IPG胶条的选择、SDS-PAGE浓度的选择等多个方面对双向电泳分离条件进行比较。【结果】采用10%TCA/丙酮沉淀法处理血清蛋白质,18 cm p H 4~7的IPG胶条2.5 mg上样量,10%SDS-PAGE,获得的2-DE图谱效果较好。【结论】获得良好的绵羊血清蛋白双向电泳图谱,建立并优化了绵羊蛋白质组学的双向电泳技术体系,为转基因绵羊生物安全性评价提供了重要的技术条件。 展开更多
关键词 绵羊 血清 蛋白质组 双向电泳
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牛源多杀性巴氏杆菌Oma87基因的分子特征、抗原性及遗传进化分析 被引量:2
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作者 张星星 黄新 +5 位作者 何延华 何立雄 韩猛立 张倩 吴桐忠 钟发刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期2200-2206,共7页
为研究牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)Oma87基因的分子特征及同源性,本研究对荚膜血清A型(capsular serotype A,Pm8)Oma87基因进行扩增、克隆和测序,利用在线软件对其进行分子特征、抗原性及遗传进化分析。结果显示,Oma8... 为研究牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)Oma87基因的分子特征及同源性,本研究对荚膜血清A型(capsular serotype A,Pm8)Oma87基因进行扩增、克隆和测序,利用在线软件对其进行分子特征、抗原性及遗传进化分析。结果显示,Oma87基因全长为2376 bp,编码791个氨基酸;氨基酸序列分析发现,该蛋白为酸性的亲水性蛋白,稳定性高,具有信号肽结构但不存在跨膜区域;二、三级结构分析发现,该蛋白为无规则卷曲及多段延伸链所形成的“N”字型三维立体结构。遗传进化分析显示,新疆分离株Pm8 Oma87基因与其他不同地域的牛源A型Pm和部分猪源A型Pm的同源性较近,与其他型Pm的同源性较远;通过VaxiJen软件分析发现,Oma87蛋白的保护性抗原的总体预测值为0.5478,高于正常阈值0.4,证明Oma87蛋白可作为免疫原性蛋白,为进一步研究Oma87蛋白奠定了理论基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 Oma87基因 分子特征 抗原性 遗传进化
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绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变与尾脂沉积能力的关联性 被引量:1
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作者 张伟 王世银 +3 位作者 高莉 徐梦思 王新华 甘尚权 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1511-1519,共9页
【目的】明确绵羊脂肪特异蛋白27基因(Fsp27)5'端非编码区(5'-UTR)g.16767527位点和g.16767779-16767780位点突变与其尾脂沉积能力的关联性,为低脂肪绵羊品种选育提供理想的分子标记,提高低脂肪绵羊品种改良选育效率。【方法】... 【目的】明确绵羊脂肪特异蛋白27基因(Fsp27)5'端非编码区(5'-UTR)g.16767527位点和g.16767779-16767780位点突变与其尾脂沉积能力的关联性,为低脂肪绵羊品种选育提供理想的分子标记,提高低脂肪绵羊品种改良选育效率。【方法】以5个不同尾脂沉积能力的绵羊品种为研究对象,包括脂尾型绵羊品种阿勒泰羊,短脂尾型绵羊品种小尾寒羊和湖羊,长瘦尾型绵羊品种中国美利奴细毛羊和萨福克羊,采用PCR-SSCP结合基因测序对绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变情况进行检测,并分析相关突变与绵羊尾脂沉积能力的关联性。【结果】绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点为C/A突变,在所检测的绵羊群体中均存在3种基因型(CC、CA和AA),但在不同尾脂沉积能力绵羊品种群体中的基因型频率存在明显差异:阿勒泰羊群体中以CC基因型为主,基因型频率为0.869;小尾寒羊和湖羊群体中以CA基因型为主,基因型频率分别为0.698和0.628;中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体则以AA基因型为主,基因型频率分别为0.616和0.833。