Nanog在大鼠心肌梗死后组织表达的变化

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作者 吕风华 高建芝 +1 位作者 滕清雷 郭志坤 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第16期2929-2931,共3页

目的:研究nanog在心肌梗死后心肌组织表达的变化,为急性心肌缺血的临床治疗和研究提供形态学依据。方法:健康雄性SD大鼠20只,随机分心肌缺血组(即模型组,n=10)和假手术组(n=10)通过免疫荧光及Western blot等技术方法,比较两组间心肌组... 目的:研究nanog在心肌梗死后心肌组织表达的变化,为急性心肌缺血的临床治疗和研究提供形态学依据。方法:健康雄性SD大鼠20只,随机分心肌缺血组(即模型组,n=10)和假手术组(n=10)通过免疫荧光及Western blot等技术方法,比较两组间心肌组织细胞nanog蛋白的表达。结果:(1)荧光染色结果显示:假手术组心肌细胞中nanog蛋白均为阴性表达,模型组心肌细胞中nanog蛋白大部分为弱阳性表达。(2)Western blot结果显示模型组心肌组织nanog蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:nanog蛋白对于急性心肌缺血后的心肌修复具有一定保护作用。 展开更多

关键词 NANOG 心肌修复 免疫荧光 WESTERN BLOT

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大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织与c-kit^(+)和sca-1^(+)细胞的关系研究 被引量：1

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作者 孙攀文 郭永龙 +2 位作者 贾阳阳 孙昌业 郭志坤 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第4期453-458,共6页

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆... 目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养和维生素D3腹腔注射方法制备模型。模型制备成功后,通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察sca-1、c-kit在模型组与正常组的大鼠冠状动脉组织中的表达变化。利用免疫荧光双标技术证明sca-1与α-SMA的共定位表达。利用western blotting技术检测模型组与正常组的冠状动脉组织c-kit、sca-1蛋白的表达差异。结果造模12周,大鼠冠状动脉管壁明显增厚,内膜明显增生,平滑肌纤维排列显著紊乱,坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。免疫组化和免疫荧光结果显示sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞在动脉粥样硬化钙化区域的冠状动脉内膜、中膜、外膜中数量明显高于正常对照。病变区域的部分细胞存在sca-1与α-SMA的共表达。Western blotting结果显示动脉粥样硬化和钙化区域的c-kit、sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。结论sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞有向冠状动脉粥样硬化钙化区域迁移的倾向,其机制尚需研究。 展开更多

关键词 SCA-1 C-KIT 动脉粥样硬化钙化 免疫组织化学 大鼠心脏

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6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化 被引量：7

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作者 张毅敏 连辉 +3 位作者 宋海岩 周立 蔡君艳 王志勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期975-980,共6页

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组... 目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。 展开更多

关键词 6-羟多巴 弓状核 酪氨酸羟化酶 离子钙接头蛋白1 阿片-促黑素皮质素原

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应用鸡胚活体电转GFP示踪技术观察脊髓左右两侧神经元纤维投射 被引量：6

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作者 杨慈清 石晓卫 +3 位作者 胡阿珍 贾阳阳 郭志坤 林俊堂 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期718-721,共4页

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每... 目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每次脉冲60 ms,间隔100 ms,电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6小时开始到10天,分别收集胚胎,甲醛固定冰冻切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化。结果:电转后6小时便可以观察到GFP的表达,24小时后可以看到GFP标记细胞纤维的投射,3天可以清晰的观察到转入GFP一侧脊髓的运动神经元纤维束投射到另外一侧脊髓。结论:电转GFP成功标记运动神经元纤维在脊髓左右两侧的投射。 展开更多

关键词 鸡胚 胚胎发育 活体电转 纤维投射

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猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备 被引量：8

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作者 李任峰 田香勤 +5 位作者 韩笑 王晓斐 姜金庆 夏小静 王异民 王自良 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第4期52-57,共6页

本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化... 本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化。将纯化后的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其分泌抗体的特性进行了分析。结果显示:重组质粒pET28a-N在E.coli BL21中高效表达,筛选获得了2株稳定分泌抗N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3和4F6,其分泌的抗体均为IgG1亚型,腹水效价分别为5.12×10^5、1.28×10^5。本研究为进一步研究N蛋白的功能以及建立PEDV免疫学诊断方法奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 原核表达 单克隆抗体

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Wnt/β-catenin信号通路对孤独症模型大鼠重复呆板样行为的影响 被引量：5

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作者 张应花 贾云杰 +3 位作者 张天然 崔卫刚 王中平 文小军 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期430-433,442,共5页

