玉米螟P450基因cDNA的克隆及植物次生物质对其诱导表达 被引量：6

1

作者 张雨良 曾洪梅 +5 位作者 杨秀芬 杨峰山 刘华 尹富仕 毛建军 邱德文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期126-131,共6页

昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利... 昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利用RT-PCR扩增出了玉米螟细胞色素P450基因cDNA片段,将其克隆到pMD19-T载体进行序列测定.测序获得了编码213个氨基酸残基的641 bp的DNA片段,命名为OfP450(GenBank登录号:EU807990);与已公布的棉铃虫、家蚕、欧洲防风草结网毛虫、小菜蛾和黑腹果蝇等的细胞色素P450氨基酸序列进行比较,其一致性分别为55%、50%、49%、44%和31%.将植物次生物质棉酚、丁布添加入人工饲料中,对玉米螟进行了饲喂实验,采用优化半定量RT-PCR,以18SrRNA为内标,RT-PCR检测进食棉酚、丁布植物化合物的玉米螟中肠P450基因的转录.结果表明,其转录水平能被棉酚、丁布显著诱导.提示本实验克隆的玉米螟细胞色素P450对植物次生物质的代谢作用与P450表达量呈正相关.该研究为下一步将植物介导的RNA干扰技术应用于害虫生物防治提供坚实的基础. 展开更多

关键词 玉米螟 P450基因 克隆 植物次生物质 诱导表达

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大豆gma-miR1514b生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量：3

2

作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期46-51,共6页

MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-... MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与光、逆境和植物激素应答相关的顺式作用元件。PMRD软件预测获得5个gma-miR1514b靶基因,分别与拟南芥CA2、NTL9和ANAC014基因同源。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiR1514b前体的植物表达载体amiR1514b-p CAMBIA3301。 展开更多

关键词 大豆 gma-miR1514b amiRNA 启动子

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利用mRNA差异显示技术筛选线果芥抗旱相关基因 被引量：1

3

作者 朱燕飞 陈全家 曲延英 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1775-1784,共10页

【目的】十字花科短命植物线果芥在新疆干旱环境下生长,具有较强的抗旱性,研究十字花科短命植物线果芥的抗旱机制。为进一步了解线果芥的抗旱机理和从野生植物资源中发掘一些优异的抗逆基因奠定基础。【方法】用20%PEG6000处理3~4周的... 【目的】十字花科短命植物线果芥在新疆干旱环境下生长,具有较强的抗旱性,研究十字花科短命植物线果芥的抗旱机制。为进一步了解线果芥的抗旱机理和从野生植物资源中发掘一些优异的抗逆基因奠定基础。【方法】用20%PEG6000处理3~4周的线果芥幼苗,分别提取0、3、6、9、12、24及48 h的线果芥叶片总RNA。用mRNA差异显示技术筛选差异表达的基因。【结果】使用80对引物组合共筛选获得差异片段18个,分别命名为DF1-DF18,其中表达上调的有12个,下调的有6个。按照基因的功能可以划分为6大类:基础代谢、转录因子、抗病相关、假想蛋白、未知蛋白和光周期蛋白。其中以基础代谢相关基因最多。对其中的DF-2、DF-6及DF-14进行高盐和干旱胁迫下的表达模式分析,这三个基因均受干旱和盐调控表达。【结论】从短命植物线果芥中筛选了18个抗旱相关的基因,并对其中的3个基因进行表达模式分析,的确受干旱和盐胁迫的诱导表达。 展开更多

关键词 线果芥 抗旱 MRNA差异显示

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棉花杂交种SSR标记检测技术的研究 被引量：5

4

作者 艾买提.图如普 申怀伟 +3 位作者 梁亚军 冯方剑 郑炜佳 陈全家 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1733-1736,共4页

