陆地棉bZIP转录因子响应非生物胁迫表达谱分析 被引量：4

1

作者 李月 许朋斐 +4 位作者 刘超 代培红 葛杰 曲延英 刘晓东 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期562-569,共8页

低温、干旱和高盐是影响棉花生长发育和产量的重要限制因素。b ZIP转录因子在植物非生物胁迫反应中起重要作用。本研究利用生物信息学的方法从陆地棉中鉴定了24个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP1~Ghb ZIP24。系统进化树分析表明,这24... 低温、干旱和高盐是影响棉花生长发育和产量的重要限制因素。b ZIP转录因子在植物非生物胁迫反应中起重要作用。本研究利用生物信息学的方法从陆地棉中鉴定了24个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP1~Ghb ZIP24。系统进化树分析表明,这24个家族成员主要聚集在A、B、C、D、E、G、I、S这8类亚家族。通过RT-PCR的方法分析了棉花（Gossypium hirsutum L.）Ghb ZIPs基因在高盐（200 mmol/L Na Cl）、干旱、4℃低温等非生物胁迫处理下的表达模式。结果表明,19个基因响应高盐胁迫、11个基因对干旱胁迫有应答反应,15个基因有冷胁迫应答。此外,有4个基因（Ghb ZIP4、Ghb ZIP7、Ghb ZIP21和Ghb ZIP23）在3种处理下均有应答反应。以上研究结果表明,Ghb ZIPs在陆地棉的非生物胁迫适应过程中可能具有重要的作用。本研究为进一步探索棉花b ZIP转录因子在抗逆反应中的重要作用和利用基因操作手段提高棉花抗逆性提供了重要信息。 展开更多

关键词 棉花 bZIP转录因子 非生物胁迫 RT-PCR 表达分析

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基于SSR标记新疆陆地棉的DNA指纹图谱构建及遗传多样性分析 被引量：16

2

作者 王欣怡 李雪源 +7 位作者 龚照龙 王俊铎 范李萍 郑巨云 梁亚军 郭江平 买买提.莫明 艾先涛 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期308-315,共8页

【目的】利用Simple sequence repeats(SSR)标记构建新疆近40年间审定的120个陆地棉品种的DNA指纹图谱并进行遗传多样性分析。【方法】从586对候选引物中筛选得到78对多态性高、扩增稳定且均匀分布于棉花染色体上的引物,并用这78对引物... 【目的】利用Simple sequence repeats(SSR)标记构建新疆近40年间审定的120个陆地棉品种的DNA指纹图谱并进行遗传多样性分析。【方法】从586对候选引物中筛选得到78对多态性高、扩增稳定且均匀分布于棉花染色体上的引物,并用这78对引物构建120个陆地棉品种的DNA指纹图谱。【结果】78对核心引物在120个材料中检测到392个等位位点,其中多态性位点324个,多态性比率达82.7%。24个标记位点在17个品种上具有特征谱带。采用12对引物组合即可鉴定120个棉花品种。聚类分析显示,120个陆地棉品种遗传相似系数变化范围为0.50~0.96,平均为0.73,遗传相似系数偏高,表明新疆陆地棉品种的遗传基础较狭窄。【结论】引物组合法是构建DNA指纹图谱最有效的方法。遗传相似系数矩阵将120个陆地棉品种分为三大类群,与系谱来源较为吻合。 展开更多

关键词 新疆 陆地棉 SSR分子标记 DNA指纹图谱 遗传多样性

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棉花bZIP转录因子基因GhbZIP15的克隆与表达分析 被引量：9