g.16767527位点的基因型分布在阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中极显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.01),在萨福克羊群体中显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.05)。g.16767779-16767780位点为双碱基突变,对应为GG/GG、GG/TC和TC/TC基因型;在尾脂沉积能力强的阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中,g.16767779-16767780位点以TC为优势等位基因,对应的等位基因频率分别为0.862、0.954和0.927;在尾脂沉积能力差的中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体中则以GG等位基因为主,其等位基因频率分别为0.980和0.983。这2个位点的突变均对绵羊Fsp27基因5'-UTR区二级结构产生明显影响。【结论】绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点的C/A突变和g.16767779-16767780位点的GG/TC突变与其尾脂沉积能力密切相关,可作为分子标记应用于低脂肪绵羊品种的辅助选育。 展开更多
关键词 绵羊 Fsp27基因 5'-UTR区 碱基突变 尾脂沉积能力 关联性
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绵羊iPS细胞诱导及转录组学分析 被引量:1
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作者 张译元 郭延华 +4 位作者 王聪慧 唐红 南海艳 王立民 周平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2142-2149,共8页
【目的】建立绵羊(Ovis aries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态... 【目的】建立绵羊(Ovis aries)诱导性多能干细胞系,为绵羊转基因育种、应用绵羊诱导性多能干细胞奠定基础。【方法】利用电转将OCT4、SOX2、KLF4、l-Myc、Lin28转染至绵羊成纤维细胞中并诱导培养至有光滑隆起、边缘整齐的细胞克隆,形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色以及实时荧光定量PCR检测克隆细胞的生物学特性;利用高通量测序技术对诱导0、10、20、30 d的阳性细胞的差异表达基因进行筛选。【结果】克隆细胞中SOX2、OCT4、SSEA-1蛋白免疫荧光染色均呈阳性; OCT4、SOX2、Nanog基因表达量均极显著高于成纤维细胞;0和30 d转录组测序表明,被注释到GO数据库的差异表达基因有9 465个,其中,上调基因6 987个,下调基因2 478个;KEGG分析共有5 773个基因注释到259个通路中,其中,P53信号通路显著富集,且其在干细胞增殖方面起着非常重要的作用。【结论】初步成功建立了绵羊诱导性多能干细胞。 展开更多
关键词 绵羊 诱导性多能干细胞(iPSCs) 重编程 转录组测序
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绵羊Fsp27基因组织表达、多态性及其与不同绵羊品种尾脂沉积能力的关联性分析 被引量:1
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作者 张伟 王世银 +3 位作者 高莉 徐梦思 王新华 甘尚权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期952-964,共13页
旨在研究绵羊Fsp27基因的组织表达/多态性及其与不同绵羊品种尾脂沉积能力的关联性。本研究采用qRT-PCR检测了营养充足期阿勒泰羊不同组织中Fsp27基因的表达情况,同时对营养充足期和营养匮乏期阿勒泰羊尾脂组织中Fsp27基因的表达情况进... 旨在研究绵羊Fsp27基因的组织表达/多态性及其与不同绵羊品种尾脂沉积能力的关联性。本研究采用qRT-PCR检测了营养充足期阿勒泰羊不同组织中Fsp27基因的表达情况,同时对营养充足期和营养匮乏期阿勒泰羊尾脂组织中Fsp27基因的表达情况进行了定量分析,采用PCR-SSCP结合测序技术检测了5个不同尾脂沉积能力绵羊品种Fsp27基因的突变情况,并分析了相关突变与绵羊尾脂沉积能力的关联性。结果表明,Fsp27基因在营养充足期阿勒泰羊尾脂中高表达,其表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在肾周脂肪和皮下脂肪组织中的表达量也较高,极显著高于心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、皮肤和骨骼肌组织(P<0.01)。