【目的】研究棉花杂交种SSR分子标记检测技术。【方法】以天云1号、天云3号及各自亲本为材料,用SDS-CTAB法提取组织DNA,通过SSR-PCR技术,进行SSR标记引物的筛选。【结果】从107对引物中共筛选出8对多态性效果较好的引物,平均每对引物产... 【目的】研究棉花杂交种SSR分子标记检测技术。【方法】以天云1号、天云3号及各自亲本为材料,用SDS-CTAB法提取组织DNA,通过SSR-PCR技术,进行SSR标记引物的筛选。【结果】从107对引物中共筛选出8对多态性效果较好的引物,平均每对引物产生3.2个多态性位点。【结论】该方法可以准确地鉴别出材料间的差异,为棉花杂交种分子检测提供了一个准确、稳定、快捷、实用的检测方法。 展开更多

关键词 棉花 杂交种 分子标记

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海岛棉GbHCT基因克隆及生物信息学分析 被引量：4

5

作者 崔雪 加得拉.吐留汗 +6 位作者 于月华 陈全家 申丽婕 叶佳丽 杨飓立 陶顺 倪志勇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期80-86,共7页

克隆海岛棉木质素合成关键酶基因GbHCT全长cDNA序列,分析其在纤维不同发育时期的表达情况。根据海岛棉转录组数据中的HCT序列设计引物,采用RT-PCR技术克隆基因,通过生物信息学方法分析GbHCT的cDNA序列和氨基酸序列。通过分析转录组数据... 克隆海岛棉木质素合成关键酶基因GbHCT全长cDNA序列,分析其在纤维不同发育时期的表达情况。根据海岛棉转录组数据中的HCT序列设计引物,采用RT-PCR技术克隆基因,通过生物信息学方法分析GbHCT的cDNA序列和氨基酸序列。通过分析转录组数据研究GbHCT在纤维不同发育时期的表达。从海岛棉中克隆了1个编码HCT的基因GbHCT,开放阅读框长度为1311bp,编码436个氨基酸,蛋白质分子量为48.58kD,等电点为6.03。GbHCT氨基酸序列中含有HTLGD和DFGWG2个保守基序。GbHCT氨基酸与陆地棉、亚洲棉和雷蒙德氏棉HCT一致性较高,与其他植物中的HCT氨基酸的一致性为55.7%-60.7%。转录组数据分析发现GbHCT在纤维不同发育阶段都有表达,在5DPA的纤维中表达量最高,表明该基因可能参与棉花纤维的发育。 展开更多

关键词 海岛棉 HCT 基因克隆 生物信息学

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不同棉花品种对盐、旱胁迫的光合响应及抗逆性评价 被引量：11

6

作者 吴文超 曲延英 +2 位作者 高文伟 吴鹏昊 陈全家 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1569-1579,共11页

【目的】研究干旱胁迫、盐胁迫以及盐旱复合胁迫下的棉花多项生理指标,鉴定棉花品种（系）的抗旱及耐盐水平。【方法】以8份陆地棉品种为材料,室内利用1/2Hogland营养液水培幼苗至4~5片真叶时设置对照、11%PEG-6000、12%NaCl及11%PEG-... 【目的】研究干旱胁迫、盐胁迫以及盐旱复合胁迫下的棉花多项生理指标,鉴定棉花品种（系）的抗旱及耐盐水平。【方法】以8份陆地棉品种为材料,室内利用1/2Hogland营养液水培幼苗至4~5片真叶时设置对照、11%PEG-6000、12%NaCl及11%PEG-6000和12%NaCl复合胁迫4种处理48h后,研究不同处理下棉花净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、蒸腾速率（Tr）、细胞间隙CO2浓度（Ci）、水分利用效率（WUE）、相对含水量（RWC）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、叶绿素a（CHla）、叶绿素b（CHlb）、总叶绿素CHl（a＋b）等10项生理指标,采用抗旱（耐盐）指数PI、综合抗旱（耐盐）指数RI、主成分分析（PCA）、聚类分析及植物形态评价法相结合对其抗旱性、耐盐性及综合抗逆性进行评价。【结果】8份材料的光合特性及生理指标存在一定差异。基于旱胁迫、盐胁迫及复合胁迫下的10项指标,主成分分析、综合抗旱（耐盐）指数RI值、植物形态评价分析显示,各胁迫下几种方法评价结果基本一致。复合胁迫下的主成分分析分析结果表明,8份材料综合抗逆水平排序如下：新陆中36号〉Y1169〉10615-3〉ND359-5〉CQJ-5〉KK1543〉新炮1号〉新陆早26号。【结论】通过主成分分析和植物形态评价分析,对8份棉花材料抗旱、耐盐水平进行了分类与评价,为干旱盐碱化地区的品种选育提供了途径。 展开更多