3

作者 李月 许朋斐 +4 位作者 陈全家 代培红 刘超 曲延英 刘晓东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期515-523,共9页

b ZIP转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中有重要作用。本研究依据生物信息学分析,采用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法从棉花中克隆了一个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP15(Gen Bank登录号为KP938299)。... b ZIP转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中有重要作用。本研究依据生物信息学分析,采用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法从棉花中克隆了一个b ZIP转录因子基因,命名为Ghb ZIP15(Gen Bank登录号为KP938299)。该基因c DNA全长1980 bp,其开放阅读框为966 bp,编码321个氨基酸的蛋白,预测分子量为37.1 k D,等电点为7.44。SMART蛋白结构预测发现,该蛋白含有b ZIP家族典型的BRLZ碱性结构域和亮氨酸拉链,属于B-zip1家族。系统进化树分析表明Ghb ZIP15属于b ZIP转录因子AREB亚家族,和拟南芥A亚家族的Atb ZIP12,At ABF1和At ABF2亲缘关系最近。洋葱表皮细胞中瞬时表达分析表明,Ghb ZIP15主要定位于细胞核中。RT-PCR分析表明Ghb ZIP15对干旱、高盐、低温等处理都有一定程度的响应,推测该基因对棉花非生物胁迫的调控起重要作用。 展开更多

关键词 棉花 b ZIP转录因子 非生物胁迫 GHB ZIP15 克隆表达

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海岛棉GbTCP15基因的克隆与表达分析 被引量：8

4

作者 郑凯 倪志勇 +3 位作者 曲延英 王怡 蔡永生 陈全家 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1925-1932,共8页

根据陆地棉GhTCP15基因序列,设计1对引物,通过PCR技术从海岛棉品种‘新海21号’中克隆一个同源基因,命名为GbTCP15。海岛棉GbTCP15基因具有一个1 056bp开放阅读框,编码351个氨基酸,预测分子量约为38 057.4kD,等电点为9.01,序列中含有一... 根据陆地棉GhTCP15基因序列,设计1对引物,通过PCR技术从海岛棉品种‘新海21号’中克隆一个同源基因,命名为GbTCP15。海岛棉GbTCP15基因具有一个1 056bp开放阅读框,编码351个氨基酸,预测分子量约为38 057.4kD,等电点为9.01,序列中含有一个高度保守的TCP结构域。氨基酸序列对比表明,海岛棉GbTCP15蛋白与其他植物中的TCP蛋白有较高的一致性,说明该基因在进化过程中是相当保守的。亚细胞定位结果显示,GbTCP15主要分布在细胞核上,推测GbTCP15在复制和转录的过程中发挥着信号转导以及转录调控等作用。进化树分析表明,海岛棉GbTCP15基因与雷蒙德氏棉GrTCP15基因分布在同一分支上。实时荧光定量PCR表明,海岛棉GbTCP15基因在茎部和15d纤维中表达量较高。研究表明,GbTCP15转录因子可能参与棉花纤维以及表皮毛的发育。 展开更多

关键词 海岛棉 TCP 克隆 序列分析 表达分析

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海岛棉5个CBF/DREB基因的克隆与表达分析 被引量：8

5

作者 李月 代培红 +5 位作者 刘超 苏秀娟 孔丽颖 李翔 李才运 刘晓东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期42-51,共10页

低温、干旱和盐渍是影响作物生长、产量和全球地理分布的重要非生物胁迫。CBF/DREB转录因子是参与植物非生物胁迫应答反应的重要调控蛋白。为了更好地了解棉花CBF家族基因,通过生物信息学的方法,从海岛棉中克隆了5个具有完整开放阅读框... 低温、干旱和盐渍是影响作物生长、产量和全球地理分布的重要非生物胁迫。CBF/DREB转录因子是参与植物非生物胁迫应答反应的重要调控蛋白。为了更好地了解棉花CBF家族基因,通过生物信息学的方法,从海岛棉中克隆了5个具有完整开放阅读框的CBF基因,命名为Gb CBF1―Gb CBF5。这5个基因编码的蛋白与其他植物冷胁迫相关的CBF蛋白具有高度的保守性,含有1个AP2功能结构域和2个特征基序。系统进化树分析表明,这5个基因与拟南芥的3个参与冷胁迫的CBF基因一起聚类在DREB亚家族中的A-1亚组。通过RT-PCR的方法分析了海岛棉基因Gb CBF1―5在高盐(200 mmol·L-1 Na Cl)、干旱、4℃低温等非生物胁迫处理下的表达模式。结果表明其中2个基因在冷胁迫下上调表达,5个基因在干旱和盐处理下均下调表达。这些为进一步探索CBF基因在棉花逆境胁迫应激反应中的作用提供了有价值的信息。 展开更多

