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L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建
被引量：
1
1
作者
王婷
韩超
+5 位作者
毛倩
张德志
蔡柠匀
刘宏亮
李燕军
陈宁
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期56-63,共8页
L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli) THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilv A2和ilv...
L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli) THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilv A2和ilv A4在THRD中过表达,菌株THRD/p Trc99a-ilv A2在5 L发酵罐中分批补料发酵,2-酮基丁酸积累量达到18 g/L。然后,分别与ilv A2串联表达酪氨酸转氨酶、谷氨酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶编码基因tyr B、gdh和bcdBS,将L-2-酮基丁酸转化为L-2-氨基丁酸,菌株THRD/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量达到19 g/L。最后,研究了阻断L-苏氨酸输出途径对发酵的影响,菌株THRDΔrht C/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量提升至22 g/L。因此,通过代谢途径延伸可以有效地将L-苏氨酸生产菌株转变为L-2-氨基丁酸生产菌株。该研究为L-2-氨基丁酸高产菌株的构建奠定了基础,且对其他延伸代谢途径获得新产品的代谢工程研究提供了参考。
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关键词
大肠杆菌
L-苏氨酸
L-2-酮基丁酸
L-2-氨基丁酸
转运途径
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职称材料
谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化
被引量：
1
2
作者
王婷
马洪坤
+3 位作者
赵桂红
蔡柠匀
张德志
陈宁
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第19期1-7,共7页
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌...
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70bp、12.5μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至(80±5.7)%。由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。
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关键词
CRISPR-Cpf1
SSDNA
谷氨酸棒状杆菌
优化
基因组编辑
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职称材料
题名
L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建
被引量：
1
1
作者
王婷
韩超
毛倩
张德志
蔡柠匀
刘宏亮
李燕军
陈宁
机构
天津
科技
大学
生物
工程学院
代谢控制
发酵
技术国家地方联合工程
实验室
(
天津
科技
大学
)
教育部
工业
发酵
微生物
重点
实验室
(
天津
科技
大学
)
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期56-63,共8页
文摘
L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli) THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilv A2和ilv A4在THRD中过表达,菌株THRD/p Trc99a-ilv A2在5 L发酵罐中分批补料发酵,2-酮基丁酸积累量达到18 g/L。然后,分别与ilv A2串联表达酪氨酸转氨酶、谷氨酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶编码基因tyr B、gdh和bcdBS,将L-2-酮基丁酸转化为L-2-氨基丁酸,菌株THRD/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量达到19 g/L。最后,研究了阻断L-苏氨酸输出途径对发酵的影响,菌株THRDΔrht C/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量提升至22 g/L。因此,通过代谢途径延伸可以有效地将L-苏氨酸生产菌株转变为L-2-氨基丁酸生产菌株。该研究为L-2-氨基丁酸高产菌株的构建奠定了基础,且对其他延伸代谢途径获得新产品的代谢工程研究提供了参考。
关键词
大肠杆菌
L-苏氨酸
L-2-酮基丁酸
L-2-氨基丁酸
转运途径
Keywords
Escherichia coli
L-threonine
L-2-ketobutyrate
L-2-aminobutyrate
transport system
分类号
TQ922 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化
被引量：
1
2
作者
王婷
马洪坤
赵桂红
蔡柠匀
张德志
陈宁
机构
天津
科技
大学
生物
工程学院
代谢控制
发酵
技术国家地方联合工程
实验室
(
天津
科技
大学
)
教育部
工业
发酵
微生物
重点
实验室
(
天津
科技
大学
)
天津
市
微生物
代谢与
发酵
过程控制技术工程中心
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第19期1-7,共7页
基金
国家重点研发计划(2018YFA0900304)
工业微生物优良菌种选育与发酵技术公共服务平台项目(17PTGCCX00190)
文摘
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70bp、12.5μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至(80±5.7)%。由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。
关键词
CRISPR-Cpf1
SSDNA
谷氨酸棒状杆菌
优化
基因组编辑
Keywords
CRISPR-Cpf1
ssDNA
Corynebacterium glutamicum
optimization
genome editing
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建
王婷
韩超
毛倩
张德志
蔡柠匀
刘宏亮
李燕军
陈宁
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
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职称材料
2
谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化
王婷
马洪坤
赵桂红
蔡柠匀
张德志
陈宁
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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