关键词 棉花 干旱 耐盐 主成分分析 综合评价

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基于棉花U6启动子的海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑体系的建立 被引量：12

7

作者 李继洋 雷建峰 +5 位作者 代培红 姚瑞 曲延英 陈全家 李月 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期227-235,共9页

CRISPR/Cas9基因组编辑技术是基因功能研究的一种强有力的工具,目前已在许多生物体中成功实现内源靶向基因的突变。利用已克隆的海岛棉新海16的2个U6启动子,分别构建带有新海16内源基因(GbGGB和GbERA1)靶位点DNA片段的CRISPR/Cas9基因... CRISPR/Cas9基因组编辑技术是基因功能研究的一种强有力的工具,目前已在许多生物体中成功实现内源靶向基因的突变。利用已克隆的海岛棉新海16的2个U6启动子,分别构建带有新海16内源基因(GbGGB和GbERA1)靶位点DNA片段的CRISPR/Cas9基因编辑载体。以新海16的胚性愈伤组织为供试材料,制备海岛棉的原生质体。通过PCR方法大量富集构建好的CRISPR/Cas9基因编辑载体的核心片段(包括GbU6::sg RNA和CAMV35S::Cas9两部分),并利用PEG法转化海岛棉的原生质体。对原生质体基因组DNA进行酶切后PCR,成功检测到内源靶基因的突变现象。对PCR产物进行克隆测序,结果显示序列突变的类型主要以碱基替换为主,少数为碱基缺失。结果表明基于海岛棉U6启动子的CRISPR/Cas9基因编辑系统能在海岛棉中实现靶向基因编辑的功能,为棉花功能基因组学研究提供了重要的技术基础。 展开更多

关键词 棉花 原生质体 CRISPR/Cas9 基因组编辑

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CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥GGB基因突变体的鉴定 被引量：15

8

作者 雷建峰 徐新霞 +3 位作者 李月 代培红 刘超 刘晓东 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期857-864,共8页

GGB是抗旱负调控基因。为了获得拟南芥ggb突变体材料,构建了以拟南芥U6启动子驱动GGBsgRNA的CRISPR/Cas9基因组编辑载体。将构建好的编辑载体利用农杆菌介导的浸花法转化野生型拟南芥。对转基因后代GGB基因的测序结果分析发现,在靶位点... GGB是抗旱负调控基因。为了获得拟南芥ggb突变体材料,构建了以拟南芥U6启动子驱动GGBsgRNA的CRISPR/Cas9基因组编辑载体。将构建好的编辑载体利用农杆菌介导的浸花法转化野生型拟南芥。对转基因后代GGB基因的测序结果分析发现,在靶位点处有缺失4个碱基和增加1个T碱基的2种突变体产生。分别对野生型拟南芥和上述2种ggb突变体进行半定量RT-PCR分析结果显示,突变体材料中几乎检测不到GGB基因表达,说明获得了GGB基因敲除突变体。对野生型和ggb突变体叶片失水率、耐旱表型及单株种子量的测定结果表明,与野生型相比,拟南芥GGB基因突变后,叶片失水率显著减少,抗旱性明显增强,而单株种子量却并没有改变。研究表明,GGB是一种理想的作物分子育种的候选靶基因,获得的突变体为今后从农作物中克隆的GGB同源基因进行功能互补验证提供了有用的遗传材料。 展开更多

关键词 拟南芥 CRISPR/Cas9 GGB 基因敲除 失水率

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棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定 被引量：14

9

作者 雷建峰 李月 +4 位作者 徐新霞 阿尔祖古丽.塔什 蒲艳 张巨松 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期675-683,共9页