关键词 棉花 海岛棉 CBF/DREB转录因子 基因克隆 基因表达调控 冷胁迫

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小麦盐胁迫相关基因的克隆与表达分析 被引量：8

6

作者 于月华 王莉萍 +4 位作者 高文伟 陈全家 耿洪伟 张巨松 曲延英 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1073-1078,共6页

采用RT-PCR方法,从小麦中克隆获得1个盐诱导小麦MYB类转录因子基因TaSIM(Triticum aestivum salt-induced MYB),该基因cDNA全长1 213bp,具有1个831bp的开放阅读框,编码276个氨基酸,预测分子量约为29.903kD,等电点为10.12,推测的氨基酸... 采用RT-PCR方法,从小麦中克隆获得1个盐诱导小麦MYB类转录因子基因TaSIM(Triticum aestivum salt-induced MYB),该基因cDNA全长1 213bp,具有1个831bp的开放阅读框,编码276个氨基酸,预测分子量约为29.903kD,等电点为10.12,推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。系统发生树分析表明,TaSIM与二穗短柄草XP_003576185亲缘关系最近。半定量RT-PCR检测结果显示,TaSIM基因受盐胁迫诱导表达。亚细胞定位结果显示,TaSIM-hGFP融合蛋白定位于细胞核中。研究结果表明,小麦TaSIM基因编码的蛋白可能在细胞核内参与小麦对盐胁迫的应答反应。 展开更多

关键词 小麦 MYB类转录因子 基因克隆 表达分析

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棉花Trihelix转录因子GhGT29基因的克隆及功能分析 被引量：7

7

作者 李月 刘晓东 +2 位作者 董永梅 谢宗铭 陈受宜 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1218-1227,共10页

Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用,克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花抗逆性奠定基础。本文依据生物信息学分析,采用RT-PCR方法从陆地棉中克隆了一个Trihelix转... Trihelix转录因子在植物抵御各种逆境胁迫中扮演重要作用,克隆棉花Trihelix转录因子基因并分析其表达特性和功能,为最终利用转基因手段改良棉花抗逆性奠定基础。本文依据生物信息学分析,采用RT-PCR方法从陆地棉中克隆了一个Trihelix转录因子基因,命名为GhGT29(Gen Bank登录号:JQ013097)。该基因最大开放阅读框(ORF)为1092 bp,编码363个氨基酸,预测分子量为40.9 k Da,等电点为5.45。SMART蛋白结构预测发现,该蛋白含有1个Trihelix家族典型的SANT结构域。系统进化树分析表明,GhGT29属于Trihelix转录因子SH4亚家族,与拟南芥At SH4-like1、At SH4-like2亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明,GhGT29受高盐、干旱、低温胁迫和ABA诱导表达;GhGT29在陆地棉的根、茎、叶、花、开花后当天胚珠以及开花后12 d(12 DPA)纤维中均有表达,其中在花中表达量最高,在茎中表达量最低。利用拟南芥原生质体系统进行分析,结果显示GhGT29主要定位于细胞核中,并且具有转录激活活性。以上结果表明GhGT29基因可能参与棉花逆境信号通路中对抗逆功能基因表达的调控。 展开更多

关键词 棉花 Trihelix转录因子 非生物胁迫 亚细胞定位 转录激活

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大豆不同品种农艺性状及产量的比较 被引量：9

8

作者 严勇亮 张恒 +4 位作者 曲可佳 时晓磊 王兴州 张金波 丛花 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1653-1662,共10页

