表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价 被引量：1

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作者 虞凌雪 姜一峰 +11 位作者 杨莘 于海 周艳君 童武 高飞 李国新 刘长龙 郑浩 单同领 李丽薇 孔宁 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期106-112,共7页

为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗... 为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 rPRRSV-GM-CSF 免疫记忆细胞T淋巴细胞 杀伤性T淋巴细胞

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AIFM1分子与猪伪狂犬病病毒UL16蛋白互作抑制病毒的增殖机制研究

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作者 徐晶晶 高飞 +7 位作者 武吉强 程雪飞 刘宇婷 傅欣玲 郑浩 童武 童光志 李国新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期9-17,共9页

凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AI... 凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AIFM1能抑制PRV的增殖,且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明,PRV感染细胞时,AIFM1从线粒体易位至细胞核,且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究,部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用,为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 独特长区16蛋白 凋亡诱导因子1

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新型冠状病毒E蛋白B细胞表位的预测及鉴定 被引量：1

3

作者 张鹏飞 刘钧 +5 位作者 邹紫阳 康喜龙 宋丽 焦新安 孟闯 潘志明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期807-813,共7页

目的利用生物信息学方法预测SARS-CoV-2 E蛋白B细胞表位,并利用小鼠多抗血清、人新型冠状病毒阳性血清等进行验证,以明确SARS-CoV-2 E蛋白的优势B细胞表位。方法使用SOPMA、Expasy、SWISS-MODEL及IEDB数据库和BepiPred-2.0等软件预测SAR... 目的利用生物信息学方法预测SARS-CoV-2 E蛋白B细胞表位,并利用小鼠多抗血清、人新型冠状病毒阳性血清等进行验证,以明确SARS-CoV-2 E蛋白的优势B细胞表位。方法使用SOPMA、Expasy、SWISS-MODEL及IEDB数据库和BepiPred-2.0等软件预测SARS-CoV-2 E蛋白的结构及B细胞表位;通过大肠杆菌系统表达并纯化GST标签重组表位蛋白片段,以Western blotting和间接ELISA方法检测表位蛋白与小鼠和人SARS-CoV-2 E蛋白阳性多抗血清的反应性,以初步鉴定SARS-CoV-2 E蛋白的B细胞表位。结果表位预测结果显示,E蛋白含有线性B细胞表位Ser6-Val14和Tyr57-Pro71,构象表位涉及的氨基酸序列为Glu8-Val14、Leu39-Tyr59、Ser60-Leu65;表达并纯化含有预测表位的E蛋白片段E1(Ser6-Val14表位)、E3(Tyr57-Pro71)以及阴性对照片段E2(不含表位序列),Western blotting和间接ELISA结果均显示抗E蛋白小鼠多抗和人新型冠状病毒阳性血清只与E1、E3蛋白片段呈阳性反应而与E2蛋白片段均为阴性反应,显示E蛋白线性B细胞表位预测正确。结论本研究成功预测并初步鉴定出SARS-CoV-2 E蛋白2个线性B细胞表位,为新型冠状病毒疫苗制备和免疫应答特性分析等提供参考。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 B细胞表位 线性表位 预测 鉴定

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非洲猪瘟病毒pE248R蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1

4

作者 杜楠楠 陈金霞 +6 位作者 曹云雷 张宽 童武 李丽薇 赵冉 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期188-194,共7页

本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747 bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L的IPTG诱导1 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32... 本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747 bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L的IPTG诱导1 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32 kDa,利用纯化后得到pE248R重组蛋白作为免疫原经过4次免疫后制备鼠源抗pE248R多克隆抗体。利用该多克隆抗体检测实验室构建并拯救的已证明能够稳定表达ASFV pE248R蛋白的重组病毒rPRRSV-E248R,结果显示制备的抗pE248R的多克隆抗体能够与rPRRSV-E248R发生特异性结合反应,证明利用本试验中原核表达的pE248R蛋白制备的多克隆抗体具有抗pE248R蛋白的特异性,为进一步针对ASFV E248R基因建立快速,特异性的血清学检测方法奠定了基础,也为针对pE248R蛋白的功能性研究提供了研究基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 E248R基因 pE248R蛋白 多克隆抗体