U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个... U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个长度不同的U6启动子,其长度分别为672、468、358、280、202和105 bp,并分别构建了6个启动子驱动的GUS融合植物表达载体。将构建好的6个GbU6-5Ps::GUS-pCAMBIA1300与初始克隆的GbU6-5P::GUS-pCAMBIA1300植物表达载体一起利用农杆菌真空渗透转化法分别转染棉花花粉。GUS组织化学染色显示,克隆到的7个不同截短大小的GbU6-5P启动子均能驱动GUS基因在棉花花粉中转录,棉花花粉被染成蓝色但颜色深浅存在显著差异。结果显示启动子长度越短,其转录活性越高。而且另外两种棉花U6启动子GbU6-1P和GbU6-7P也表现出类似的结果。本研究克隆了3个短小的、在棉花花粉细胞中具有转录功能的GbU6启动子。结果显示更短的U6启动子具有更高的转录活性,而且这一特点在不同U6启动子上具有共性。这预示着使用更短U6启动子不仅符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,而且会提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。 展开更多

关键词 棉花 GbU6启动子 截短克隆 真空渗透 棉花花粉

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鹰嘴豆种子蛋白分析 被引量：4

10

作者 石庆华 王希东 +2 位作者 张桦 林嘉鹏 陈芯 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期516-520,共5页

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对不同品种的鹰嘴豆的种子蛋白进行分析,结果显示:6种鹰嘴豆种子的蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、盐溶和醇溶蛋白质组成,其中清蛋白和球蛋白种类较多,盐溶蛋白和醇溶蛋白种类较少。在清蛋白和球蛋... 利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对不同品种的鹰嘴豆的种子蛋白进行分析,结果显示:6种鹰嘴豆种子的蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、盐溶和醇溶蛋白质组成,其中清蛋白和球蛋白种类较多,盐溶蛋白和醇溶蛋白种类较少。在清蛋白和球蛋白的种类方面,165号(卡布里型),阿克苏鹰嘴豆(卡布里型),88-1(迪西型)和阿瓦提2号鹰嘴豆(卡布里型)较185号(迪西型)和176号(迪西型)多;在盐溶蛋白和醇溶蛋白种类方面,6个品种的蛋白种类均较少。 展开更多

关键词 鹰嘴豆 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 种子蛋白

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转MvNHX1和MvP5CS基因棉花耐盐抗旱性比较与育种价值分析 被引量：5

11

作者 游朝 晁朝霞 +4 位作者 姚正培 任燕萍 陈全家 曲延英 张桦 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期198-207,共10页

通过对花粉管通道法获得的T7转MvNHX1基因的10个棉花株系和转MvP5CS基因的3个棉花株系与对照非转基因棉花D5在温室内盐和干旱胁迫下的发芽率、生理生化指标以及田间花期干旱胁迫下农艺性状和纤维品质进行分析发现:温室内盐和干旱胁迫后... 通过对花粉管通道法获得的T7转MvNHX1基因的10个棉花株系和转MvP5CS基因的3个棉花株系与对照非转基因棉花D5在温室内盐和干旱胁迫下的发芽率、生理生化指标以及田间花期干旱胁迫下农艺性状和纤维品质进行分析发现:温室内盐和干旱胁迫后,转基因棉花叶片叶绿素含量、脯氨酸含量均高于对照,而丙二醛含量低于对照;田间花期干旱胁迫下,2种转基因植株果枝数、有效果枝数、铃数、有效铃数、铃重、子棉、皮棉、衣分、子指和衣指均高于对照,说明转MvNHX1基因和转MvP5CS基因植株在干旱逆境下的产量高于非转基因;经花期干旱胁迫后,2种转基因棉花的纤维断裂伸长率、短纤维率、马克隆值和纺纱一致性指数优于非转基因棉花D5。综合分析表明:2种转基因棉花的耐盐抗旱性均有提高,其中转MvNHX1基因棉花的耐盐性优于转MvP5CS基因棉花植株,而转MvP5CS基因棉花植株的抗旱性优于转MvNHX1基因棉花植株。 展开更多

关键词 MvNHX1 MvP5CS 转基因棉花 耐盐 抗旱 育种价值分析

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低温胁迫对三种早春短命植物生理生化指标的影响 被引量：12

12

作者 李彦奇 姚正培 +1 位作者 张桦 代培红 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1608-1615,共8页