在心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、皮肤和骨骼肌组织中呈微量表达,且各组织间差异不显著(P>0.05)。另外,营养充足期阿勒泰羊尾脂中Fsp27基因的表达量极显著高于营养匮乏期(P<0.01)。绵羊Fsp27基因在不同尾脂沉积能力品种群体中共检测到25个突变位点,其中位于第3外显子g. 16771741的G/A突变以及第5外显子g. 16774969的C/T突变均为错义突变,且与绵羊尾脂沉积能力高度相关。g. 16771741的G/A突变在尾脂沉积能力较强的阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中以G等位基因为主,分别占到86.8%、83.7%和85.7%,而尾脂沉积能力较差的中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体中G等位基因分别仅占30.3%和11.1%。g. 16774969的C/T突变在阿勒泰羊群体中以T等位基因为主,TT基因型占84.7%,CT基因型占15.3%,没有检测到CC基因型;在短脂尾型的小尾寒羊和湖羊群体中,TT和CT基因型也分别占到65.9%、50.4%和22.7%、41.1%,而在长瘦尾的中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体中则以CC基因型为主,分别占到97.4%和69.4%,没有检测到TT基因型。以上研究结果表明,Fsp27基因在阿勒泰羊尾脂中高表达,且其在尾脂中的表达量与阿勒泰羊的营养状态密切相关,Fsp27基因第3外显子g. 16771741的G/A突变以及第5外显子g. 16774969的C/T突变与绵羊尾脂沉积能力高度相关,可以作为理想的分子标记用于低脂肪绵羊品种的选育。 展开更多
关键词 绵羊 Fsp27 尾脂 SNP
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布鲁氏菌疫苗(S2株)气雾免疫绵羊血清抗体阳性率优于口服免疫 被引量:1
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作者 黄新 韩猛立 +12 位作者 张星星 张宾 汪保 吴桐忠 晁旭东 何立雄 韩文国 蒲新竹 陈朝阳 罗文毅 彭剑 何延华 钟发刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期24-28,33,共6页
本研究旨在检测经气雾和口服途径接种布鲁氏菌疫苗(S2株)后羊特异性血清抗体阳性率的变化以确定其相对免疫功效。布鲁氏菌阴性羊群分别通过口服(1×1010 CFU剂量)和气雾(1×1010、8×109、6×109、4×109、2×... 本研究旨在检测经气雾和口服途径接种布鲁氏菌疫苗(S2株)后羊特异性血清抗体阳性率的变化以确定其相对免疫功效。布鲁氏菌阴性羊群分别通过口服(1×1010 CFU剂量)和气雾(1×1010、8×109、6×109、4×109、2×109、1×109 CFU和5×108 CFU共7种剂量)接种布鲁氏菌疫苗(S2株)。接种后30、60、90、120 d和320 d分别采集试验羊的血清样品,并用虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)进行血清抗体检测。结果显示,口服免疫组接种后30d抗体阳性率达到最高(羔羊RBPT:38.00%,SAT:32.00%;成年羊RBPT:72.00%,SAT:68.00%),30~90 d抗体阳性率下降较快,90 d后抗体阳性率降到较低水平(RBPT﹤12.00%,SAT﹤10.00%);气雾免疫组,羔羊接种后30d,阳性率最高升至40.00%(RBPT:16.70%~40.00%,SAT:11.10%~30.00%),60d阳性率降至20.00%以内(RBPT:0~20.00%,SAT:5.60%~20.00%),90d阳性率降至10.00%以内,不同剂量气雾免疫羔羊阳性率变化差异不显著(P>0.05)。成年羊(除5×108 CFU组外),接种后30d阳性率升至84.81%(SAT:84.81%~88.50%),60d阳性率低于53.33%(SAT:44.30%~53.33%),90d阳性率低于24.39%(SAT:18.66%~24.39%),120d阳性率低于10.00%;5×108CFU组接种后30d阳性率较低(RBPT:48.70%,SAT:44.73%);成年羊气雾免疫组1×109~1×1010 CFU剂量同一时间点,阳性率结果变化差异不显著(P>0.05),与5×108 CFU组在30d和60d变化差异极显著(P<0.01)。口服免疫组抗体阳性率曲线变化趋势与气雾免疫组基本一致,接种后30d时都达到峰值,羔羊阳性率均较低,成年羊气雾免疫组阳性率高出口服免疫组18.84%。本试验表明,布鲁氏菌疫苗(S2株)气雾免疫在成年羊体内产生的特异性血清抗体阳性率优于口服免疫。 展开更多
