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疏绵状嗜热丝孢菌β-葡萄糖苷酶的基因组挖掘与表达
1
作者
黎小军
杨丽英
+1 位作者
彭琛琛
郑建永
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第3期247-252,共6页
基因组挖掘是发现生物催化剂的高效工具,开发热稳定性β-葡萄糖苷酶具有重要的应用价值.该文采用基因组挖掘策略,从嗜热真菌疏绵状嗜热丝孢菌的基因组中挖掘出7个注释为β-葡萄糖苷酶基因或β-葡萄糖苷酶预测蛋白基因,其中TLG-1、TLG-2...
基因组挖掘是发现生物催化剂的高效工具,开发热稳定性β-葡萄糖苷酶具有重要的应用价值.该文采用基因组挖掘策略,从嗜热真菌疏绵状嗜热丝孢菌的基因组中挖掘出7个注释为β-葡萄糖苷酶基因或β-葡萄糖苷酶预测蛋白基因,其中TLG-1、TLG-2、TLG-4、TLG-5、TLG-6属于GH3家族,TLG-3和TLG-7分别属于GH1家族和GH17家族,且TLG-7与GenBank数据库已有序列的同源性很低,只有48.43%.选择同源性低的、同源序列被研究少的TLG-2、TLG-5、TLG-6和TLG-7进行基因克隆和毕赤酵母异源表达,重组毕赤酵母经甲醇诱导表达后,用发酵液上清进行SDS-PAGE分析,结果表明TLG-2、TLG-5、TLG-6和TLG-7均成功分泌表达.对发酵液进行β-葡萄糖苷酶活力测定结果表明:TLG-2的活力最高,达到166.6 U·mL^(-1);其次是TLG-5的活力,其值为79.8 U·mL^(-1),TLG-6和TLG-7的活力较低,分别为9.9 U·mL^(-1)和9.5 U·mL^(-1).研究结果为疏绵状嗜热丝孢菌β-葡萄糖苷酶的应用奠定了基础.
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关键词
基因组挖掘
Β-葡萄糖苷酶
疏绵状嗜热丝孢菌
异源表达
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职称材料
杜邦嗜热菌脂肪酶在黑曲霉中的异源表达
被引量：
2
2
作者
黎小军
蔡礼年
郑建永
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第5期503-507,共5页
该文将杜邦嗜热菌脂肪酶TDL2在黑曲霉系统中异源表达,并考察TDL2自带信号肽和pCAMBIA质粒信号肽对脂肪酶TDL2表达的影响.利用PCR和无缝克隆技术,将脂肪酶TDL2的编码序列与质粒pCAMBIA0380线性片段拼接,分别构建利用β-葡萄糖苷酶bgl2的...
该文将杜邦嗜热菌脂肪酶TDL2在黑曲霉系统中异源表达,并考察TDL2自带信号肽和pCAMBIA质粒信号肽对脂肪酶TDL2表达的影响.利用PCR和无缝克隆技术,将脂肪酶TDL2的编码序列与质粒pCAMBIA0380线性片段拼接,分别构建利用β-葡萄糖苷酶bgl2的信号肽的重组质粒pCAMBIA-TDL2-1和利用TDL2信号肽序列的重组质粒pCAMBIA-TDL2-2.用根瘤农杆菌介导转化宿主细胞A.niger CICC 2213构建组成型黑曲霉工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1和A.niger/pCAMBIA-TDL2-2,在发酵120 h后其发酵单位分别达到18.5 U·mL^(-1)和38.3 U·mL^(-1),实现了脂肪酶TDL2在黑曲霉中的异源表达.SDS-PAGE分析和活力测定结果表明:利用脂肪酶TDL2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-2比利用bgl2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1的表达量更大、发酵单位更高.
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关键词
黑曲霉
脂肪酶TDL2
杜邦嗜热菌
信号肽
异源表达
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职称材料
新型还原酶的挖掘与设计及手性醇的制备
3
作者
王能强
吴思琪
+3 位作者
王新凤
黎小军
徐樱翠
高健
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期715-723,共9页
为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SD...