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对孤独症发生过程中重复呆板样行为的影响。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)孤独症动物模型,检测了经典Wnt信号通路关键信号分子β-catenin及其负性调节因子GSK-3β在孤独症模型大鼠小脑脑区的表达变... 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对孤独症发生过程中重复呆板样行为的影响。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)孤独症动物模型,检测了经典Wnt信号通路关键信号分子β-catenin及其负性调节因子GSK-3β在孤独症模型大鼠小脑脑区的表达变化;同时检测孤独症模型大鼠重复呆板样行为变化。Western blotting法检测GSK-3β、β-catenin总蛋白及磷酸化蛋白表达,运用旷场实验检测重复呆板样行为持续的时间、次数。结果与对照组相比,在小脑脑区模型组GSK-3β磷酸化蛋白表达增加,β-catenin磷酸化蛋白表达减少;重复呆板样行为持续的时间、次数均增加。结论孤独症大鼠小脑脑区经典wnt信号通路活性增加,运动亢进,提示经典Wnt信号通路活性增加可能导致重复呆板样行为变化,进而导致对孤独症的易感性增加。 展开更多

关键词 孤独症 WNT/Β-CATENIN通路 丙戊酸 重复呆板样行为

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小鼠脂肪间充质干细胞体外培养时间与细胞衰老关系初探 被引量：2

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作者 李琼 左红波 +2 位作者 张珉 李慈霞 郭志坤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1028-1032,共5页

目的:探讨脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)体外培养时间与细胞衰老之间的关系,为细胞治疗提供实验参考。方法:分离、培养小鼠ADMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测第1至第1... 目的:探讨脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)体外培养时间与细胞衰老之间的关系,为细胞治疗提供实验参考。方法:分离、培养小鼠ADMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测第1至第10代ADMSCs以及第4代细胞培养第1至第8天细胞的衰老情况;流式细胞术检测细胞周期变化;电镜观测第3和第8代细胞的超微结构。结果:衰老ADMSCs胞浆呈蓝色,随着代次增加细胞衰老率升高,第8代开始高于第1代细胞(P<0.05),并且G0/G1期细胞所占比例升高,S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,提示细胞分裂增殖速度减慢;相同代次细胞,随着培养天数增加细胞衰老率呈上升趋势,第4天开始细胞的衰老比率明显高于第1天(P<0.05)。随着细胞代次增加,细胞膜出现较多突起,且胞质内脂滴增多,出现自噬体。结论:ADMSCs细胞衰老率与体外培养时间正相关。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 细胞衰老 超微结构

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Bax、Bcl-2在培养新生鼠皮层神经元中的表达及L-NAME的干预作用

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作者 宋海岩 高志涛 +3 位作者 邓晓慧 连辉 任铭新 付升旗 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第5期595-598,共4页

目的探讨Bax与Bcl-2在体外培养的皮层神经元的表达及非选择性一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的干预作用。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,并采用neuron specific enolase(NSE)免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经... 目的探讨Bax与Bcl-2在体外培养的皮层神经元的表达及非选择性一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的干预作用。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,并采用neuron specific enolase(NSE)免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经元随机分为正常组、N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)组、NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester(L-NAME)组,分别采用ELISA检测各组细胞中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达,采用RT-PCR、Western blot分别检测各组细胞中Bax、Bcl-2mRNA及蛋白的表达。结果 NSE免疫荧光大多数细胞为NSE阳性细胞,神经元纯度高达90%;LNAME组中NOS及Bax的表达均高于正常组而低于NMDA组,Bcl-2的表达低于正常组而高于NMDA组。结论 L-NAME对NMDA诱导的神经细胞凋亡起明显的保护作用,其可能是通过上调Bcl-2的表达、下调Bax的表达发挥作用。 展开更多

关键词 一氧化氮合酶 BAX BCL-2

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高脂血症大鼠心肌中脂滴分布和H-FABP表达变化 被引量：5

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作者 孙晓鹏 郭康 郭志坤 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第1期49-54,59,共7页

目的观察高脂血症大鼠心肌细胞脂滴含量和心功能,以及心型脂肪酸结合蛋白(heart type fatty acid binding protein,H-FABP)的表达。方法高脂饲料喂养SD雄性大鼠,建立高脂血症模型。饲养后4周、8周、12周,分别进行心功能检测后取出心,制... 目的观察高脂血症大鼠心肌细胞脂滴含量和心功能,以及心型脂肪酸结合蛋白(heart type fatty acid binding protein,H-FABP)的表达。方法高脂饲料喂养SD雄性大鼠,建立高脂血症模型。饲养后4周、8周、12周,分别进行心功能检测后取出心,制作冰冻切片,光学显微镜观察脂滴在心肌的分布(油红O染色),透射电镜观察心肌组织脂滴;采用免疫组织化学、免疫荧光、免疫印迹检测心肌细胞和心肌组织中H-FABP的表达。结果与普通饮食大鼠相比,高脂饮食大鼠血清甘油三酯和总胆固醇明显升高,在第12周升高最为明显,并伴有射血分数的明显下降;心肌细胞内脂滴含量增多,第4周增多最为显著,第8周、第12周逐渐减少;心肌细胞和心肌组织中H-FABP在第8周、第12周表达明显增加。结论高脂血症大鼠心肌发生脂肪变性,随着血脂浓度升高脂肪变性减轻,心功能降低,这一变化可能与H-FABP表达增多,增加心肌细胞内脂肪酸氧化有关。 展开更多