关键词 绵羊布鲁氏菌 S2疫苗 气雾免疫 口服免疫 特异性抗体
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新疆牛源溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性和毒力分析 被引量:22
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作者 贾开文 操义恒 +8 位作者 王子杰 胡亚辉 周霞 黄新 钟发刚 吴桐忠 韩猛立 张星星 张倩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期201-206,共6页
为鉴定新疆石河子地区某规模化牛场表现呼吸道感染症状荷斯坦病牛的细菌性病原及其分离株的血清型、耐药基因和毒力基因携带情况,本研究无菌采集病死牛病变组织,采用常规细菌分离培养及PCR方法鉴定细菌,采用PCR方法检测其血清型、耐药... 为鉴定新疆石河子地区某规模化牛场表现呼吸道感染症状荷斯坦病牛的细菌性病原及其分离株的血清型、耐药基因和毒力基因携带情况,本研究无菌采集病死牛病变组织,采用常规细菌分离培养及PCR方法鉴定细菌,采用PCR方法检测其血清型、耐药基因和毒力基因携带情况,采用K-B纸片法检测其耐药表型。结果显示,从病变组织样品中分离了4株荚膜A1型的溶血性曼氏杆菌(Mh-1、Mh-2、Mh-3、Mh-4);耐药表型显示4株Mh对β-内酰胺类(青霉素)、氨基糖苷类(链霉素)和糖肽类(替考拉宁)药物耐药;耐药基因仅检测到β-内酰胺类基因blaTEM;分离菌株Mh-1携带8类9种毒力基因中的5种(LKT-C、gs60、fbpA、gapA、ptfA),Mh-2携带其中的4种(LKT-C、plpB、dnaN、ptfA),Mh-3携带其中的7种(LKT-C、plpB、gs60、fbpA、gapA、dnaN、ptfA),Mh-4携带其中的6种(LKT-C、plpB、gs60、fbpA、gapA、ptfA)。同时分离出1株荚膜A型,脂多糖L3型的多杀性巴氏杆菌(Pm-1);Pm-1仅对克林霉素耐药;Pm-1携带6类12种不同的毒力基因(exbD、tonB、hsf2、ptfA、oma87、ompA、ompH、plpB、psl、nanB、tbpA、pmHAS)。将Mh和Pm-1均以3.2×10^(8) cfu/mL的剂量感染30只小鼠进行致病性试验,结果显示,4株Mh感染小鼠于3 d内陆续全部死亡,Pm-1感染小鼠于10 h内全部死亡,表明分离菌株Mh和Pm-1均携带致病性毒力基因,且具有较强的致病性。结果表明,新疆石河子地区某集约化牛场表现为呼吸道症状病死牛的细菌性病原是牛源Mh和Pm混合感染,两者均携带与呼吸道粘附侵染相关的IV型菌毛基因ptfA,且Pm-1株主要对青、链霉素耐药,对大多数药物较敏感,为本地区牛呼吸道疾病综合征的流行病学调查与临床治疗提供参考依据。 展开更多
关键词 牛呼吸道感染 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 耐药表型 耐药基因和毒力基因
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寄生虫DNA疫苗研究进展 被引量:5
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作者 王宁 赵鹏鹏 +3 位作者 张艳艳 马勋 王正荣 薄新文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期1034-1045,共12页
寄生虫病带来了相当大的社会经济影响,人畜共患寄生虫给人们带来巨大的疾病负担,并给养殖业造成严重的经济损失。因此,寄生虫病的防治是人们迫切需要研究的课题。寄生虫存在很多形式的免疫逃避机制,灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗等... 寄生虫病带来了相当大的社会经济影响,人畜共患寄生虫给人们带来巨大的疾病负担,并给养殖业造成严重的经济损失。因此,寄生虫病的防治是人们迫切需要研究的课题。寄生虫存在很多形式的免疫逃避机制,灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗等未达到理想的预防寄生虫病的效果,很多研究表明DNA疫苗有望成为预防和治疗寄生虫病的有效方法。DNA疫苗是一种新型疫苗,可同时诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫,通过在宿主内表达外源蛋白来提供保护性免疫。DNA疫苗与其他亚单位疫苗不同的是,免疫原由摄取抗原编码DNA的细胞在宿主内合成。体内蛋白质的合成也能进行抗原加工、修饰并递呈到宿主的免疫系统中,类似于自然感染的方式。笔者就DNA疫苗免疫机制、设计原则、免疫途径、优缺点及近几年寄生虫DNA疫苗的研究进展进行综述,以期为寄生虫DNA疫苗的开发提供理论参考。 展开更多