为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SDR05的重组菌不对称还原[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙酮(BTAP)制备相应手性醇的反应体系。结果表明,重组菌在以体积分数为69%异丙醇、3.9 mmol·L^(-1)氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))、1 mmol·L^(-1)MgCl_(2)、300 g·L^(-1)重组菌、3000 mmol·L^(-1) BTAP和pH为7.4磷酸缓冲液组成的反应体系和32℃、150 r·min^(-1)条件下催化反应18 h,产物产率和对映体过量值分别为98.3%和99.9%。研究结果丰富了还原酶库,实现BTAP底物在高质量浓度下的转化,为工业化制备(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇等手性化合物奠定基础。
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关键词
不对称生物催化
还原酶
基因挖掘与设计
优化
(R)-1-[3
5-二(三氟甲基)苯基]乙醇
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职称材料
题名
疏绵状嗜热丝孢菌β-葡萄糖苷酶的基因组挖掘与表达
1
作者
黎小军
杨丽英
彭琛琛
郑建永
机构
新余学院基础医学教研室
浙江工业大学生物工程
学院
出处
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第3期247-252,共6页
基金
国家自然科学基金(31660247)
江西省教育厅科学技术研究课题(GJJ202305)资助项目。
文摘
基因组挖掘是发现生物催化剂的高效工具,开发热稳定性β-葡萄糖苷酶具有重要的应用价值.该文采用基因组挖掘策略,从嗜热真菌疏绵状嗜热丝孢菌的基因组中挖掘出7个注释为β-葡萄糖苷酶基因或β-葡萄糖苷酶预测蛋白基因,其中TLG-1、TLG-2、TLG-4、TLG-5、TLG-6属于GH3家族,TLG-3和TLG-7分别属于GH1家族和GH17家族,且TLG-7与GenBank数据库已有序列的同源性很低,只有48.43%.选择同源性低的、同源序列被研究少的TLG-2、TLG-5、TLG-6和TLG-7进行基因克隆和毕赤酵母异源表达,重组毕赤酵母经甲醇诱导表达后,用发酵液上清进行SDS-PAGE分析,结果表明TLG-2、TLG-5、TLG-6和TLG-7均成功分泌表达.对发酵液进行β-葡萄糖苷酶活力测定结果表明:TLG-2的活力最高,达到166.6 U·mL^(-1);其次是TLG-5的活力,其值为79.8 U·mL^(-1),TLG-6和TLG-7的活力较低,分别为9.9 U·mL^(-1)和9.5 U·mL^(-1).研究结果为疏绵状嗜热丝孢菌β-葡萄糖苷酶的应用奠定了基础.
关键词
基因组挖掘
Β-葡萄糖苷酶
疏绵状嗜热丝孢菌
异源表达
Keywords
genome mining
β-glucosidase
T.lanuginosus
heterologous expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
杜邦嗜热菌脂肪酶在黑曲霉中的异源表达
被引量：
2
2
作者
黎小军
蔡礼年
郑建永
机构
新余学院基础医学教研室
浙江大学化学工程与生物工程
学院
浙江工业大学生物工程
学院
出处
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第5期503-507,共5页
基金
国家自然科学基金(31660247,31600639)资助项目.
文摘
该文将杜邦嗜热菌脂肪酶TDL2在黑曲霉系统中异源表达,并考察TDL2自带信号肽和pCAMBIA质粒信号肽对脂肪酶TDL2表达的影响.利用PCR和无缝克隆技术,将脂肪酶TDL2的编码序列与质粒pCAMBIA0380线性片段拼接,分别构建利用β-葡萄糖苷酶bgl2的信号肽的重组质粒pCAMBIA-TDL2-1和利用TDL2信号肽序列的重组质粒pCAMBIA-TDL2-2.用根瘤农杆菌介导转化宿主细胞A.niger CICC 2213构建组成型黑曲霉工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1和A.niger/pCAMBIA-TDL2-2,在发酵120 h后其发酵单位分别达到18.5 U·mL^(-1)和38.3 U·mL^(-1),实现了脂肪酶TDL2在黑曲霉中的异源表达.SDS-PAGE分析和活力测定结果表明:利用脂肪酶TDL2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-2比利用bgl2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1的表达量更大、发酵单位更高.
关键词
黑曲霉
脂肪酶TDL2
杜邦嗜热菌
信号肽
异源表达
Keywords
Aspergillus niger
lipase TDL2
Thermomyces dupontii
signal peptide
heterologous expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
新型还原酶的挖掘与设计及手性醇的制备
3
作者
王能强
吴思琪
王新凤
黎小军
徐樱翠
高健
机构
湖南科技大学生命科学与健康
学院
经济作物遗传改良与综合利用湖南省重点实验室
新余学院基础医学教研室
出处
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期715-723,共9页
基金
湖南省自然科学基金(2020JJ4291)
湖南科技大学大学生创新实验项目(S143598)。
文摘
为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SDR05的重组菌不对称还原[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙酮(BTAP)制备相应手性醇的反应体系。结果表明,重组菌在以体积分数为69%异丙醇、3.9 mmol·L^(-1)氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))、1 mmol·L^(-1)MgCl_(2)、300 g·L^(-1)重组菌、3000 mmol·L^(-1) BTAP和pH为7.4磷酸缓冲液组成的反应体系和32℃、150 r·min^(-1)条件下催化反应18 h,产物产率和对映体过量值分别为98.3%和99.9%。研究结果丰富了还原酶库,实现BTAP底物在高质量浓度下的转化,为工业化制备(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇等手性化合物奠定基础。
关键词
不对称生物催化
还原酶
基因挖掘与设计
优化
(R)-1-[3
5-二(三氟甲基)苯基]乙醇
Keywords
asymmetric biocatalysis
reductase
gene mining and design
optimization
(R)-1-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]ethanol
分类号
TQ92 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
疏绵状嗜热丝孢菌β-葡萄糖苷酶的基因组挖掘与表达
黎小军
杨丽英
彭琛琛
郑建永
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
杜邦嗜热菌脂肪酶在黑曲霉中的异源表达
黎小军
蔡礼年
郑建永
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
新型还原酶的挖掘与设计及手性醇的制备
王能强
吴思琪
王新凤
黎小军
徐樱翠
高健
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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