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反向遗传操作技术在瘟病毒属研究中的应用 被引量：1
1
作者 洪焜 刁乃超 +2 位作者 李建明 时坤 杜锐 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第7期57-63,共7页
反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提... 反向遗传操作技术已经成为研究瘟病毒属的一条有效的途径。针对反向遗传技术在瘟病毒属基因结构和功能研究、致病机制研究和新型疫苗研制中的应用以及瘟病毒属的感染性克隆策略的选择进行了综述,以期为预防、控制和消灭瘟病毒属病毒提供参考。 展开更多
关键词 反向遗传操作技术 瘟病毒属 致病机制 应用
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鹿尾蛋白与多肽制备工艺优化及其对TM3细胞增殖活性研究 被引量：5
2
作者 郭鑫 吴梦阳 +4 位作者 郭子奕 时坤 李建明 宗颖 杜锐 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第22期181-186,共6页
以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、... 以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、提取温度40℃,在此条件下蛋白含量为60.72%±0.56%;水酶法提取多肽工艺中最佳蛋白酶为胰蛋白酶,酶解最佳条件为pH8、加酶量1500 U/g、酶解时间4 h、提取温度50℃,在此条件下水解度为22.85%±0.35%。水酶法提取鹿尾多肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性优于超声水提鹿尾蛋白。 展开更多
关键词 鹿尾 蛋白 多肽 酶解产物 CCK-8法 小鼠睾丸间质细胞(TM3) 增殖活性
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植物精油的抑菌作用研究进展 被引量：9
3
作者 王慧 周红潮 +5 位作者 张旭 任晓航 时坤 李建明 杜锐 宗颖 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期107-111,共5页
近年来,随着细菌/真菌感染率大幅度上升,食源性疾病的全球发病率不断增多,而伴随致病菌耐药性的出现,现有抗菌药物的抑菌效果越来越有限,并对机体产生较大的毒副作用。精油系植物提取物的主要有效组分具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤... 近年来,随着细菌/真菌感染率大幅度上升,食源性疾病的全球发病率不断增多,而伴随致病菌耐药性的出现,现有抗菌药物的抑菌效果越来越有限,并对机体产生较大的毒副作用。精油系植物提取物的主要有效组分具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和抗菌等多重药理作用,其显著的抗细菌和抗真菌活性对于解决食品中日渐增多的耐药性细菌/真菌感染问题有着重要意义。论文对植物精油抑菌作用进行阐述,并详细地分析精油主要成分含量的影响因素,为更好的利用精油提供参考,同时为保障食品安全及相关研究提供科学依据。 展开更多
关键词 植物精油 抑菌作用 食源性疾病
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水貂阿留申病毒诱导CrFK细胞凋亡信号通路的研究 被引量：3
4
作者 葛桂阳 栾美慧 +8 位作者 宫庆龙 刘艺 李东丽 麻宝艺 盛陈艳 时坤 李健明 冷雪 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1089-1095,共7页
本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同... 本实验室前期研究表明水貂阿留申病毒(AMDV)G株感染猫肾细胞(CrFK)可以引起其凋亡,为研究AMDV在体外通过何种途径诱导CrFK细胞的凋亡,本实验采用MOI 1的AMDV G株感染CrFK细胞,于感染后不同时间(2 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h,下同)通过分光光度法检测试剂盒检测Caspase-8、Caspase-9的活性;利用western blot检测Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。采用Caspase-8和Caspase-9抑制剂处理CrFK细胞后感染AMDV G株,于不同时间检测Caspase-3的活性。于AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间,利用荧光定量PCR检测细胞中死亡受体通路分子Caspase-8、Fas、FasL和线粒体通路分子Caspase-9、Bax、Bcl-2、Cyt C以及凋亡执行因子Caspase-3的mRNA转录水平;采用JC-10线粒体膜电位试剂盒检测各时间点细胞线粒体膜电位的去极化情况。结果显示,AMDV G株感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8的活性均无明显变化,而Caspase-9的活性则随感染时间的延长而明显增强;western blot结果显示,Caspase-8蛋白的表达不受影响,而Caspase-9在AMDV感染后12 h被切割活化。Caspase-3活性的检测结果显示,抑制CrFK细胞中Caspase-8的活性后再感染AMDV,Caspase-3的活性逐渐增强,而抑制细胞中Caspase-9的活性后再感染AMDV,则Caspase-3的活性无明显变化,即抑制了Caspase-9再感染AMDV并不能诱导细胞凋亡;荧光定量PCR结果显示,AMDV感染CrFK细胞后不同时间Caspase-8、Fas、FasL基因的转录水平均无明显变化,而Caspase-9、Caspase-3、Cyt C基因mRNA转录水平及Bax/Bcl-2的比值则随感染时间的延长而逐渐升高。线粒体膜电位结果显示,AMDV感染的CrFK细胞线粒体膜电位下降,发生了明显去极化现象,表现为细胞发生了凋亡。综上,本研究首次证实AMDV G株感染CrFK细胞后激活了线粒体途径的细胞凋亡执行分子Caspase-3及线粒体通路相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9和Cyt C,并未激活死亡受体通路相关分子,AMDV G株是通过激活细胞线粒体通路而诱导CrFK细胞的凋亡。本研究为AMDV感染CrFK细胞凋亡机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 CrFK细胞 凋亡 信号通路