关键词 寄生虫DNA疫苗 免疫机制 设计原则 免疫途径
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CRISPR/Cas9系统在寄生虫基因组编辑中的应用研究进展 被引量:4
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作者 马静 张艳艳 +3 位作者 贾新月 马勋 王正荣 薄新文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3713-3725,共13页
基因编辑是一种依赖于核酸内切酶对目标基因进行定向改造的现代生物学技术,可实现特定片段的加入、删除,以及特定碱基的插入、缺失、替换等。CRISPR/Cas9系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated nu... 基因编辑是一种依赖于核酸内切酶对目标基因进行定向改造的现代生物学技术,可实现特定片段的加入、删除,以及特定碱基的插入、缺失、替换等。CRISPR/Cas9系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated nuclease 9)是在细菌和古细菌中发现的一种用来抵御外源质粒和噬菌体入侵的获得性免疫系统,经改造后已成为一种新型的基因组编辑工具,因其具有操作简单、成本低、切割效率高等优点被广泛应用于多种动物、植物及微生物等的基因组编辑。应用CRISPR/Cas9系统在进行基因编辑的基础上可分析和验证基因功能、研究遗传育种及筛选药物靶点和疫苗分子等,以达到减弱病原微生物致病性、增强动植物抗病性、治疗遗传性疾病、病毒性感染及肿瘤等目的。寄生虫因其生活史复杂,与细菌和病毒相比基因组较大、结构较复杂,缺乏有效的研究工具等原因,使得相关研究进展缓慢,而CRISPR/Cas9基因编辑技术的出现为基因功能研究提供了新的技术手段。笔者对CRISPR/Cas9系统的发现及其在寄生虫基因组编辑中的应用研究进展进行综述,并对该系统的应用现状和发展进行总结和展望。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9系统 寄生虫
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新疆小海子垦区牛梨形虫感染情况的调查 被引量:3
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作者 张峰 王正荣 +3 位作者 蒋建军 薄新文 张艳艳 贾春英 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期126-129,共4页
为调查新疆小海子垦区牛梨形虫感染情况,采用PCR对垦区9个采样点共568份牛全血样本进行检测,扩增牛梨形虫18S rRNA基因部分序列并测序,经比对确定虫种,构建系统发育树。结果显示,共检测出44份阳性样品,总阳性率为7.75%,其中45团的牛感... 为调查新疆小海子垦区牛梨形虫感染情况,采用PCR对垦区9个采样点共568份牛全血样本进行检测,扩增牛梨形虫18S rRNA基因部分序列并测序,经比对确定虫种,构建系统发育树。结果显示,共检测出44份阳性样品,总阳性率为7.75%,其中45团的牛感染率较高,约14.58%,叶城牧场与53团的牛感染率较低,均在5%以下,46团的牛未发现梨形虫。在44份阳性样品中,发现42份环形泰勒虫(Theileria annulata),2份感染东方泰勒虫(T.orientalis),未发现巴贝斯虫感染。此次对于新疆小海子垦区牛梨形虫的感染情况和感染虫种进行了调查,提供了一线数据,为小海子垦区牛梨形虫病的综合防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 泰勒虫 聚合酶链反应 感染率
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动物寄生虫口服疫苗研究进展 被引量:3
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作者 贾新月 马静 +3 位作者 张艳艳 马勋 王正荣 薄新文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3569-3580,共12页
