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过表达TRAF2降解外源性绿色荧光蛋白 被引量:1
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作者 张波 周芳亮 +4 位作者 卢芳国 严杰 王成 周建林 张健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期722-727,共6页
TRAF2是机体免疫与炎症反应中具有重要作用的蛋白,有E3连接酶活性;GFP是一种受到激发光照射后可产生绿色荧光的蛋白,常用于蛋白质的细胞共定位研究,并显示与GFP融合表达靶蛋白在细胞中的位置.我们实验发现共转染表达质粒pCMV-myc-TRAF2... TRAF2是机体免疫与炎症反应中具有重要作用的蛋白,有E3连接酶活性;GFP是一种受到激发光照射后可产生绿色荧光的蛋白,常用于蛋白质的细胞共定位研究,并显示与GFP融合表达靶蛋白在细胞中的位置.我们实验发现共转染表达质粒pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3,可引起转染细胞绿色荧光减弱.Western印迹实验证明TRAF2可以降解GFP,并且这种降解是通过蛋白酶体途径进行的.为进一步确定这种降解的特异性,在HEK293细胞中共转pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3-LNX后,发现随着TRAF2表达量增加,融合蛋白GFP-LNX减少;而共转质粒pCMV-myc-TRAF2与pCMV-myc-LNX后,未发现LNX蛋白表达减少,表明TRAF2对GFP的降解具有相对特异性.GFP是人类细胞中并不存在的蛋白,TRAF2能够将其降解可能意味着TRAF2参与了细胞抗病原体感染的过程. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子2 绿色荧光蛋白 降解
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DNA聚合酶δ相互作用蛋白1能促进GFP蛋白的降解
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作者 张波 周芳亮 +2 位作者 卢芳国 严杰 张健 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期363-365,370,共4页
目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系... 目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系,再利用氯化铵与MG132分别进行干预,并检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系。结果共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1的HEK293细胞绿色荧光强度明显低于单转pEGFP-C3质粒的细胞;随着PDIP1蛋白表达量的增大,GFP蛋白的表达量减少;利用MG132干预可以明显抑制PDIP1对GFP的降解,而氯化铵干预没有显示明显的效应。结论过表达PDIP1可以促进外源性GFP蛋白的降解,且这一降解是通过蛋白酶体途径进行的,提示PDIP1可能参与细胞内某些蛋白的泛素化降解。 展开更多
关键词 DNA聚合酶δ相互作用蛋白1 绿色荧光蛋白 降解 HEK293细胞
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海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ,一种新型的抑制昆虫电压门控钠通道失活的狼蛛神经毒素(英文) 被引量:3
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作者 王瑞兰 潘建议 +2 位作者 肖玉成 王美迟 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期796-802,共7页
通过阳离子交换和反相HPLC柱层析从海南捕鸟蛛(Ornithoconus hainana)粗毒中分离到一种新型的神经毒素,海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ(HNTX-Ⅵ),由34个氨基酸残基组成,含有6个保守的半胱氨酸残基.运用全细胞膜片钳技术,研究了HNTX-Ⅵ对电压门控钠... 通过阳离子交换和反相HPLC柱层析从海南捕鸟蛛(Ornithoconus hainana)粗毒中分离到一种新型的神经毒素,海南捕鸟蛛毒素-Ⅵ(HNTX-Ⅵ),由34个氨基酸残基组成,含有6个保守的半胱氨酸残基.运用全细胞膜片钳技术,研究了HNTX-Ⅵ对电压门控钠通道的影响.先前从海南捕鸟蛛粗毒中分离到的几种毒素,具有抑制哺乳动物钠通道激活的特性.本文研究结果表明,HNTX-Ⅵ能以类似于δ-atractoxins作用方式延缓蜚蠊背侧不成对中间(dorsal unpaired median,DUM)神经细胞的钠通道的失活,且导致钠通道稳态失活变得不完全,在预钳制电压大于-55 mV时形成不完全失活结构.HNTX-Ⅵ的这种新的功能不仅为探索钠通道的门控机制提供了有用的工具,也为开发新的安全的杀虫剂提供理论基础. 展开更多
关键词 蜘蛛神经毒素 背侧不成对中间神经细胞 钠通道
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人TRAF2新剪切体的鉴定与表达分析 被引量:1
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作者 罗红雨 张波 +3 位作者 严杰 李玲 尹抗抗 韩梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1176-1179,共4页
目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析。方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在。再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析。结果:利用P1与P2引物对从人脑库... 目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析。方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在。再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析。结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子。通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势;而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRATΔ6剪切体表达占优势;在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达;在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近。在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势。结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA,而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性。 展开更多
关键词 TRAF2 剪切体 PCR
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TNFAIP1基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡 被引量:1
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作者 孙振华 贺琼芝 +1 位作者 颜峰 周畅 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2009年第1期112-115,共4页
将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制.Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡.通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bc l-2的mRNA水平... 将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制.Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡.通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bc l-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bc l-2的表达诱导细胞凋亡. 展开更多
关键词 TNFAIP1 Bd-2 细胞凋亡
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