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敲低多房棘球蚴let-7-5p可抑制BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长 被引量：1

5

作者 王立群 吴易璇 +8 位作者 蒲桂婷 曹珊菱 王得先 刘婷丽 李红 AMUDA Tharheer Oluwashola 郭小腊 殷宏 骆学农 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2619-2628,共10页

旨在明确敲低多房棘球蚴emu-let-7-5p对小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长的影响。构建表达多房棘球蚴emu-let-7-5p海绵序列的重组腺相关病毒载体,并在293T细胞上验证其抑制效果和特异性。70只清洁级BALB/c小鼠分别经尾静脉注射AAV8-si-le... 旨在明确敲低多房棘球蚴emu-let-7-5p对小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长的影响。构建表达多房棘球蚴emu-let-7-5p海绵序列的重组腺相关病毒载体,并在293T细胞上验证其抑制效果和特异性。70只清洁级BALB/c小鼠分别经尾静脉注射AAV8-si-let-7-5p、AAV8-control和PBS后两周,每组随机选取2只小鼠分别用Western blot和qRT-PCR分析肝组织中GFP、let-7-5p及其靶基因C/EBP δ的表达。随后,所有小鼠每只腹腔接种1 000个原头蚴,3个月后qRT-PCR检测腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p、C/EBP δ、M1型(IL-1β、iNOS和IL-6)和M2型(Arg-1、IL-4和IL-10)相关分子的转录水平,并统计各组小鼠多房棘球蚴的包囊重量和原头蚴数量。结果表明,注射后第15天,AAV8-si-let-7-5p成功靶向小鼠肝脏,并引起emu-let-7-5p的敲低和C/EBP δ的上调表达。感染后3个月,AAV8-si-let-7-5p组小鼠腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p和M2型相关分子Arg-1均显著下调,而C/EBP δ和M1型相关分子IL-1β和iNOS均显著上调。此外,AAV8-si-let-7-5p组IL-4和IL-6下调表达,而IL-10上调表达,且小鼠肝脏包囊重量和原头蚴数量显著低于对照组。敲低多房棘球蚴感染小鼠体内emu-let-7-5p,可促进C/EBP δ的表达,进而抑制M2型极化和虫体生长。 展开更多

关键词 多房棘球蚴 emu-let-7-5p 腹腔巨噬细胞极化 虫体生长

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非洲猪瘟病毒F334L基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

6

作者 刘佳晨 李丽薇 +7 位作者 郭子强 陈金霞 曹云雷 乔思娜 刘长龙 赵冉 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期173-178,共6页

本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱... 本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱导原核表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,F334L基因得到了良好的表达,将所得的F334L基因编码蛋白纯化后免疫小鼠,获得含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV F334L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV-F334L,试验结果显示该多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,证明了ASFV F334L基因可在PRRSV活载体中稳定表达,为ASFV活载体疫苗的研发提供了材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 病毒活载体 F334L基因 重组病毒

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结核病γ干扰素释放试验刺激抗原研究进展 被引量：1

7

作者 高妍 万珈旭 +3 位作者 樊昌林 陈祥 徐正中 焦新安 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期88-94,共7页

结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结... 结核分支杆菌复合群引起的人和动物结核病,对人类健康及畜牧业发展造成了严重的威胁,早期诊断对于结核病的防控至关重要。在结核病众多诊断方法中,免疫学诊断方法中γ干扰素释放试验具有很好的应用前景。γ干扰素释放试验刺激抗原以结核菌素(purified protein derivative,PPD)为主,然而PPD抗原成分复杂,诊断特异性和敏感性有待提高,因此寻找可以代替PPD的特异性刺激抗原成为了研究热点。论文系统综述了近年来报道用于γ干扰素释放试验的刺激抗原,重点概述了刺激抗原的免疫特性、刺激效果以及各类刺激抗原的优势、局限性和应用前景,以期为人和动物结核病的诊断及防控提供参考。 展开更多