寄生虫病严重影响全球人类、动物的健康安全,所带来的经济损失巨大。因此,有必要研制针对寄生虫病的疫苗,以阻断寄生虫病在动物与动物、动物与人类之间的传播。寄生虫存在多种免疫逃避机制,已开发的亚单位疫苗、减毒活疫苗、灭活疫苗均... 寄生虫病严重影响全球人类、动物的健康安全,所带来的经济损失巨大。因此,有必要研制针对寄生虫病的疫苗,以阻断寄生虫病在动物与动物、动物与人类之间的传播。寄生虫存在多种免疫逃避机制,已开发的亚单位疫苗、减毒活疫苗、灭活疫苗均未达到理想的预防效果,且商品化疫苗多为针剂疫苗,普通针剂疫苗操作繁琐、运输储藏要求高且易使动物发生应激,直接影响经济成本,因此在实际生产当中需更多操作简单、便于储存、免疫成本更低的新型疫苗,以有效防控寄生虫病。诸多研究表明口服疫苗操作方便,只需通过口服方式投喂且宿主获得的抗体效价水平较高,有望成为预防寄生虫病的有效手段。口服疫苗是一种新型疫苗,依靠宿主的黏膜免疫系统来产生作用,即通过机体黏膜表面接种便可同时诱导机体产生持久的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫,为宿主提供高效的免疫保护。与传统疫苗相比,口服疫苗最显著的优点就是便于接种且应激小,还能形成强大的黏膜免疫屏障。但胃肠道的环境及易形成免疫耐受等因素也为口服疫苗的开发带来很大的挑战。笔者就黏膜免疫系统与口服疫苗作用机理、近几年寄生虫口服疫苗的研究进展及优点与挑战进行综述,以期为寄生虫口服疫苗的开发提供理论依据。 展开更多
关键词 寄生虫口服疫苗 黏膜免疫 作用机理
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微口膜壳绦虫DAZ基因的原核表达、转录水平及组织定位研究 被引量:1
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作者 马静 张艳艳 +3 位作者 贾新月 马勋 王正荣 薄新文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期129-137,共9页
为研究微口膜壳绦虫无精子症(DAZ)基因的生物学功能,本研究利用在线软件对WormBase中微口膜壳绦虫DAZ基因(HmN_000202400)及其编码蛋白进行生物信息学分析,并构建DAZ基因的遗传进化树。结果显示,微口膜壳绦虫DAZ基因cDNA全长1494 bp,编... 为研究微口膜壳绦虫无精子症(DAZ)基因的生物学功能,本研究利用在线软件对WormBase中微口膜壳绦虫DAZ基因(HmN_000202400)及其编码蛋白进行生物信息学分析,并构建DAZ基因的遗传进化树。结果显示,微口膜壳绦虫DAZ基因cDNA全长1494 bp,编码497个氨基酸,存在保守结构域和完整的开放阅读框,无跨膜区和信号肽,且与缩小膜壳绦虫和微小膜壳绦虫亲缘关系较近。本研究经PCR扩增DAZ基因,构建重组质粒pET-22b-DAZ,经双酶切鉴定正确后经IPTG诱导表达,并采用His-Ni柱亲和层析法纯化,经SDS-PAGE检测结果显示,所表达的重组DAZ蛋白(rDAZ)以包涵体形式存在,分子量约为57 ku,且纯化效果较好。利用rDAZ免疫新西兰大白兔,制备兔rDAZ的多克隆抗体,经间接ELISA检测其效价,并利用western blot检测其反应原性。结果显示,该多克隆抗体效价可达1∶128000,且能够与微口膜壳绦虫的天然总蛋白反应,表明获得了反应原性较好的兔rDAZ的多克隆抗体。为研究DAZ的生物学特性,本研究采用荧光定量PCR(qPCR)分别检测DAZ基因在微口膜壳绦虫成虫、似囊尾蚴及虫卵中的相对转录水平;将微口膜壳绦虫制备石蜡切片观察虫体的各组织结构;利用制备的兔rDAZ多克隆抗体采用间接免疫荧光试验(IFA)检测DAZ蛋白在虫体各组织中的定位。qPCR结果显示,DAZ基因在微口膜壳绦虫成虫、似囊尾蚴及虫卵中均不同程度转录,与其虫卵相比,DAZ基因在似囊尾蚴中的转录水平极显著升高(P<0.01),但在成虫中显著降低(P<0.05);石蜡切片观察结果显示,微口膜壳绦虫生殖系统发达,发育成熟的睾丸、卵巢、卵黄腺、子宫、受精囊等主要分布在成节中,而孕节内的其他生殖器官则逐渐退化,唯有子宫扩大并充满虫卵;IFA结果显示,在微口膜壳绦虫的睾丸中可见特异性绿色荧光,而卵巢、卵黄腺、子宫、受精囊等中则无该绿色荧光。上述结果表明,DAZ基因可能在微口膜壳绦虫生殖细胞的初始发育阶段发挥重要调控作用,微口膜壳绦虫不同节片内生殖器官的发育程度不同,且DAZ主要在微口膜壳绦虫的睾丸中表达。本研究首次发现微口膜壳绦虫DAZ基因可能与雄性生殖系统的发育调控有关,该结果为进一步探究其调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 微口膜壳绦虫 DAZ基因 原核表达 多克隆抗体 间接免疫荧光试验
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多胎萨福克与阿勒泰羊杂交F1羔羊生长性能研究 被引量:2
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作者 于刚 沈思军 +4 位作者 晁旭东 杨华 代蓉 杨永林 张宾 《草食家畜》 2020年第6期1-5,共5页