关键词 H-FABP 高脂血症 心肌脂肪变性 免疫组织化学 免疫荧光 免疫印迹 大鼠心功能

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N-乙酰半胱氨酸通过海马区Notch1/hes1通路改善丙戊酸孤独症模型鼠的学习和记忆能力 被引量：3

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作者 项哲 张应花 +2 位作者 何雪玲 王丽君 崔卫刚 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期390-396,共7页

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否改善孤独症模型鼠的学习和记忆能力及其作用机制。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)建立孤独症模型,通过三箱实验鉴定造模成功,Western blotting技术检测模型鼠海马区Notch1/hes1通... 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)能否改善孤独症模型鼠的学习和记忆能力及其作用机制。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)建立孤独症模型,通过三箱实验鉴定造模成功,Western blotting技术检测模型鼠海马区Notch1/hes1通路信号分子Notch1、Notch1胞内活性结构域(Notch intracellular domain,NICD)、Hes1、Jagged1变化,免疫荧光技术检测该通路信号下游靶基因Hes1的表达;然后用NAC干预,检测模型鼠学习和记忆能力的变化及Notch1/hes1信号通路关键信号分子的改变。结果与对照组相比,VPA组大鼠找到平台的时间增加,跨越平台的次数及在靶象限的时间均减少,同时Notch1、NICD、Hes1、Jagged1的蛋白表达水平增加;而NAC干预以后,与VPA组相比,VPA+NAC组大鼠找到平台的时间减少,跨越平台的次数及在靶象限的时间均增加,同时海马脑区NICD、Hes1的蛋白表达均下降。结论 NAC可以改善VPA孤独症模型鼠学习和记忆能力,其作用机制可能与降低Notch1/hes1信号通路的过度活化有关。 展开更多

关键词 孤独症 N-乙酰半胱氨酸 NOTCH1 丙戊酸 学习记忆能力

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脑内多巴胺系统与体重变化的关系

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作者 张阳 周立 王志勇 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2021年第6期721-725,共5页

多巴胺(DA)是脑内含量最多的儿茶酚胺类神经递质,其阳性神经元在脑内有广泛的投射.DA的生理作用由5种不同但密切相关的DA受体介导.肥胖时,能量的输入和输出之间存在明显的平衡失调.DA系统主要通过影响食物摄入以及对运动行为、能量消耗... 多巴胺(DA)是脑内含量最多的儿茶酚胺类神经递质,其阳性神经元在脑内有广泛的投射.DA的生理作用由5种不同但密切相关的DA受体介导.肥胖时,能量的输入和输出之间存在明显的平衡失调.DA系统主要通过影响食物摄入以及对运动行为、能量消耗和产热的调节来调控能量输入和输出,进而影响体重变化.DA系统在体重减轻的帕金森病患者中存在DA对能量输入和输出的异常调控.本文主要就脑内DA系统与体重变化的关系进行综述,以期为揭示DA与肥胖以及其他代谢疾病的关系提供参考. 展开更多

关键词 多巴胺 多巴胺受体 肥胖 体重 帕金森病

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Notch信号通路在孤独症谱系障碍中的研究进展

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作者 项哲 何雪玲 +1 位作者 崔卫刚 张应花 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期357-359,共3页

孤独症谱系障碍（Autism spectrum disorders,ASDs）是一组病因复杂、发病机制尚不明确的神经发育障碍性疾病。ASDs包括典型孤独症、阿斯伯格综合症、Rett综合征、童年瓦解性障碍及其它待分类的非特异性广泛发育障碍。其主要的行为表现... 孤独症谱系障碍（Autism spectrum disorders,ASDs）是一组病因复杂、发病机制尚不明确的神经发育障碍性疾病。ASDs包括典型孤独症、阿斯伯格综合症、Rett综合征、童年瓦解性障碍及其它待分类的非特异性广泛发育障碍。其主要的行为表现有社交障碍、语言发育障碍以及重复刻板的兴趣或行为等。近年来,ASDs由于发病率在不同国家均有所上升,而成为研究的一大热点。 展开更多

关键词 信号通路 WNT 信号传导 神经系统发育 神经系统疾病 孤独症谱系障碍 NOTCH

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