关键词 结核病 免疫学诊断 Γ干扰素释放试验 刺激抗原

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沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备 被引量：2

8

作者 孟闯 高杨 +5 位作者 刘钧 徐双媛 丁睿清 康喜龙 潘志明 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期287-294,共8页

为制备针对沙门菌Pho N蛋白的单克隆抗体(MAb),并以其制备沙门菌的免疫磁珠,本研究构建了重组原核表达质粒p Cold I-pho N和p GEX-6P-1-pho N,利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-Pho N和GST-Pho N,分别... 为制备针对沙门菌Pho N蛋白的单克隆抗体(MAb),并以其制备沙门菌的免疫磁珠,本研究构建了重组原核表达质粒p Cold I-pho N和p GEX-6P-1-pho N,利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-Pho N和GST-Pho N,分别作为免疫原和筛选抗原,利用B淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选获得5株能稳定分泌Pho N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别为8H2、11E5、4B2、8F2、3B2。采用亚类鉴定试剂盒、间接ELISA和western blot方法分别鉴定各MAb的亚型、效价及特异性结合沙门菌Pho N蛋白的能力,结果显示,5株MAb的亚型均为Ig G2a,测定其效价达1∶4096000以上,均能特异性结合His-PhoN和GST-Pho N,而不与His-OmpC、His-OmpF蛋白反应,表明MAb特异性较好。选取4B2 MAb进一步分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的特异性,western blot结果显示4B2 MAb仅特异性识别不同血清型沙门菌,而不与大肠杆菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌反应;以全菌作为包被抗原的间接ELISA检测结果也显示4B2 MAb可特异性结合沙门菌。将4B2 MAb偶联Fe3O4羧基磁性纳米微球制备免疫磁珠,通过菌落计数分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的捕获效率,结果显示该免疫磁珠对鼠伤寒等5种不同血清型沙门菌的捕获率达70%以上,对非沙门菌捕获率低于7%。本研究制备了可特异性识别不同血清型沙门菌的Pho N蛋白MAb及其免疫富集磁珠,为样品的快速预处理和沙门菌检测提供了重要生物材料。 展开更多

关键词 沙门菌 Pho N蛋白 单克隆抗体 特异性 免疫磁珠

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鼠源炎症因子流式蛋白定量试剂盒的优化及初步应用 被引量：2

9

作者 胡茂志 赵维芯 +4 位作者 康喜龙 顾杰 潘志明 崔桂友 焦新安 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期17-21,共5页

以小鼠炎症因子流式蛋白定量(cytometric bead array,CBA)检测试剂盒为参考,分别从降低试剂用量和缩短孵育时间两个方面进行优化,然后以沙门菌感染小鼠为模型,动态分析小鼠血清中炎症因子的分泌情况。结果表明,试剂用量由50μL降至20μ... 以小鼠炎症因子流式蛋白定量(cytometric bead array,CBA)检测试剂盒为参考,分别从降低试剂用量和缩短孵育时间两个方面进行优化,然后以沙门菌感染小鼠为模型,动态分析小鼠血清中炎症因子的分泌情况。结果表明,试剂用量由50μL降至20μL、孵育时间由2h缩短至30min仍然可以得到较好的检测效果。沙门菌感染小鼠后,利用该方法动态分析了小鼠血清中炎症因子的变化情况,并且发现炎症因子的早期分泌与沙门菌在小鼠体内的定殖呈正相关。通过CBA技术的优化和初步应用,为其推广应用提供了重要数据。 展开更多

