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SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术
被引量：
8
1
作者
程晓甜
阿地力·沙塔尔
+2 位作者
张伟
李新泉
玛依拉
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期60-65,共6页
应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种...
应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种实蝇来验证。SYBR Green PCR实时荧光反应的灵敏度用40,20,10,1,0.1,0.01,0.001 ng·μL^-1 7个浓度枣实蝇DNA模板来检测。结果表明：SYBR Green PCR的检测限度达0.01 ng·μL^-1以下,最适模板DNA浓度为1～20 ng·μL^-1。SYBR Green实时荧光PCR的可靠性可用枣实蝇不同虫态（幼虫、蛹、成虫）的扩增曲线、熔解曲线及PCR产物的琼脂糖凝胶电泳来检验。成虫、幼虫和蛹3种不同虫态的枣实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳条带分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性;其平均熔解温度为（75.3±0.1）℃,并获得一段长为205 bp的特异性目标片段,说明在枣实蝇成虫为模板的基础上建立的SYBR Green实时荧光PCR方法同时适用于幼虫、蛹的快速鉴定,可将不同虫态的枣实蝇与近似种类区分开来。
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关键词
枣实蝇
SYBR
Green
实时荧光PCR
溶解曲线
鉴定
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职称材料
题名
SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术
被引量：
8
1
作者
程晓甜
阿地力·沙塔尔
张伟
李新泉
玛依拉
机构
新疆农业大学林学与园艺学院、新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室
新疆
出入境检验检疫局
技术
中心
出处
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期60-65,共6页
基金
新疆维吾尔自治区科技计划项目“特色林果重大病虫持续高效绿色防控技术研究”(201130102-3)
新疆维吾尔自治区自治区重点学科森林培育资助项目
新疆维吾尔自治区林业有害生物防治检疫局项目“枣实蝇快速检测和监测技术研发”
文摘
应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇的方法。利用枣实蝇（mtDNA）中COⅠ基因序列,设计筛选出1对种的特异引物CarF/CarR。引物的特异性分别用桔小实蝇、瓜实蝇、南瓜实蝇、番石榴实蝇和桃果实蝇5种实蝇来验证。SYBR Green PCR实时荧光反应的灵敏度用40,20,10,1,0.1,0.01,0.001 ng·μL^-1 7个浓度枣实蝇DNA模板来检测。结果表明：SYBR Green PCR的检测限度达0.01 ng·μL^-1以下,最适模板DNA浓度为1～20 ng·μL^-1。SYBR Green实时荧光PCR的可靠性可用枣实蝇不同虫态（幼虫、蛹、成虫）的扩增曲线、熔解曲线及PCR产物的琼脂糖凝胶电泳来检验。成虫、幼虫和蛹3种不同虫态的枣实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳条带分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性;其平均熔解温度为（75.3±0.1）℃,并获得一段长为205 bp的特异性目标片段,说明在枣实蝇成虫为模板的基础上建立的SYBR Green实时荧光PCR方法同时适用于幼虫、蛹的快速鉴定,可将不同虫态的枣实蝇与近似种类区分开来。
关键词
枣实蝇
SYBR
Green
实时荧光PCR
溶解曲线
鉴定
Keywords
Carpomya vesuviana
SYBR Green
real-time PCR
melting curve
rapid identification
分类号
Q965 [生物学—昆虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术
程晓甜
阿地力·沙塔尔
张伟
李新泉
玛依拉
《林业科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
8
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