【目的】鉴定引进大豆品种(系)在新疆南疆地区的适应性和丰产性,为该地区麦茬复播大豆品种更新换代和推广应用提供科学依据。【方法】测定参加试验的27个大豆新品种(系)的农艺性状和产量,应用方差分析、相关分析、主成分分析和聚类分析... 【目的】鉴定引进大豆品种(系)在新疆南疆地区的适应性和丰产性,为该地区麦茬复播大豆品种更新换代和推广应用提供科学依据。【方法】测定参加试验的27个大豆新品种(系)的农艺性状和产量,应用方差分析、相关分析、主成分分析和聚类分析等方法综合鉴定评价。【结果】产量最高的品种为SC15-11,产量为266.995 kg/667m^(2),与对照相比增产47.872%。产量与单株粒数呈极显著正相关(P<0.01),与单株有效荚数呈极显著正相关(P<0.01)。在欧式距离为5.00时可将所有材料分为3个类群,分别为高产、中产和低产品种。【结论】SC15-11、JO14和冀豆22等品种综合性状表现优,可在新疆南部地区试验种植。 展开更多

关键词 大豆 品种 农艺性状 产量

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不同处理诱导新海16号体细胞胚胎同步化发生 被引量：9

9

作者 郭家雁 张霞 +5 位作者 丁喜莲 李娟 邓莉 陈全家 孙国清 曲延英 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期385-392,共8页

【目的】旨在探索诱导海岛棉体细胞胚胎同步化发生的有效方法。【方法】以海岛棉品种新海16号的胚性愈伤组织为材料,研究了低温、饥饿和渗透处理诱导体细胞胚胎同步化发生的效果。【结果】在低温处理组中,4℃诱导时体细胞胚胎发生的数... 【目的】旨在探索诱导海岛棉体细胞胚胎同步化发生的有效方法。【方法】以海岛棉品种新海16号的胚性愈伤组织为材料,研究了低温、饥饿和渗透处理诱导体细胞胚胎同步化发生的效果。【结果】在低温处理组中,4℃诱导时体细胞胚胎发生的数量随着低温诱导时间的延长而显著增加;10℃诱导时,不同诱导时间下各处理体细胞胚胎发生的数量差异不显著,但都显著高于对照(28℃);缺磷、缺氮、缺肌醇3种饥饿处理的体细胞胚胎的数量都随着处理时间的延长而减少;渗透处理组中,在含40 g·L-1葡萄糖的培养基上诱导7 d的效果最佳。【结论】4℃处理3 d、缺磷处理5 d、缺氮处理5 d以及40 g·L-1葡萄糖诱导7 d可以显著促进新海16号的体细胞胚胎同步化发生,其中4℃处理3 d的诱导效果最佳。 展开更多

关键词 海岛棉 体细胞胚胎 诱导 同步化

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棉花海陆棉杂交后代农艺与纤维品质性状相关性研究 被引量：7

10

作者 冯文林 陈全家 曲延英 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期393-401,共9页

【目的】研究同亲本海岛棉与陆地棉正反杂交,后代群体农艺性状和纤维品质的相关性,为棉花育种提供参考依据。【方法】对新疆陆地棉品种新陆中36号和海岛棉品种新海21号正反杂交后代进行测定,利用SPSS软件分析。【结果】正反海陆杂交群体... 【目的】研究同亲本海岛棉与陆地棉正反杂交,后代群体农艺性状和纤维品质的相关性,为棉花育种提供参考依据。【方法】对新疆陆地棉品种新陆中36号和海岛棉品种新海21号正反杂交后代进行测定,利用SPSS软件分析。【结果】正反海陆杂交群体中,农艺性状与纤维品质的相互影响是衣分与绒长呈显著负相关,马克隆值与株高呈显著正相关;纤维品质对纺纱指数的通径分析表明,正交群体HL13中为:比强度>绒长>马克隆值;反交群体LH13中为:比强度>整齐度>绒长>马克隆值。比强度、绒长、马克隆值都能增强纺纱指数。但反交群体LH13中还包括了整齐度,进一步增加了纺纱指数;关联度分析中,正反交群体,纤维品质性状不受环境影响,而农艺性状受环境影响而各不相同。【结论】正反杂交群体,农艺性状与纤维品质间,衣分与绒长呈显著负相关,马克隆值与株高呈显著正相关;纤维品质对纺纱指数的通径分析表明,正交群体中:比强度、绒长、马克隆值,偏重比强度和绒长;反交群体:比强度、整齐度、绒长、马克隆值,偏重比强度和整齐度。因而影响纤维品质的重要因素正反群体大致相同,但也会有区别。 展开更多