【目的】以三种新疆早春短命植物绵果荠、卷果涩荠和粗果庭荠苗期叶片为试验材料,分别测定4℃低温胁迫处理对各材料抗冷性生理生化指标的影响,鉴定三种植物的抗冷能力。【方法】在苗期对三种植物进行4℃低温胁迫处理,分别测定处理0、3、... 【目的】以三种新疆早春短命植物绵果荠、卷果涩荠和粗果庭荠苗期叶片为试验材料,分别测定4℃低温胁迫处理对各材料抗冷性生理生化指标的影响,鉴定三种植物的抗冷能力。【方法】在苗期对三种植物进行4℃低温胁迫处理,分别测定处理0、3、6、9、12、15、18、21和24 h时各材料叶片内相对电导率、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量和相关酶活性的变化,使用隶属函数法确定各植物的抗冷性大小。【结果】随着胁迫时间的延长,三种植物苗期叶片中相对电导率、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、SOD酶活性及POD酶活性变化趋势相同,均呈逐渐上升的趋势,但变化率存在差异;使用隶属函数值分析,三种植物的抗冷性从大到小依次为:卷果涩荠>绵果荠>粗果庭荠。【结论】单一生理生化指标很难反映植物抗冷能力,试验所选指标中相对电导率、游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、SOD酶活性及POD酶活性能较好反映各材料的抗冷性大小,可作为早春短命植物抗冷性鉴定的参考指标,对抗冷种质资源发掘及抗逆育种有一定指导意义。 展开更多

关键词 早春短命植物 抗冷性 生理生化指标

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棉花转录因子基因GhMYB的克隆及特征分析 被引量：7

13

作者 于月华 倪志勇 +3 位作者 梁小莉 刘真芳 陈全家 高文伟 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期31-38,共8页

从棉花中克隆了1个MYB基因,命名为GhMYB(Gen Bank No.HQ234875)。该基因c DNA全长1264bp,具有1个774 bp的开放阅读框,5'非编码区为250 bp,3'非编码区为240 bp,编码256个氨基酸,预测分子量约为28.867 k Da,等电点为8.56,推测的... 从棉花中克隆了1个MYB基因,命名为GhMYB(Gen Bank No.HQ234875)。该基因c DNA全长1264bp,具有1个774 bp的开放阅读框,5'非编码区为250 bp,3'非编码区为240 bp,编码256个氨基酸,预测分子量约为28.867 k Da,等电点为8.56,推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。GhMYB基因组序列长度为1355 bp,包含2个外显子和1个内含子。氨基酸同源分析发现,GhMYB与来自可可、陆地棉和巴旦木的MYB同源性较高。亚细胞定位结果表明,GhMYB:GFP融合蛋白定位于细胞核中。SDS-PAGE电泳分析表明,p ET-28a-GhMYB最佳诱导表达条件为1.0 mmol·L-1 IPTG在37℃下诱导4 h。电子表达谱分析表明,GhMYB基因在棉铃中特异表达,在根和叶中受水涝胁迫的诱导表达。 展开更多

关键词 棉花 GhMYB 原核表达 基因克隆

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大蒜芥Δ′-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因(P5CS)的克隆及表达分析 被引量：5

14

作者 刘静静 曲延英 +3 位作者 姚正培 朱燕飞 高文伟 陈全家 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期210-216,共7页

Δ′-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)是植物渗透胁迫下脯氨酸合成谷氨酸的关键酶。利用RACE结合RT-PCR技术克隆获得大蒜芥(Sisybrium altissimum)SaP5CS1基因全长cDNA序列,该基因全长1 907bp,其中开放阅读框为1 719bp,编码573个氨基酸,预测... Δ′-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)是植物渗透胁迫下脯氨酸合成谷氨酸的关键酶。利用RACE结合RT-PCR技术克隆获得大蒜芥(Sisybrium altissimum)SaP5CS1基因全长cDNA序列,该基因全长1 907bp,其中开放阅读框为1 719bp,编码573个氨基酸,预测编码蛋白质的等电点为4.95,分子量为156.279kDa。同源分析显示,SaP5CS1与甘蓝型油菜(Brassica napus)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的蛋白序列相似性分别为98%和96%。实时荧光定量PCR分析表明,在干旱逆境胁迫条件下,大蒜芥SaP5CS1基因在根和叶的相对表达量受胁迫的诱导均上调。SaP5CS1基因的克隆及序列分析将为其功能分析和分子育种奠定基础。 展开更多

