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苹果根皮苷-2-O-糖基转移酶基因克隆与表达模式分析
被引量：
1
1
作者
冉军舰
梁新红
+3 位作者
陈晓静
李向阳
焦凌霞
赵瑞香
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期202-207,共6页
目的:根皮苷-2-O-糖基转移酶(phloridzin 2’-O-glycosyltransferase,P2’-GT)是根皮苷合成最后一步关键酶,可以把根皮素转化成根皮苷,本研究在富士苹果中克隆出P2’-GT基因,对基因编码产物进行生物信息学分析和基因的表达模式分析。方...
目的:根皮苷-2-O-糖基转移酶(phloridzin 2’-O-glycosyltransferase,P2’-GT)是根皮苷合成最后一步关键酶,可以把根皮素转化成根皮苷,本研究在富士苹果中克隆出P2’-GT基因,对基因编码产物进行生物信息学分析和基因的表达模式分析。方法:以苹果皮为材料,提取RNA反转录合成cDNA为模板,设计特异性引物进行扩增和测序,利用Pro Param tool、TMHMM等在线软件对编码蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime?uorescence quatitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分析P2’-GT在苹果不同部位、不同苹果品种和不同生长时期的表达差异。结果:P2’-GT cDNA全长1 452 bp,编码483个氨基酸,相对分子质量53.6 kDa,等电点5.76,该基因编码蛋白是不稳定蛋白,不具有明显的跨膜结构,二级结构主要有α-螺旋、无规卷曲和延伸链组成,三级结构结果显示P2’-GT蛋白模型与对苯二酚葡萄糖基转移酶相似度最高(41.32%),进化分析表明P2’-GT与白梨糖基转移酶同源性最高。RTFQ-PCR分析发现P2’-GT在3种苹果皮中均高效表达,在叶和根中微量表达,在果肉中不表达;P2’-GT的转录表达受苹果发育调控,在生长初期几乎不表达,随着苹果发育表达量逐渐增加,在生长中期达到最高值,随后开始减少,至苹果成熟期下降到最高值的50%水平。此外,P2’-GT在3种苹果品种中表达不同,在澳洲青苹中表达量最高,在嘎啦中表达量最低。结论:本研究明确了P2’-GT的生物信息学特性及P2’-GT基因在不同生长期和不同部位的表达差异,为调控根皮苷合成的研究提供理论依据。
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关键词
根皮苷
根皮苷-2-O-糖基转移酶
克隆
生物信息学
实时荧光定量聚合酶链式反应
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职称材料
题名
苹果根皮苷-2-O-糖基转移酶基因克隆与表达模式分析
被引量：
1
1
作者
冉军舰
梁新红
陈晓静
李向阳
焦凌霞
赵瑞香
机构
河南科技
学院
食品
学院
河南省高校重点实验室培育基地
新乡
市农产品加工工程
技术
研究中心
河南科技
学院
新科
学院
新乡职业技术学院后勤管理处
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期202-207,共6页
基金
河南省高校重点科研项目(18A550006)
河南省高校科技创新人才支持计划项目(17HASTIT037)
河南科技学院高层次人才科研项目(2015016)
文摘
目的:根皮苷-2-O-糖基转移酶(phloridzin 2’-O-glycosyltransferase,P2’-GT)是根皮苷合成最后一步关键酶,可以把根皮素转化成根皮苷,本研究在富士苹果中克隆出P2’-GT基因,对基因编码产物进行生物信息学分析和基因的表达模式分析。方法:以苹果皮为材料,提取RNA反转录合成cDNA为模板,设计特异性引物进行扩增和测序,利用Pro Param tool、TMHMM等在线软件对编码蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime?uorescence quatitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分析P2’-GT在苹果不同部位、不同苹果品种和不同生长时期的表达差异。结果:P2’-GT cDNA全长1 452 bp,编码483个氨基酸,相对分子质量53.6 kDa,等电点5.76,该基因编码蛋白是不稳定蛋白,不具有明显的跨膜结构,二级结构主要有α-螺旋、无规卷曲和延伸链组成,三级结构结果显示P2’-GT蛋白模型与对苯二酚葡萄糖基转移酶相似度最高(41.32%),进化分析表明P2’-GT与白梨糖基转移酶同源性最高。RTFQ-PCR分析发现P2’-GT在3种苹果皮中均高效表达,在叶和根中微量表达,在果肉中不表达;P2’-GT的转录表达受苹果发育调控,在生长初期几乎不表达,随着苹果发育表达量逐渐增加,在生长中期达到最高值,随后开始减少,至苹果成熟期下降到最高值的50%水平。此外,P2’-GT在3种苹果品种中表达不同,在澳洲青苹中表达量最高,在嘎啦中表达量最低。结论:本研究明确了P2’-GT的生物信息学特性及P2’-GT基因在不同生长期和不同部位的表达差异,为调控根皮苷合成的研究提供理论依据。
关键词
根皮苷
根皮苷-2-O-糖基转移酶
克隆
生物信息学
实时荧光定量聚合酶链式反应
Keywords
phloridzin
phloridzin 2’-O-glycosyltransferase
cloning
bioinformatics
real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction(RTFQ-PCR)
分类号
S661.1 [农业科学—果树学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
苹果根皮苷-2-O-糖基转移酶基因克隆与表达模式分析
冉军舰
梁新红
陈晓静
李向阳
焦凌霞
赵瑞香
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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