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棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定
被引量：
13
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作者
雷建峰
李月
+4 位作者
徐新霞
阿尔祖古丽.塔什
蒲艳
张巨松
刘晓东
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期675-683,共9页
U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个...
U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个长度不同的U6启动子,其长度分别为672、468、358、280、202和105 bp,并分别构建了6个启动子驱动的GUS融合植物表达载体。将构建好的6个GbU6-5Ps::GUS-pCAMBIA1300与初始克隆的GbU6-5P::GUS-pCAMBIA1300植物表达载体一起利用农杆菌真空渗透转化法分别转染棉花花粉。GUS组织化学染色显示,克隆到的7个不同截短大小的GbU6-5P启动子均能驱动GUS基因在棉花花粉中转录,棉花花粉被染成蓝色但颜色深浅存在显著差异。结果显示启动子长度越短,其转录活性越高。而且另外两种棉花U6启动子GbU6-1P和GbU6-7P也表现出类似的结果。本研究克隆了3个短小的、在棉花花粉细胞中具有转录功能的GbU6启动子。结果显示更短的U6启动子具有更高的转录活性,而且这一特点在不同U6启动子上具有共性。这预示着使用更短U6启动子不仅符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,而且会提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。
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关键词
棉花
GbU6启动子
截短克隆
真空渗透
棉花花粉
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职称材料
题名
棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定
被引量：
13
1
作者
雷建峰
李月
徐新霞
阿尔祖古丽.塔什
蒲艳
张巨松
刘晓东
机构
新疆农业大学
农学院
/
新疆农业大学
农业
生物技术
重点
实验室
新疆农业大学农学院/大学农业生物技术重点实验室
新疆
巴州
农业
技术
推广中心
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期675-683,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31560534)
新疆维吾尔自治区研究生科研创新项目(XJGRI2015084)资助~~
文摘
U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个长度不同的U6启动子,其长度分别为672、468、358、280、202和105 bp,并分别构建了6个启动子驱动的GUS融合植物表达载体。将构建好的6个GbU6-5Ps::GUS-pCAMBIA1300与初始克隆的GbU6-5P::GUS-pCAMBIA1300植物表达载体一起利用农杆菌真空渗透转化法分别转染棉花花粉。GUS组织化学染色显示,克隆到的7个不同截短大小的GbU6-5P启动子均能驱动GUS基因在棉花花粉中转录,棉花花粉被染成蓝色但颜色深浅存在显著差异。结果显示启动子长度越短,其转录活性越高。而且另外两种棉花U6启动子GbU6-1P和GbU6-7P也表现出类似的结果。本研究克隆了3个短小的、在棉花花粉细胞中具有转录功能的GbU6启动子。结果显示更短的U6启动子具有更高的转录活性,而且这一特点在不同U6启动子上具有共性。这预示着使用更短U6启动子不仅符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,而且会提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。
关键词
棉花
GbU6启动子
截短克隆
真空渗透
棉花花粉
Keywords
Cotton
GbU6 promoter
Truncated cloning
Vacuum infiltration
Cotton pollen
分类号
S562 [农业科学—作物学]
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题名
作者
出处
发文年
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1
棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定
雷建峰
李月
徐新霞
阿尔祖古丽.塔什
蒲艳
张巨松
刘晓东
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
13
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