关键词 流式蛋白定量技术 剂量 孵育时间 沙门菌 小鼠

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沙门菌CRISPR的结构与功能研究进展 被引量：5

10

作者 蔡银强 李求春 +3 位作者 陶静 蒋道军 潘志明 焦新安 《动物医学进展》 北大核心 2015年第2期97-100,共4页

近年发现沙门菌中恒定地存在两个CRISPR位点,沙门菌利用它们不仅能抵御外源质粒和噬菌体的入侵,还能介导自身短期的表型变化及长期亚类的进化。同时由于其结构的多样性,使之广泛应用于沙门菌分型和进化的研究。论文简要综述了沙门菌CRI... 近年发现沙门菌中恒定地存在两个CRISPR位点,沙门菌利用它们不仅能抵御外源质粒和噬菌体的入侵,还能介导自身短期的表型变化及长期亚类的进化。同时由于其结构的多样性,使之广泛应用于沙门菌分型和进化的研究。论文简要综述了沙门菌CRISPR系统的基本结构、作用机制和功能及其在沙门菌分型和进化应用方面的研究进展。 展开更多

关键词 沙门菌 规律成簇间隔的短回文重复序列 功能 分型

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猪流行性腹泻疫苗研究进展 被引量：17

11

作者 梁雨萱 庞胜美 +2 位作者 刘梅 王龙龙 段强德 《河南农业科学》 北大核心 2023年第8期1-10,共10页

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种猪急性、高度接触性的肠道传染病,由于其高发病率和高致死率,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是... 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种猪急性、高度接触性的肠道传染病,由于其高发病率和高致死率,给全球养猪业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是当前预防PED最经济和有效的措施,但由于PEDV变异株的不断出现,疫苗的免疫保护效果不佳。因此,急需研发更加安全、高效的疫苗来预防PED。综述了PEDV的病原学特性、致病机制以及PEDV疫苗研究的最新进展,并对PEDV新型高效疫苗的研究策略进行展望,以期为临床上有效防控PED提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 猪流行性腹泻病毒 疫苗 致病机制

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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞后差异表达膜蛋白的鉴定与分析 被引量：3

12

作者 张玉娇 高飞 +6 位作者 曲泽慧 姜一峰 周艳君 虞凌雪 李丽薇 赵款 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期1-8,共8页

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。目前,对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用1MOI的EGFP标记的HP-PRRSV毒株HuN4(rHuN4-EGFP)和其体外传代致弱毒株HuN4-F112(rHuN4-F112-EGFP)分别感染肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophage,PAM),24h后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV强弱毒感染的PAM,提取膜蛋白进行Shotgun质谱分析。试验最终获得82个在强弱毒感染PAM过程中存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节与细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现其中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein coverteases subtilism/kexin 9,PCSK9)能明显抑制PRRSV强毒株和弱毒株的复制,Clusterin、Apoliprotein C-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明利用Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后差异表达的膜蛋白变化将有利于进一步明确其致病机制。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 肺泡巨噬细胞 膜蛋白

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芡实提取物对克氏原螯虾生长、抗氧化能力及免疫功能的影响 被引量：8

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作者 闫戈 顾晨 +2 位作者 王承鑫 李世平 魏万红 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2022年第1期83-89,共7页

为探究芡实(Euryale ferox)提取物对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长免疫的影响,本实验按照饲喂饲料芡实提取物的添加浓度分为对照组(0 g/kg)、0.5%芡实组(5 g/kg)、1%芡实组(10 g/kg)和2%芡实组(20 g/kg),连续投喂克氏原螯虾28 d... 为探究芡实(Euryale ferox)提取物对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长免疫的影响,本实验按照饲喂饲料芡实提取物的添加浓度分为对照组(0 g/kg)、0.5%芡实组(5 g/kg)、1%芡实组(10 g/kg)和2%芡实组(20 g/kg),连续投喂克氏原螯虾28 d,实验结束后测定克氏原螯虾的生长参数和嗜水气单胞菌攻毒后的存活率,并分析了抗氧化酶活、免疫相关酶活和相关基因表达情况。结果显示:芡实提取物对克氏原螯虾的生长和嗜水气单胞菌攻毒后的存活率没有影响。与对照组相比,0.5%芡实饲喂显著增加了克氏原螯虾血清中的酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性,而1%和2%芡实血清中的ACP活性显著降低,2%芡实组克氏原螯虾血清中的SOD活性显著增加。在肝胰腺中,0.5%芡实组克氏原螯虾的ACP活性也显著增加,但其它酶活没有显著变化。荧光定量PCR的结果显示,2%芡实显著增加了克氏原螯虾CypA和GPxs mRNA的表达,而Astacidin mRNA的表达在各组之间均无显著差异。综上结果表明,芡实提取物能在一定程度上增强克氏原螯虾的抗氧化能力和免疫力,而不影响其生长。 展开更多

