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斑地锦类黄酮-3'-羟化酶基因的克隆及表达分析
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作者 桂明明 于武华 +4 位作者 朱婧姝 叶菲 陈春香 黄胜和 饶泽昌 《福建农业学报》 北大核心 2025年第8期757-766,共10页
【目的】克隆斑地锦(Euphorbia maculate L.)类黄酮-3'-羟化酶(flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)基因及其启动子,检测F3'H基因在斑地锦不同生长期不同组织中的表达模式,并原核表达F3'H蛋白,为解析斑地锦黄酮类物质... 【目的】克隆斑地锦(Euphorbia maculate L.)类黄酮-3'-羟化酶(flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)基因及其启动子,检测F3'H基因在斑地锦不同生长期不同组织中的表达模式,并原核表达F3'H蛋白,为解析斑地锦黄酮类物质的生物合成途径奠定基础。【方法】根据转录组测序数据,克隆斑地锦F3'H基因开放阅读框(ORF)序列,利用Tail-PCR技术获得F3'H基因启动子序列,并进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR技术检测F3'H在斑地锦的不同时期不同组织表达情况;采用原核表达系统表达F3'H蛋白。【结果】获得F3'H基因ORF长度为1524 bp,命名为EmF3'H(GenBank登录号OR944655.1),编码507个氨基酸,属亲水性跨膜蛋白,预测亚细胞定位于内质网,保守结构域预测分析该蛋白属于细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)家族。克隆获得了1273 bp的EmF3'H启动子序列,内含启动子核心元件(TATA-box、CAAT-box)及激素、胁迫和光响应等顺式作用元件。RTqPCR结果表明,EmF3'H基因表达在不同组织之间具有显著差异性,生殖生长期果中表达量最高、叶中表达量最低。EmF3'H原核表达得到了约75 kDa的目的蛋白,并且在IPTG诱导4 h表达量最高。【结论】EmF3'H基因在不同生长期不同组织中均有表达,对斑地锦的黄酮类化合物生物合成具有重要的作用。 展开更多
关键词 斑地锦 类黄酮-3'-羟化酶 RT-QPCR 原核表达 槲皮素
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