关键词 海陆杂交 农艺性状 纤维品质 相关性 关联度

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过表达GH3-5提高拟南芥抗旱的分子机制 被引量：5

11

作者 刘晓东 李月 +3 位作者 王若仲 代培红 刘超 石书兵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期557-562,共6页

[目的]拟南芥GH3-5和GH3-6基因属于生长素早期应答基因GH3基因家族。GH3-5基因过表达植株gh3.5-1D和GH3-6基因过表达植株dfl1-D都表现出生长素响应缺失的表型,然而与野生型对照相比两者的抗旱能力却完全相反。研究GH3-5基因的抗旱机制,... [目的]拟南芥GH3-5和GH3-6基因属于生长素早期应答基因GH3基因家族。GH3-5基因过表达植株gh3.5-1D和GH3-6基因过表达植株dfl1-D都表现出生长素响应缺失的表型,然而与野生型对照相比两者的抗旱能力却完全相反。研究GH3-5基因的抗旱机制,将能解释两者抗旱表型完全相反的原因。[方法]采用液相色谱-质谱联用技术测定了干旱胁迫后gh3.5-1D、dfl1-D及其对应野生型中水杨酸的含量,同时检测了gh3.5-1D/Nah G和gh3.5-1D/npr1两种双突变体的抗旱性。[结果]与野生型相比,干旱胁迫后dfl1-D中水杨酸(SA)的含量没有差异,而gh3.5-1D中SA的含量增加了1倍。进一步研究发现,gh3.5-1D较高的抗旱能力在gh3.5-1D/Nah G双突变体中丧失,而在gh3.5-1D/npr1双突变体中没有明显变化。[结论]水杨酸的过量积累是gh3.5-1D抗旱性发生逆转的原因,然而这种SA赋予的抗旱性可能并不依赖NPR1。 展开更多

关键词 GH3 抗旱性 水杨酸 生长素

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海岛棉GbCBF6基因克隆及其在逆境胁迫下的表达分析 被引量：3

12

作者 李月 孔丽颖 +3 位作者 李才运 李翔 代培红 刘晓东 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1949-1955,共7页

该研究根据棉花生物信息数据库,采用PCR方法从棉花(Gossypium barbadense L.)中克隆了1个CBF/DREB转录因子基因,命名为GbCBF6(GenBank登录号为KR233255)。GbCBF6基因开放阅读框为753bp,编码251个氨基酸,预测分子量为27.82kD,等电点为7.6... 该研究根据棉花生物信息数据库,采用PCR方法从棉花(Gossypium barbadense L.)中克隆了1个CBF/DREB转录因子基因,命名为GbCBF6(GenBank登录号为KR233255)。GbCBF6基因开放阅读框为753bp,编码251个氨基酸,预测分子量为27.82kD,等电点为7.68。氨基酸多重序列比对结果表明,GbCBF6基因编码的蛋白与其他植物冷胁迫相关的CBF蛋白具有高度的同源性,含有1个AP2功能结构域和2个特征序列基序;与棉花已经克隆的4个GhCBF基因的氨基酸序列差异较大,是1个新的棉花CBF基因。系统进化树分析表明,GbCBF6基因属于DREB亚家族中的A-1亚组。RT-PCR分析表明,GbCBF6基因表达受干旱胁迫下调,而受4℃低温上调,在高盐(200mmol/L NaCl)处理下其表达量先下降,后增加。推测GbCBF6基因在棉花非生物胁迫的调控中起重要作用。 展开更多