关键词 克氏原螯虾(Procambarus clarkii) 芡实(Euryale ferox) 药用植物 免疫增强剂

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非洲猪瘟病毒p72蛋白原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：2

14

作者 曹云雷 高飞 +5 位作者 李国新 姜一峰 郑浩 童武 黄剑 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期141-146,共6页

本研究旨在用原核生物表达系统来表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的B646L基因。获得其编码的p72重组蛋白,并针对纯化的p72重组蛋白制备多克隆抗体。将ASFV B646L全长基因连入pcold-Ⅰ表达载体,构建原核重组表达质粒,经1 mmol/L IPTG于16℃诱导1... 本研究旨在用原核生物表达系统来表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的B646L基因。获得其编码的p72重组蛋白,并针对纯化的p72重组蛋白制备多克隆抗体。将ASFV B646L全长基因连入pcold-Ⅰ表达载体,构建原核重组表达质粒,经1 mmol/L IPTG于16℃诱导16 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析。然后用纯化的p72重组蛋白为免疫原制备鼠源抗p72多克隆抗体,经过4次免疫后获得p72蛋白的多克隆抗体,随后采取血清来检测多克隆抗体。结果显示,利用p72蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步对ASFV B646L基因建立快速、特异的血清学诊断技术奠定基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 B646L基因 p72蛋白 多克隆抗体

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究 被引量：2

15

作者 陈金霞 张宽 +9 位作者 张玉娇 杜楠楠 郑海红 李丽薇 周艳君 虞凌雪 童武 郑浩 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期12-19,共8页

利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够... 利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3'非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 3'非翻译区 转录调控序列 外源基因表达

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针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1

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作者 徐双媛 刘钧 +7 位作者 曹李妍 丁睿清 尚月月 康喜龙 顾丹 焦新安 潘志明 孟闯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期20-27,共8页

目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后... 目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10^(7)以上,亲和力为4.44×10^(8)M^(-1);Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,而与MERS-CoV和HCoV-229E的N蛋白无交叉反应。结论成功获得可特异性识别细胞表达及体外制备的SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,具备特异性检测SARS-CoV-2的潜能,为下一步研究提供了重要生物材料。 展开更多

关键词 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白 原核表达 真核表达 单克隆抗体 特异性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒转录调控序列顺式作用元件的鉴定及其在基因转录表达中的机制解析 被引量：1

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作者 张宽 陈金霞 +9 位作者 张玉娇 杜楠楠 郑浩 姜一峰 李丽薇 虞凌雪 周艳君 童武 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期13-21,共9页

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的转录调控序列(TRS)在sg mRNA的合成中起着至关重要的作用。为了深入了解TRS在病毒亚基因组转录和翻译过程中的作用,本研究通过对高致病性PRRSV细胞传代致弱株HuN4-F112的转录调控序列进行鉴定,并构... 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的转录调控序列(TRS)在sg mRNA的合成中起着至关重要的作用。为了深入了解TRS在病毒亚基因组转录和翻译过程中的作用,本研究通过对高致病性PRRSV细胞传代致弱株HuN4-F112的转录调控序列进行鉴定,并构建了一系列针对TRS6突变以及将TRS6替换为其他Body TRS的全长感染性克隆。结果表明,同时突变TRS6核心寡核苷酸3'端两个碱基或同时缺失5'端和3'端侧翼序列的全长突变体克隆均不能拯救出病毒,而单独缺失TRS65'端或3'端侧翼序列的全长突变体克隆可以拯救出病毒,但侧翼序列缺失后拯救出的病毒相较于原始亲本病毒的滴度有所下降;将HuN4-F112-EGFP的TRS6替换为TRS2、3、7均可以拯救出病毒,并有相似的生长特性,但含有TRS2的重组病毒滴度相对较低,而将TRS6替换为TRS4或TRS5后,无法拯救出病毒。本研究鉴定了HuN4-F112的一系列Body TRS在基因组中的相对位置,同时也证明了ORF1b和ORF2a基因区中4种不同的Body TRS都可以引导基因稳定高效的表达,该研究为今后以PRRSV疫苗株为活病毒载体进行多价重组疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 转录调控序列 非连续性转录