关键词 大蒜芥 P5CS 相对表达量 序列分析

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棉花HSP70基因的克隆与原核表达 被引量：5

15

作者 刘娜 曲延英 +1 位作者 陈全家 倪志勇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期688-693,共6页

以抗旱性较强的棉花品种‘KK1543’为材料,采用RT-PCR技术克隆了1个棉花HSP70基因,命名为GhHSP70。研究结果表明:GhHSP70基因开放阅读框长1 997bp,编码648个氨基酸,GhHSP70蛋白相对分子量为70.94kD,等电点为4.83。氨基酸序列比对和系统... 以抗旱性较强的棉花品种‘KK1543’为材料,采用RT-PCR技术克隆了1个棉花HSP70基因,命名为GhHSP70。研究结果表明:GhHSP70基因开放阅读框长1 997bp,编码648个氨基酸,GhHSP70蛋白相对分子量为70.94kD,等电点为4.83。氨基酸序列比对和系统进化树分析发现,GhHSP70与欧洲大叶杨HSP70的亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达到96.4%。为进一步分析基因的功能,构建原核表达载体pGEX-4T-1-GhHSP70,并在大肠杆菌中异源表达。SDS-PAGE分析表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致,重组蛋白在37℃,0.2mmol/L IPTG诱导2h时表达量最大。研究为进一步研究棉花HSP70基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 棉花 热激蛋白70 基因克隆 原核表达

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鹰嘴豆锌指蛋白基因ZF1的克隆及表达分析 被引量：4

16

作者 陈晨 彭辉 +5 位作者 高文瑞 石庆华 张桦 张巨松 李建贵 麻浩 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2180-2186,共7页

利用一段从PEG胁迫的鹰嘴豆幼苗叶片所构建的cDNA文库中得到的EST序列,通过3′RACE方法克隆到一个鹰嘴豆C2H2型锌指蛋白基因ZF1,该基因不含内含子,编码一条244个氨基酸残基的多肽,含有两个典型的Cys2/His2锌指结构。其氨基酸序列含有一... 利用一段从PEG胁迫的鹰嘴豆幼苗叶片所构建的cDNA文库中得到的EST序列,通过3′RACE方法克隆到一个鹰嘴豆C2H2型锌指蛋白基因ZF1,该基因不含内含子,编码一条244个氨基酸残基的多肽,含有两个典型的Cys2/His2锌指结构。其氨基酸序列含有一个可能的核定位型号,农杆菌介导的洋葱表皮细胞GFP瞬时表达实验表明,ZF1蛋白位于细胞核内。半定量RT-PCR分析表明,ZF1在鹰嘴豆的根、茎、叶、花、幼荚和幼胚中均有表达,在茎和叶中表达较弱,为组成型转录因子。半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测结果显示,ZF1不但受高温及干旱诱导,而且还受6-苄基腺嘌呤(6-BA)、脱落酸(ABA)、乙烯利(Et)、赤霉素(GA3)、吲哚-3-乙酸(IAA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)和氧胁迫诱导。这些结果表明,ZF1基因可能作为一个核调控因子参与植物的生长代谢以及多种生物与非生物胁迫的应答。 展开更多

关键词 鹰嘴豆 锌指蛋白 基因克隆 胁迫 表达分析

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小麦转录因子TaSIM的原核表达分析 被引量：4

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作者 于月华 耿洪伟 +3 位作者 陈全家 高文伟 王莉萍 曲延英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期60-62,共3页

为了进一步研究TaSIM基因的功能,以pJET1.2-TaSIM质粒为模板,PCR扩增TaSIM基因的cDNA编码区,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-TaSIM,经菌液PCR和测序鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达... 为了进一步研究TaSIM基因的功能,以pJET1.2-TaSIM质粒为模板,PCR扩增TaSIM基因的cDNA编码区,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-TaSIM,经菌液PCR和测序鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的TaSIM蛋白,大小约为33 kDa。SDS-PAGE电泳分析表明,最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG在37℃下诱导2 h。 展开更多