【目的】多胎萨福克具有良好的生长发育和产肉性能,本研究分析了多胎萨福克为父本和阿勒泰羊为母本的杂交F1羔羊生长发育情况,为开展合理的杂交利用提供依据。【方法】测定羔羊从出生到断奶前的体重数据,分析羔羊的生长发育情况。【结... 【目的】多胎萨福克具有良好的生长发育和产肉性能,本研究分析了多胎萨福克为父本和阿勒泰羊为母本的杂交F1羔羊生长发育情况,为开展合理的杂交利用提供依据。【方法】测定羔羊从出生到断奶前的体重数据,分析羔羊的生长发育情况。【结果】结果显示:(1)产羔数与多胎萨福克羔羊初生重相关,羔羊初生重随产羔数的增加而降低;(2)萨阿杂交F1羔羊初生重显著高于多胎萨福克羔羊(P<0.01),杂交优势明显;(3)在萨阿杂交F1羔羊群体上初步建立的羔羊生长发育评测指数表现出一定的正态分布特点,且不同性别指数的分布范围略有不同。【结论】多胎萨福克羊与阿勒泰羊中的杂交效果明显,杂交羔羊的初生重和断奶前日增重都有显著提高。 展开更多
关键词 杂交羔羊 体重 多胎萨福克
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优质绵羊冷冻胚胎引进及胚胎移植试验 被引量:2
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作者 张新军 刘长彬 +1 位作者 倪建宏 万鹏程 《新疆农垦科技》 2016年第11期35-37,共3页
2014—2015年先后从澳大利亚西奥谷河育种公司引进萨福克和肉用美利奴肉羊冷冻胚胎773枚。解冻后可用于移植的胚胎为739枚,移植受体羊739只。其中,A级胚胎553枚,B级胚胎186枚,且A级胚胎移植受胎率为50.27%(278/553),明显高于B级胚胎的39... 2014—2015年先后从澳大利亚西奥谷河育种公司引进萨福克和肉用美利奴肉羊冷冻胚胎773枚。解冻后可用于移植的胚胎为739枚,移植受体羊739只。其中,A级胚胎553枚,B级胚胎186枚,且A级胚胎移植受胎率为50.27%(278/553),明显高于B级胚胎的39.25%(73/186),差异显著。同时,对比了大尾羊和细毛羊2种受体羊品种间的受胎率,结果为差异不显著。不同饲养条件下胚胎移植受胎率结果显示,全舍饲羊受胎率为39.56%(178/450),放牧羊受胎率为49.48%(143/289),两者差异显著。大规模进口肉羊冷冻胚胎进行移植在基层生产单位的成功应用,为肉羊产业发展提供了优良的种质资源。 展开更多
关键词 绵羊 冷冻胚胎 胚胎移植
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细粒棘球绦虫原头蚴microRNA表达谱分析 被引量:4
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作者 王正荣 薄新文 +4 位作者 张艳艳 马勋 卢平萍 徐梦飞 孟季蒙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2477-2485,共9页
旨在解析miRNA在细粒棘球绦虫原头蚴中的表达谱特性,为进一步揭示miRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用及调控机制提供理论依据。从患病绵羊肝无菌采集细粒棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,构建原头蚴miRNA文库,利用RNA sequencing技术进行... 旨在解析miRNA在细粒棘球绦虫原头蚴中的表达谱特性,为进一步揭示miRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用及调控机制提供理论依据。从患病绵羊肝无菌采集细粒棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,构建原头蚴miRNA文库,利用RNA sequencing技术进行测序分析。结果表明,本研究从细粒棘球绦虫原头蚴中分离得到109个已知的miRNA分子,同时得到189个新的miRNA发夹前体分子。靶基因的预测结果显示,已知miRNA共有132个靶基因,而新发现的miRNA共有3 152个靶基因。进一步的研究发现这些miRNA分子广泛参与虫体生长发育相关的关键信号通路,诸如wnt、cAMP、Hedgehog、NF-κB、Notch以及胆酸盐等信号通路,研究又进一步采用实时荧光定量PCR以及原位杂交技术对虫体经典wnt信号通路相关的miRNA分子以及其靶标基因进行了差异表达以及组织定位研究。结果提示,HG328413.1_36258和β-catenin、HG328414.1_36364*和dis以及HG328399.1_25846和axin可能存在潜在的调控关系。综上所述,本研究在细粒棘球绦虫原头蚴中发现了大量的新的miRNA分子,丰富了原头蚴miRNA的数据,为进一步解析miRNA在细粒棘球绦虫原头蚴发育中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 MICRORNA 原头蚴 表达谱
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