关键词 棉花(海岛棉) CBF/DREB转录因子 冷胁迫 克隆表达

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棉花GbCBF2基因的克隆、互补表达载体的构建及遗传转化 被引量：3

13

作者 孔丽颖 李翔 +2 位作者 李才运 刘晓东 李月 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期40-45,共6页

为研究棉花CBF2基因在植物抗逆中的作用,构建了p CAMBIA1300-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T植物互补表达载体,并对拟南芥cbf2突变体进行遗传转化。以新海16 c DNA为材料,采用PCR的方法克隆4个棉花CBF2基因,同时克隆拟南芥CBF2基因启动子At ... 为研究棉花CBF2基因在植物抗逆中的作用,构建了p CAMBIA1300-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T植物互补表达载体,并对拟南芥cbf2突变体进行遗传转化。以新海16 c DNA为材料,采用PCR的方法克隆4个棉花CBF2基因,同时克隆拟南芥CBF2基因启动子At CBF2P和终止子At CBF2T,并将这些基因与p Bluescript SK载体连接,构建p Bluescript SK-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T中间过渡载体,用SacⅠ和Bam HⅠ双酶切中间载体,获得At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T核心片段,将此片段插入到p CAMBIA1300表达载体中,构建p CAMBIA1300-At CBF2P-Gb CBF2-At CBF2T植物互补表达载体。以拟南芥cbf2突变体为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,获得转棉花CBF2基因群体。获得转基因株系后,将为筛选出棉花的CBF2抗冻负调控基因及棉花抗逆分子育种奠定基础。 展开更多

关键词 棉花 CBF2基因 互补表达载体 遗传转化

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海岛棉GbTCP5基因的克隆与表达分析 被引量：2

14

作者 王怡 郑凯 +3 位作者 于月华 陈全家 曲延英 倪志勇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期851-856,共6页

该研究根据前期海岛棉的转录组数据,通过PCR技术从海岛棉‘新海21’中克隆1个TCP基因,命名为GbTCP5,其开放阅读框945bp,编码314个氨基酸,预测分子量约34.95kD,等电点8.41;多序列比对结果表明,GbTCP5蛋白含有特征性的TCP保守结构域;进化... 该研究根据前期海岛棉的转录组数据,通过PCR技术从海岛棉‘新海21’中克隆1个TCP基因,命名为GbTCP5,其开放阅读框945bp,编码314个氨基酸,预测分子量约34.95kD,等电点8.41;多序列比对结果表明,GbTCP5蛋白含有特征性的TCP保守结构域;进化树分析表明,GbTCP5基因与GhTCP17基因在同一分支。qPCR实验结果表明,GbTCP5基因在35d纤维中表达量较高,暗示其可能参与棉花纤维的次生壁合成。酵母单杂交实验表明,GbTCP5在SD-Trp-His-Ade缺陷培养基上生长并且X-gal检验显蓝色,说明该基因在酵母体内具有转录激活功能。 展开更多

关键词 海岛棉 TCP 基因克隆 表达分析 转录激活

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基于PCR方法对载体pBluescript Ⅱ SK(＋)及pCAMB Ⅰ A1300的定点突变 被引量：1

15

作者 蒲艳 刘超 +2 位作者 林琪 李继洋 刘晓东 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期83-87,共5页