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水貂阿留申病毒感染过程中主要分子蛋白作用机理研究进展 被引量：1
5
作者 栾美慧 李健明 +7 位作者 时坤 刘艺 徐宁 郜艳雪 宫庆龙 孙志博 冷雪 杜锐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期973-976,共4页
水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由AMD病毒(AMDV)感染水貂引起的自身免疫系统功能紊乱,并引发自身免疫的慢性、传染性疾病,在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失[1-2]。由于其特殊的致病机制和抗体依赖性增强作用(A... 水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AMD)是由AMD病毒(AMDV)感染水貂引起的自身免疫系统功能紊乱,并引发自身免疫的慢性、传染性疾病,在全球范围的水貂养殖国家造成了重大的经济损失[1-2]。由于其特殊的致病机制和抗体依赖性增强作用(ADE)[3-4],尚无预防该病的商业疫苗。目前主要通过检疫淘汰病貂来净化貂厂,但该方法无法从根本上杜绝该病的发生发展。因此国内外对AMDV致病机制进行了大量研究,结果表明AMDV中参与ADE的结构蛋白、负责调控病毒复制的非结构蛋白及宿主的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspases)在致病机制中具有重要作用。本文对AMDV感染过程中各主要分子蛋白的相关调控进行阐述,以期为AMDV的致病机理以及进一步研究和防治AMD奠定理论基础。 展开更多
关键词 水貂阿留申病毒 感染过程 非结构蛋白 致病机制 自身免疫 传染性疾病 病毒复制 水貂养殖
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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的亚细胞定位研究 被引量：1
6
作者 刁乃超 时坤 +5 位作者 李健明 李仲乐 姜园园 刘东旭 王春凤 杜锐 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第4期1-5,共5页
为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组... 为深入研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的生物学功能,了解其在哺乳动物细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR扩增牛病毒性腹泻病毒Changchun184株E_2基因,将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5His A中,并进行酶切鉴定和测序分析,将构建的重组质粒pc DNA3.1/V5His A-E_2经脂质体介导转染至MDBK细胞。继续培养48h后,在激光共聚焦显微镜下观察E_2蛋白在细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,E_2蛋白在细胞核与细胞质中均有表达,且绿色荧光呈点状均匀分布。该研究为进一步研究牛病毒性腹泻病毒E_2蛋白的相关功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 亚细胞定位
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不同毒力结核分枝杆菌对THP-1细胞凋亡及细胞因子表达的影响 被引量：2
7
作者 张妍 宋纪伟 +6 位作者 曾范利 时坤 李健明 刘杨 刘菲 孙凡婷 杜锐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1600-1605,共6页
为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六... 为探讨不同毒力结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞后不同时间点细胞凋亡情况与其分泌的几种主要细胞因子转录与表达之间的关系,建立THP-1体外巨噬细胞模型,用不同毒力MTB(强毒株H37Rv、弱毒株BCG)感染细胞,应用流式细胞术检测巨噬细胞在六个时间点的凋亡情况,应用荧光定量PCR检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-6的转录水平,应用ELISA方法检测细胞上清液中三种细胞因子的分泌量。结果显示:BCG组和H37Rv组的早期凋亡率均显著高于对照组(P<0.05)。巨噬细胞细胞因子TNF-α、IL-6的转录水平与分泌水平相符,弱毒菌株巨噬细胞凋亡情况随时间延长成上升趋势,其分泌的细胞因子TNF-α表现为相同趋势,IL-6表现为相反趋势。强毒株巨噬细胞凋亡情况低于弱毒株,细胞因子分泌情况复杂,一般表现为一种先增强后抑制的情况。本试验通过对不同时间点细胞因子与凋亡情况关系的研究为结核分枝杆菌对巨噬细胞凋亡机制提供新思路。 展开更多
关键词 不同毒力结核分枝杆菌 THP-1细胞 凋亡 细胞因子
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抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选 被引量：2
8
作者 姜园园 李温明 +7 位作者 刘畅 曾范利 时坤 李健明 刁乃超 李仲乐 刘东旭 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期54-57,共4页
为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同... 为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。 展开更多
关键词 鹿 多药耐药结核菌 中药 耐药抑制剂
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