关键词 小麦 TaSIM 原核表达

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白木纳格葡萄败育型胚珠培养研究 被引量：8

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作者 夏培蓓 伍新宇 +4 位作者 吴玉霞 朱瑜 陈新红 阿尔孜古丽.卡斯木 罗淑萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1201-1204,共4页

【目的】研究白木纳格葡萄败育型胚珠离体培养的最优方案,为木纳格葡萄胚挽救育种技术的研究奠定基础。【方法】以花后不同天数的白木纳格葡萄败育型胚珠为试材,进行离体培养,研究接种时间、基本培养基种类I、BA浓度以及活性炭对胚珠发... 【目的】研究白木纳格葡萄败育型胚珠离体培养的最优方案,为木纳格葡萄胚挽救育种技术的研究奠定基础。【方法】以花后不同天数的白木纳格葡萄败育型胚珠为试材,进行离体培养,研究接种时间、基本培养基种类I、BA浓度以及活性炭对胚珠发育率的影响。【结果】白木纳格葡萄败育型胚珠取样适宜期为DAF35至DAF40,离体培养后,胚珠发育率均可达到50%以上,其中DAF 40 d为最佳取样时间,胚珠发育率可达到61.07%。在IBA 1.5 mg/L,GA30.5 mg/L,蔗糖60 g/L,琼脂5 g/L,活性炭1 g/L的Nitsch培养基中,白木纳格葡萄败育型胚珠发育率最高。【结论】建立了适合白木纳格葡萄败育型胚珠培养体系。 展开更多

关键词 白木纳格葡萄 败育型胚珠 胚珠培养

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大豆gma-miR160o启动子的克隆及植物表达载体构建 被引量：3

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作者 倪志勇 于月华 +3 位作者 刘超 任燕萍 陈全家 曲延英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期19-23,共5页

为了研究miRNA表达的调控机制,以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-miR160o启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆gma-miR160o上游一段长度为1 910 bp的启动子序列。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi... 为了研究miRNA表达的调控机制,以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-miR160o启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆gma-miR160o上游一段长度为1 910 bp的启动子序列。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,gma-miR160o启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。将gma-miR160o启动子替代p BI121载体中的Ca MV35S启动子,构建了与GUS融合的启动子表达载体。 展开更多

关键词 大豆 gma-miR160o 启动子 植物表达载体

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棉花GhMYB146基因克隆及亚细胞定位分析 被引量：6

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作者 倪志勇 邱迎风 +3 位作者 加得拉.吐留汗 于月华 陈全家 曲延英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2119-2126,共8页

MYB转录因子是发育、代谢、生物和非生物胁迫应答调控网络中的关键因子。为了分析棉花Gh MYB146转录因子的亚细胞定位,通过RT-PCR和RACE方法从棉花纤维中克隆了1个棉花MYB转录因子Gh MYB146的c DNA序列,采用生物信息学方法分析了Gh MYB... MYB转录因子是发育、代谢、生物和非生物胁迫应答调控网络中的关键因子。为了分析棉花Gh MYB146转录因子的亚细胞定位,通过RT-PCR和RACE方法从棉花纤维中克隆了1个棉花MYB转录因子Gh MYB146的c DNA序列,采用生物信息学方法分析了Gh MYB146的氨基酸序列,构建了Gh MYB146基因的亚细胞定位载体并进行了亚细胞定位分析。结果表明,克隆的R2R3-MYB基因Gh MYB146的c DNA全长1 027 bp,开放阅读框长879 bp,编码292个氨基酸,蛋白质预测分子量约为33.151 k D,等电点为7.9;推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域;Gh MYB146基因组包含3个外显子和2个内含子。进化树分析表明,Gh MYB146和Gh MYB5分为一个分支;亚细胞定位结果表明,Gh MYB146:GFP融合蛋白定位于细胞核中。本试验结果为进一步研究Gh MYB146基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 棉花 GhMYB146 克隆 亚细胞定位

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