运用PCR定点突变技术对载体p BluescriptⅡSK(+)以及植物表达载体p CAMBⅠA1300多克隆位点内相关的酶切位点进行改造,为运用CRISPR/Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过酶切鉴定以及测序表明,成功将p Blu... 运用PCR定点突变技术对载体p BluescriptⅡSK(+)以及植物表达载体p CAMBⅠA1300多克隆位点内相关的酶切位点进行改造,为运用CRISPR/Cas9基因编辑载体在构建敲除体系时提供更多便捷可用的酶切位点。通过酶切鉴定以及测序表明,成功将p BluescriptⅡSK(+)载体多克隆位点内XhoⅠ、EcoRⅤ、SmaⅠ、SacⅡ4个酶切位点,分别改造为NheⅠ、MfeⅠ、NsiⅠ、PacⅠ;将p CAMBⅠA1300植物表达载体多克隆位点内的SacⅠ、SalⅠ以2个酶切位点分别改造为NsiⅠ、PacⅠ,为今后构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体及对植物功能基因进行精准定位研究奠定一定的理论基础。 展开更多

关键词 pBluescript Ⅱ SK(+) pCAMB Ⅰ A1300 定点突变 PCR

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小麦DREB基因的克隆及植物表达载体构建 被引量：2

16

作者 于月华 张跃强 +1 位作者 倪志勇 海热古力.阿不力孜 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第12期2925-2927,2931,共4页

脱水应答元件结合蛋白在高等植物应答干旱、高盐和低温胁迫中发挥重要的作用。根据GenBank中小麦(Triticum aestivum L.)DREB基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从小麦中克隆了DREB基因837 bp的编码区。为进一步研究小麦DREB基因的... 脱水应答元件结合蛋白在高等植物应答干旱、高盐和低温胁迫中发挥重要的作用。根据GenBank中小麦(Triticum aestivum L.)DREB基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从小麦中克隆了DREB基因837 bp的编码区。为进一步研究小麦DREB基因的功能,以pMD18-T-DREB质粒为模板,PCR扩增DREB基因片段,构建了该基因的植物表达载体。经菌液PCR和测序鉴定后,转化到农杆菌LBA4404中,为通过转基因技术深入研究小麦DREB基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 植物表达载体 小麦(Triticum AESTIVUM L ) DREB基因

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小麦TaMSR基因的克隆与表达分析 被引量：1

17

作者 于月华 张跃强 +2 位作者 海热古力.阿不力孜 刘真芳 梁小莉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期32-36,共5页

为了发掘小麦育性基因,采用同源克隆的方法,从小麦花药中克隆了3个与拟南芥AtMS2和水稻OsMS2基因同源的cDNA序列。TaMSR-1、TaMSR-2和TaMSR-3分别具有1 842,1 824,1 830 bp的开放阅读框,各自编码613,607,609个氨基酸。推导的蛋白质序列... 为了发掘小麦育性基因,采用同源克隆的方法,从小麦花药中克隆了3个与拟南芥AtMS2和水稻OsMS2基因同源的cDNA序列。TaMSR-1、TaMSR-2和TaMSR-3分别具有1 842,1 824,1 830 bp的开放阅读框,各自编码613,607,609个氨基酸。推导的蛋白质序列中包含2个保守区:NAD_binding和Sterile保守功能域。氨基酸序列分析发现,TaMSR与水稻OsMSR2和拟南芥AtMSR2具有较高的相似性。采用基因特异定位引物PCR技术对中国春缺失系材料进行扩增,将TaMSR-1、TaMSR-2和TaMSR-3基因分别定位于4AS、4DL和4BL染色体上。半定量RT-PCR分析表明,TaMSR基因是花药组织特异表达的基因。这些结果说明,TaMSR基因可能在小麦花药发育过程中起重要作用。 展开更多

关键词 小麦 TaMSR基因 表达分析 染色体定位

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大豆GmF-box基因植物表达载体的构建及转化拟南芥 被引量：1

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作者 郭坤鹏 于月华 +4 位作者 刘娜 康嘉楠 崔雪 王丽芳 倪志勇 《湖北农业科学》 2015年第8期2006-2008,共3页

