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纳米塑料-重金属-塑化剂联合暴露对儿童肠道微生物菌群及代谢的影响 被引量:3
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作者 豆晴楠 赵丽丽 +5 位作者 姬汉轩 王怡斌 陈婉蓉 孙晓涵 姚国琴 马腾云 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期33-42,I0003,共11页
[目的]探究纳米塑料(NPs)、镉(Cd)和邻苯二甲酸二丁酯(DBP)污染对儿童肠道菌群多样性、氨基酸代谢及短链脂肪酸(SCFAs)含量的影响.[方法]利用16S rRNA高通量测序技术和高效液相色谱-质谱法LC-MS/MS分析NPs、Cd、DBP单一污染及纳米塑料... [目的]探究纳米塑料(NPs)、镉(Cd)和邻苯二甲酸二丁酯(DBP)污染对儿童肠道菌群多样性、氨基酸代谢及短链脂肪酸(SCFAs)含量的影响.[方法]利用16S rRNA高通量测序技术和高效液相色谱-质谱法LC-MS/MS分析NPs、Cd、DBP单一污染及纳米塑料聚丙烯(PP)、Cd、DBP复合污染对儿童肠道细菌群落及肠道微生物代谢产物中短链脂肪酸及氨基酸含量的变化.[结果]高通量检测结果显示,与对照相比,在门属水平上,单一污染的优势菌门属无明显变化,PP+Cd、PP+DBP+Cd复合污染优势菌门属水平丰富度与多样性显著下降;LC-MS/MS检测结果显示,在肠道微生物代谢产物中,经NPs与DBP暴露后,氨基酸含量呈现不同程度的下降,而Cd、PP+Cd、PP+Cd+DBP处理后,大多数氨基酸的含量显著增加;同时检测到丁酸、戊酸的含量也发生变化.[结论]与单一污染物处理相比NPs相关复合污染物暴露处理后其肠道微生物紊乱程度更强,且不同污染物处理均会影响肠道微生物的氨基酸代谢和SCFAs产量.肠道菌群与人体健康密切相关,探究肠道菌群及代谢功能在NPs、Cd、DBP影响下的变化,从肠道菌群层面评价NPs、Cd、DBP单一暴露和复合暴露污染下的危害和风险具有重要意义. 展开更多
关键词 纳米塑料 邻苯二甲酸二丁酯 肠道菌群 短链脂肪酸 氨基酸
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BRD4基因对TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡和p38MAPK信号通路的影响 被引量:3
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作者 杨东伟 桂雨农 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期855-860,共6页
目的:探讨溴结构域蛋白4(BRD4)基因对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的心肌细胞凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:将H9c2细胞分为空白对照组、si-CN组(转染阴性对照siRNA)和 si-BRD4组(转染特异性siRNA),采用Western blotting法检... 目的:探讨溴结构域蛋白4(BRD4)基因对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的心肌细胞凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:将H9c2细胞分为空白对照组、si-CN组(转染阴性对照siRNA)和 si-BRD4组(转染特异性siRNA),采用Western blotting法检测各组细胞中BRD4蛋白表达水平。大鼠心肌H9c2细胞随机分为对照组、TGF-β1组(20 μg·L^-1 TGF-β1处理细胞24 h)、si-NC+TGF-β1组(转染阴性对照的siRNA后,使用TGF-β1处理细胞24 h)和si-BRD4+TGF-β1组(转染BRD4特异性siRNA后,使用TGF-β1处理细胞24 h)。MTT法检测各组细胞增殖活性,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中BRD4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、P38和磷酸化P38(p-P38)蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,si-BRD4组H9c2细胞中BRD4蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax、Cleaved caspase3和p-P38蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,si-BRD4+TGF-β1组细胞增殖活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bax、Cleaved caspase3和p-P38蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:抑制BRD4基因表达可减弱 TGF-β1 诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关。 展开更多
关键词 心肌细胞 溴结构域蛋白4 转化生长因子Β1 P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路
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利用CRISPR/Cas9技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除稳定细胞株 被引量:1
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作者 王松 李鹏程 +4 位作者 白朝辉 许宏鑫 应研敏 张墨 白义春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期115-123,共9页
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除的细胞株,研究α-ENaC基因对细胞增殖的影响。构建敲除α-ENaC基因的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,通过转染和嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株,Western Blot、测序确定突... 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除的细胞株,研究α-ENaC基因对细胞增殖的影响。构建敲除α-ENaC基因的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,通过转染和嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株,Western Blot、测序确定突变的细胞株,CCK-8检测突变细胞株的增殖活力。成功构建靶向α-ENaC基因第一外显子的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,嘌呤霉素筛选后,挑选8个单细胞克隆中有两个单细胞克隆α-ENaC蛋白表达下降,一个单细胞克隆α-ENaC蛋白不再表达,测序结果显示3个单细胞克隆分别为2个单等位基因突变和1个双等位基因突变,且未发现脱靶现象。突变细胞株的增殖活力降低,其中双等位基因突变细胞株增殖活力降低更为显著。因此,利用CRISPR/Cas9结合SSA-RPG报告载体成功获得了α-ENaC基因敲除的L2细胞株,α-ENaC与细胞增殖有关。 展开更多
关键词 L2细胞 α-ENaC CRISPR/Cas9 基因敲除
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