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猪骨髓源巨噬细胞的分离和培养 被引量：1

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作者 江珊 虞凌雪 +10 位作者 于海 姜一峰 李国新 刘长龙 周艳君 高飞 赵款 张玉娇 曹云雷 白渊哲 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第4期93-98,共6页

为深入研究猪骨髓源巨噬细胞的生物学功能,本研究建立了有效的猪骨髓源巨噬细胞分离、培养的方法。从15日龄健康仔猪体内无菌取出股骨和胫骨,用含10%灭活FBS的RPMI 1640培养基冲洗并收集骨髓细胞悬液,再将红细胞裂解以获取猪骨髓干细胞(... 为深入研究猪骨髓源巨噬细胞的生物学功能,本研究建立了有效的猪骨髓源巨噬细胞分离、培养的方法。从15日龄健康仔猪体内无菌取出股骨和胫骨,用含10%灭活FBS的RPMI 1640培养基冲洗并收集骨髓细胞悬液,再将红细胞裂解以获取猪骨髓干细胞(BMHC)。BMHC在含M-CSF 100 ng/mL的RPMI 1640培养液的诱导条件下进行体外贴壁培养,6~7 d时获得纯度较高的M0型骨髓源巨噬细胞(BMDM),再辅以LPS和IFN-γ共刺激,以及IL-4刺激M0型骨髓源巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用倒置显微镜观察显示,与未刺激分化的巨噬细胞相比,分化后巨噬细胞更大,状态更平整且颗粒状更明显,相较于M1型,M2型巨噬细胞形成更多伪足及小触角。通过流式细胞术研究巨噬细胞生物学功能显示,活化后的M0型、M1型和M2型巨噬细胞亚群都具有吞噬作用,并且活化后的巨噬细胞都能检测到细胞内活性氧(ROS)的变化。由以上实验结果显示,本研究建立了体外骨髓源巨噬细胞的培养方法,并成功进行了M0型骨髓源巨噬细胞向M1、M2亚群的体外分化。 展开更多

关键词 骨髓源巨噬细胞 分离 培养

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鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制 被引量：1

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作者 史静柯 王鹏 +9 位作者 霍臣智 宋昊 杨海蓉 朱韩钰 许文琳 袁慧莎 叶建强 钱琨 秦爱建 邵红霞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第3期55-60,共6页

本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细... 本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102400与1:12800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3.本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础. 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 VP3蛋白 原核表达 单克隆抗体

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仔猪产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展 被引量：5

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作者 吕林芬 庞胜美 +2 位作者 李保良 梁雨萱 段强德 《河南农业科学》 北大核心 2023年第5期1-8,共8页

仔猪腹泻仍然是困扰世界养猪业的重要疾病之一,产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的重要病原菌。在饲料中添加抗生素、喂服特异性抗体、膳食调节、利用遗传育种选育等多种方法被用来预防和治疗ETEC引起的感染。相比其他预防措施,疫... 仔猪腹泻仍然是困扰世界养猪业的重要疾病之一,产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的重要病原菌。在饲料中添加抗生素、喂服特异性抗体、膳食调节、利用遗传育种选育等多种方法被用来预防和治疗ETEC引起的感染。相比其他预防措施,疫苗接种是防制ETEC引起仔猪腹泻的最经济和最有效的手段。就目前猪用ETEC疫苗的最新研究进展进行综述,并分析了ETEC疫苗研究中面临的挑战,提出了高效疫苗的研究策略,旨在为ETEC新型、安全、高效和广谱疫苗的研发提供依据。 展开更多

关键词 仔猪 产肠毒素大肠杆菌 腹泻 疫苗

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