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传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定
被引量：
8
1
作者
宋幸辉
王睿
+6 位作者
王选年
鲍登克
杨苏珍
卢清侠
王寅彪
赵东
张改平
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期692-697,共6页
为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BAL...
为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。
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关键词
IBDV
VP2蛋白
P22多肽
抗原表位
免疫
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职称材料
猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
9
2
作者
岳锋
朱艳平
+1 位作者
银梅
王选年
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第6期18-22,共5页
根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人...
根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人工感染CSFV后不同时期猪血浆中CSFV的载量。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,R2=0.999;敏感性高,最低检测限为1×101拷贝/μL;特异性强,与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应性;重复性好,组内和组间变异系数均小于2%。人工感染CSFV后第7天猪血浆中CSFV载量达到峰值,之后逐渐降低。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、重复性好等优点,为CSFV的定量分析及临床诊断奠定基础。
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关键词
猪瘟病毒
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
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职称材料
猪PD-1及其配体PD-L1和PD-L2 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
3
作者
岳锋
周娟娟
+3 位作者
朱艳平
李鹏
孙国鹏
王选年
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第11期2892-2899,共8页
本试验旨在研究猪PD-1及其配体在疾病状态下的转录水平,建立检测猪PD-1及其配体的Real-time PCR方法。根据GenBank中猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因序列,分别设计3对特异性引物,PCR扩增目的基因片段,回收目的基因片段与pMD18-T连接后转化至...
本试验旨在研究猪PD-1及其配体在疾病状态下的转录水平,建立检测猪PD-1及其配体的Real-time PCR方法。根据GenBank中猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因序列,分别设计3对特异性引物,PCR扩增目的基因片段,回收目的基因片段与pMD18-T连接后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定正确,作为标准品绘制标准曲线,并进行特异性和重复性检测。结果显示,Real-time PCR的Ct值与模板浓度对数呈良好的线性反比关系,相关系数R2>0.99,熔解曲线出现狭窄单一峰;Real-time PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,呈单一目的条带,无引物二聚体,特异性强;组内和组间重复性检测结果显示,组内和组间的变异系数均小于3%,重复性好;用建立的Real-time PCR方法检测猪自然感染PCV2后PD-1及其配体转录水平,PD-L1和PD-L2转录水平极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),PD-1转录水平无显著变化(P>0.05)。本试验建立了检测猪PD-1、PDL1和PD-L2mRNA的Real-time PCR方法并进行了初步应用,为猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因表达模式研究奠定基础。
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关键词
REAL-TIME
PCR
PD-1
PD-L1
PD-L2
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职称材料
题名
传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定
被引量：
8
1
作者
宋幸辉
王睿
王选年
鲍登克
杨苏珍
卢清侠
王寅彪
赵东
张改平
机构
河南农业大学
河南省农业科
学院
农业部动物免疫学重点开放实验室
新乡学院生物技术研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期692-697,共6页
基金
国家自然科学基金(30871885)
文摘
为鉴定IBDV VP2蛋白线性B细胞抗原表位肽P22的免疫原性及生物学功能,作者采用固相多肽合成方法合成多肽P22,经纯化后用SMCC法分别与牛血清白蛋白(BSA)和细胞穿膜肽(PNT)进行偶联,得到免疫抗原P22-BSA和检测抗原P22-PNT;用P22-BSA免疫BALB/c小鼠3只,经3次免疫后得到多抗血清3份。应用ELISA检测了抗P22抗体的特异性,并通过抗P22多肽抗体作为特异性抗体检测了P22多肽结合CEF细胞的特性。结果经鉴定3份多抗血清均与P22多肽特异性反应,效价均达到1∶105,且能特异性检测P22多肽与CEF细胞的特异性结合。本试验成功制备了P22免疫原,获得了效价高、特异性较好的鼠源抗P22多抗血清,并证明P22多肽与CEF细胞能够特异性结合,为进一步研究多肽疫苗的设计或试纸条的研制及表位单抗的制备提供了新的思路和基础。
关键词
IBDV
VP2蛋白
P22多肽
抗原表位
免疫
Keywords
IBDV
VP2 protein
peptide
epitope
immunization
分类号
S852.659.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
9
2
作者
岳锋
朱艳平
银梅
王选年
机构
新乡
学院
生命科学与
技术
系
新乡学院生物技术研究所
河南科技
学院
动物科学
学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第6期18-22,共5页
基金
国家自然科学基金(31291877
31272539)
+1 种基金
河南省科技厅基础与前沿技术研究项目(122300410150)
河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230837)
文摘
根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人工感染CSFV后不同时期猪血浆中CSFV的载量。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,R2=0.999;敏感性高,最低检测限为1×101拷贝/μL;特异性强,与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应性;重复性好,组内和组间变异系数均小于2%。人工感染CSFV后第7天猪血浆中CSFV载量达到峰值,之后逐渐降低。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、重复性好等优点,为CSFV的定量分析及临床诊断奠定基础。
关键词
猪瘟病毒
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
Keywords
classical swine fever virus
fluorescence quantitative PCR
TaqMan probe
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
猪PD-1及其配体PD-L1和PD-L2 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立及应用
被引量：
3
3
作者
岳锋
周娟娟
朱艳平
李鹏
孙国鹏
王选年
机构
新乡
学院
生命科学
技术
学院
新乡学院生物技术研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第11期2892-2899,共8页
基金
国家自然科学基金(31291877)
新乡学院科技创新基金重点培育项目(15ZP03)
新乡学院博士启动科研项目(1366020053)
文摘
本试验旨在研究猪PD-1及其配体在疾病状态下的转录水平,建立检测猪PD-1及其配体的Real-time PCR方法。根据GenBank中猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因序列,分别设计3对特异性引物,PCR扩增目的基因片段,回收目的基因片段与pMD18-T连接后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定正确,作为标准品绘制标准曲线,并进行特异性和重复性检测。结果显示,Real-time PCR的Ct值与模板浓度对数呈良好的线性反比关系,相关系数R2>0.99,熔解曲线出现狭窄单一峰;Real-time PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,呈单一目的条带,无引物二聚体,特异性强;组内和组间重复性检测结果显示,组内和组间的变异系数均小于3%,重复性好;用建立的Real-time PCR方法检测猪自然感染PCV2后PD-1及其配体转录水平,PD-L1和PD-L2转录水平极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),PD-1转录水平无显著变化(P>0.05)。本试验建立了检测猪PD-1、PDL1和PD-L2mRNA的Real-time PCR方法并进行了初步应用,为猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因表达模式研究奠定基础。
关键词
REAL-TIME
PCR
PD-1
PD-L1
PD-L2
Keywords
Real-time PCR
PD-1
PD-L1
PD-L2
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
传染性法氏囊病毒VP2蛋白抗原表位多肽P22的免疫原性及生物学功能鉴定
宋幸辉
王睿
王选年
鲍登克
杨苏珍
卢清侠
王寅彪
赵东
张改平
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
岳锋
朱艳平
银梅
王选年
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪PD-1及其配体PD-L1和PD-L2 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立及应用
岳锋
周娟娟
朱艳平
李鹏
孙国鹏
王选年
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
3
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