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一株H1N1亚型猪流感病毒血凝素HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
被引量：
3
1
作者
石建州
李青梅
+5 位作者
刘肖
王彦红
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期300-304,共5页
为制备H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白中和性单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以纯化的H1N1 SIV全病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选出一株稳定分泌...
为制备H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白中和性单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以纯化的H1N1 SIV全病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选出一株稳定分泌抗H1N1 SIV HA蛋白的MAb杂交瘤细胞株(10H8)。MAb亚类鉴定结果显示其亚类为IgG2a。MAb 10H8细胞上清和腹水的IPMA效价分别为11024和151200,腹水血凝抑制(HI)效价为13log2。Western blot试验结果显示MAb 10H8能够特异性地结合HA蛋白。病毒中和试验结果显示MAb 10H8杂交瘤细胞培养上清原液和1640稀释的腹水均能够抑制H1N1亚型SIV感染细胞,对SIV具有较强的中和活性。HA蛋白合成多肽的dot-blot鉴定结果显示,MAb 10H8识别的线性抗原表位为295KCQTPHGALKGNLPFQ310。本研究为H1N1亚型SIV诊断试剂和新型疫苗研发奠定了基础。
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关键词
H1N1亚型猪流感病毒
血凝素
单克隆抗体
中和抗原表位
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职称材料
H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
石建州
李青梅
+5 位作者
王彦红
刘肖
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第9期2691-2698,共8页
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个...
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10 2.63 TCID 50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H 2O 2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。
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关键词
H1N1亚型猪流感病毒
免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)
单克隆抗体
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职称材料
流感诊断方法研究进展
被引量：
1
3
作者
石建州
李青梅
+3 位作者
郭军庆
邢广旭
邓瑞广
张改平
《动物医学进展》
北大核心
2020年第6期91-96,共6页
流感病毒具高传染性、高变异性,长期以来持续跨界传播,严重威胁着公共卫生安全并导致巨大经济损失,准确检测和早期诊断是有效防控流感的关键。传统的诊断方法包括病毒分离、血凝/血凝抑制、琼脂扩散、酶联免疫吸附试验和免疫荧光技术等...
流感病毒具高传染性、高变异性,长期以来持续跨界传播,严重威胁着公共卫生安全并导致巨大经济损失,准确检测和早期诊断是有效防控流感的关键。传统的诊断方法包括病毒分离、血凝/血凝抑制、琼脂扩散、酶联免疫吸附试验和免疫荧光技术等,为改善传统诊断方法的局限性,目前,基于核酸、免疫学、生物传感器、生物芯片的新兴诊断方法正在发展。论文综述了流感新兴诊断方法的研究进展,为流感诊断相关研究提供参考。
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关键词
流感
诊断方法
生物传感器
生物芯片
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职称材料
题名
一株H1N1亚型猪流感病毒血凝素HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
被引量：
3
1
作者
石建州
李青梅
刘肖
王彦红
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
机构
河南省农业科学院
动物
免疫学重点实验室
河南农业
大学
南阳师范学院
扬州大学江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期300-304,共5页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0500701)
文摘
为制备H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白中和性单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以纯化的H1N1 SIV全病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选出一株稳定分泌抗H1N1 SIV HA蛋白的MAb杂交瘤细胞株(10H8)。MAb亚类鉴定结果显示其亚类为IgG2a。MAb 10H8细胞上清和腹水的IPMA效价分别为11024和151200,腹水血凝抑制(HI)效价为13log2。Western blot试验结果显示MAb 10H8能够特异性地结合HA蛋白。病毒中和试验结果显示MAb 10H8杂交瘤细胞培养上清原液和1640稀释的腹水均能够抑制H1N1亚型SIV感染细胞,对SIV具有较强的中和活性。HA蛋白合成多肽的dot-blot鉴定结果显示,MAb 10H8识别的线性抗原表位为295KCQTPHGALKGNLPFQ310。本研究为H1N1亚型SIV诊断试剂和新型疫苗研发奠定了基础。
关键词
H1N1亚型猪流感病毒
血凝素
单克隆抗体
中和抗原表位
Keywords
H1N1 swine influenza virus
hemagglutinin
monoclonal antibodies
neutralizing antigen epitope
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立
被引量：
4
2
作者
石建州
李青梅
王彦红
刘肖
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
机构
河南省农业科学院
动物
免疫学重点实验室
河南农业
大学
南阳师范学院
扬州大学
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第9期2691-2698,共8页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0500701)
文摘
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10 2.63 TCID 50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H 2O 2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。
关键词
H1N1亚型猪流感病毒
免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)
单克隆抗体
Keywords
H1N1 subtype swine influenza virus
immunoperoxidase monolayer assay(IPMA)
monoclonal antibody
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
流感诊断方法研究进展
被引量：
1
3
作者
石建州
李青梅
郭军庆
邢广旭
邓瑞广
张改平
机构
河南省农业科学院
动物
免疫学重点实验室
河南农业
大学
南阳师范学院
扬州大学江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《动物医学进展》
北大核心
2020年第6期91-96,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0500701)。
文摘
流感病毒具高传染性、高变异性,长期以来持续跨界传播,严重威胁着公共卫生安全并导致巨大经济损失,准确检测和早期诊断是有效防控流感的关键。传统的诊断方法包括病毒分离、血凝/血凝抑制、琼脂扩散、酶联免疫吸附试验和免疫荧光技术等,为改善传统诊断方法的局限性,目前,基于核酸、免疫学、生物传感器、生物芯片的新兴诊断方法正在发展。论文综述了流感新兴诊断方法的研究进展,为流感诊断相关研究提供参考。
关键词
流感
诊断方法
生物传感器
生物芯片
Keywords
Influenza
diagnostic methods
biosensor
biological chip
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一株H1N1亚型猪流感病毒血凝素HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
石建州
李青梅
刘肖
王彦红
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立
石建州
李青梅
王彦红
刘肖
李鸽
郭军庆
邓瑞广
张改平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
流感诊断方法研究进展
石建州
李青梅
郭军庆
邢广旭
邓瑞广
张改平
《动物医学进展》
北大核心
2020
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