为了研究大豆(Glycine max)Gm F-box基因的功能,以含有Gm F-box基因全长c DNA序列的p JET1.2-Gm F-box质粒为模板,通过PCR扩增获得Gm F-box基因的c DNA序列,并将该基因构建到植物表达载体p EGAD中,构建了由Ca MV35S启动子驱动Gm F-box... 为了研究大豆(Glycine max)Gm F-box基因的功能,以含有Gm F-box基因全长c DNA序列的p JET1.2-Gm F-box质粒为模板,通过PCR扩增获得Gm F-box基因的c DNA序列,并将该基因构建到植物表达载体p EGAD中,构建了由Ca MV35S启动子驱动Gm F-box基因的植物表达载体p EGAD-Gm Fbox,利用冻融法转入农杆菌GV3101菌株,通过农杆菌浸染方法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)。通过除草剂筛选和PCR检测转基因拟南芥,初步证明已获得转大豆Gm F-box基因的拟南芥。 展开更多

关键词 大豆(Glycine max) GmF-box 植物表达载体 拟南芥(Arabidopsis thaliana)

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海岛棉抗枯萎病相关基因实时荧光定量PCR分析

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作者 杜荣光 姚正培 +4 位作者 陈全家 张杰 杜丽丽 苏秀娟 曲延英 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1980-1987,共8页

【目的】以不同抗性海岛棉为材料,利用实时荧光定量PCR技术对11个棉花抗枯萎病相关基因进行表达量分析,为海岛棉抗枯萎病育种及抗病机理提供候选基因资源。【方法】选择海岛棉抗枯萎病材料06-146、易感材料新海14号,及以其为父母本杂交... 【目的】以不同抗性海岛棉为材料,利用实时荧光定量PCR技术对11个棉花抗枯萎病相关基因进行表达量分析,为海岛棉抗枯萎病育种及抗病机理提供候选基因资源。【方法】选择海岛棉抗枯萎病材料06-146、易感材料新海14号,及以其为父母本杂交的RIL系高代材料10893(超抗)、10895(高抗)、10897(感病)、10796(易感)为实验材料,进行接菌处理。分别取接菌0、4、10、18、28和40 h后的幼苗下胚轴,提取mRNA并反转录。根据已知陆地棉抗枯萎病相关的EST序列和海岛棉抗病转录组测序筛选到的抗病相关基因序列设计引物,进行实时荧光定量PCR反应。根据各基因在不同材料中的表达值,分析各基因与海岛棉抗枯萎病间的关系。【结果】CFW3、CFW10、comp62810、comp71372四个基因在海岛棉抗枯萎病过程中可能起着比较重要的作用,尤其是利用抗病材料和感病材料转录组测序后得到的与抗病性有关的comp62810、comp71372基因。【结论】不同棉花品种对病菌侵染的灵敏程度,不同的品种的灵敏度不同,用以判断基因的作用。 展开更多

关键词 海岛棉 枯萎病 抗性基因 实时荧光定量PCR

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半定量RT-PCR方法检测NaCl胁迫下杂花苜蓿mvNHX基因表达及体系优化

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作者 许磊 石庆华 +3 位作者 代培红 杨云尧 王永超 张桦 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2484-2488,共5页

【目的】优化半定量RT-PCR反应体系,并用优化体系检测杂花苜蓿mvNHX基因的表达情况。【方法】提取用150 mmol/L盐浓度、处理不同时间的苜蓿叶片组织总RNA;反转录得到cDNA;利用优化半定量RT-PCR法检测。【结果】检测到mvNHX基因随胁迫时... 【目的】优化半定量RT-PCR反应体系,并用优化体系检测杂花苜蓿mvNHX基因的表达情况。【方法】提取用150 mmol/L盐浓度、处理不同时间的苜蓿叶片组织总RNA;反转录得到cDNA;利用优化半定量RT-PCR法检测。【结果】检测到mvNHX基因随胁迫时间基因表达量总体上逐渐升高。【结论】通过半定量RT-PCR法检测基因在胁迫条件的表达量的变化。同时对该方法进行优化,为进一步研究该基因克隆及其功能验证奠定了一定的实验基础。 展开更多

关键词 半定量RT-PCR 盐胁迫 mvNHX基因

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