目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:...目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:运用特异性荧光定量探针法检测了26例HBV感染的肝癌患者中HBV cccDNA和HBV DNA的表达水平,进一步分析这两种病毒因子在HBeAg阳性和HBeAg阴性样本中的表达差别以及与HBeAg状态的关系。结果:HBV cccDNA和HBV DNA在HBeAg阴性组的表达水平均显著低于HBeAg阳性组(P值分别为0.044和0.0214),同时,在HBeAg阴性组中,cccDNA的表达水平与DNA是显著正相关的(r=0.918,P=0.000);HBeAg阳性组中cccDNA与DNA是较弱的正相关关系,且不具有显著性(r=0.591,P=0.072)。结论:肝内cccDNA与DNA表达水平与HBeAg的状态是密切相关的,HBeAg阴性的HCC患者中病毒复制水平下降的原因主要是cccDNA水平的下降。展开更多
目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesi...目的:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标签的乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)特异性shRNA重组腺病毒,并对其干扰效果进行鉴定。方法:将前期构建的真核表达载体pGenesil-1-HBx-shRNA和pGenesil-1-Scramble sequence的表达启动子U6连同shRNA亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建pAdTrack-CMV-U6-HBxshRNA和对照pAdTrack-CMV-U6-Scramble sequence穿梭质粒;酶切及DNA测序鉴定后,经PmeⅠ线性化后转化入感受态AdEasier细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence,PacⅠ酶切后转染AD293细胞获得重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA和Ad-U6-Scramble sequence;扩增病毒,测定滴度;以RT-PCR和real-time PCR鉴定重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA对HBx的干扰效果。结果:酶切鉴定得到阳性pAd-U6-HBx-shRNA和pAd-U6-Scramble sequence重组质粒;转染到AD293细胞并包装成功;RT-PCR以及real-time PCR表明,重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA携带的干扰片段能够明显干扰HBx表达(P=0.01)。结论:成功构建了HBx特异性shRNA重组腺病毒Ad-U6-HBx-shRNA,它能抑制HepG2.2.15细胞中的HBx的表达,为研究HBx作为肝癌基因治疗作用的一个靶点以及机制奠定基础。展开更多
目的：了解重庆地区乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）基因型的分布情况并进行精确定量分析。方法：采用荧光分型定量聚合酶链反应法（Real-time genotyping and quantitative PCR,GQ-PCR）对收集的血清标本进行HBV基因分型并定量...目的：了解重庆地区乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）基因型的分布情况并进行精确定量分析。方法：采用荧光分型定量聚合酶链反应法（Real-time genotyping and quantitative PCR,GQ-PCR）对收集的血清标本进行HBV基因分型并定量。结果：152株血清标本成功分型148株（97.37%）,其中B基因型109例（男88例、女21例）[定量值范围4-12 log10copies/ml、均值和标准差（7.94±1.44）log10copies/ml]、C基因型10例（男6例、女4例）[定量值范围5~10 log10copies/ml、均值和标准差（8.12±1.64）log10copies/ml]、基因B＋C混合型29例（男24例、女5例）[定量值范围4~10 log10copies/ml、均值和标准差（7.45±1.59）log10copies/ml]。检出率分别为73.65%（男74.58%、女70.00%）、6.76%（男5.08%、女13.30%）、19.59%（男20.34%、女16.70%）。结论：重庆地区HBV优势基因型以B型和B＋C混合型为主,与前几年相比较,C型有下降趋势。基因型的分布与性别无关（P〉0.05）。HBV载量在B、C型及B＋C混合型三者之间无统计学差异（P〉0.05）。荧光分型定量PCR（GQ-PCR）法灵敏度和特异性高,能够同时准确的对临床标本进行HBV基因分型及定量检测,并有望替代传统的基因分型方法。展开更多
文摘目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:运用特异性荧光定量探针法检测了26例HBV感染的肝癌患者中HBV cccDNA和HBV DNA的表达水平,进一步分析这两种病毒因子在HBeAg阳性和HBeAg阴性样本中的表达差别以及与HBeAg状态的关系。结果:HBV cccDNA和HBV DNA在HBeAg阴性组的表达水平均显著低于HBeAg阳性组(P值分别为0.044和0.0214),同时,在HBeAg阴性组中,cccDNA的表达水平与DNA是显著正相关的(r=0.918,P=0.000);HBeAg阳性组中cccDNA与DNA是较弱的正相关关系,且不具有显著性(r=0.591,P=0.072)。结论:肝内cccDNA与DNA表达水平与HBeAg的状态是密切相关的,HBeAg阴性的HCC患者中病毒复制水平下降的原因主要是cccDNA水平的下降。
文摘目的：了解重庆地区乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）基因型的分布情况并进行精确定量分析。方法：采用荧光分型定量聚合酶链反应法（Real-time genotyping and quantitative PCR,GQ-PCR）对收集的血清标本进行HBV基因分型并定量。结果：152株血清标本成功分型148株（97.37%）,其中B基因型109例（男88例、女21例）[定量值范围4-12 log10copies/ml、均值和标准差（7.94±1.44）log10copies/ml]、C基因型10例（男6例、女4例）[定量值范围5~10 log10copies/ml、均值和标准差（8.12±1.64）log10copies/ml]、基因B＋C混合型29例（男24例、女5例）[定量值范围4~10 log10copies/ml、均值和标准差（7.45±1.59）log10copies/ml]。检出率分别为73.65%（男74.58%、女70.00%）、6.76%（男5.08%、女13.30%）、19.59%（男20.34%、女16.70%）。结论：重庆地区HBV优势基因型以B型和B＋C混合型为主,与前几年相比较,C型有下降趋势。基因型的分布与性别无关（P〉0.05）。HBV载量在B、C型及B＋C混合型三者之间无统计学差异（P〉0.05）。荧光分型定量PCR（GQ-PCR）法灵敏度和特异性高,能够同时准确的对临床标本进行HBV基因分型及定量检测,并有望替代传统的基因分型方法。
