基于马立克病病毒Meq蛋白单克隆抗体的免疫组化诊断方法的建立

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作者 王润锦 孙英杰 +5 位作者 石彬 吴少鹏 邵红霞 钱琨 叶建强 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2024年第1期70-76,共7页

为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异... 为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异性单克隆抗体,分别命名为MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10;Western blot结果证明这些单克隆抗体不仅能与体外表达的Meq蛋白反应,而且能识别MD肿瘤细胞系MSB-1中的Meq蛋白和MD肿瘤组织细胞中的Meq蛋白;以Meq蛋白单克隆抗体成功建立免疫组化诊断MD的方法,该方法特异性强,结果稳定,易观察判定。研究表明,试验制备了4株Meq蛋白单克隆抗体(MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10),基于此建立的免疫组化MD诊断方法为临床MD鉴别诊断提供技术支撑。 展开更多

关键词 马立克病 Meq蛋白 单克隆抗体 免疫组化 诊断

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禽源糖原合成激酶蛋白单克隆抗体的制备及应用

2

作者 翁贝 崔洲昊 +2 位作者 邵红霞 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期81-88,共8页

为制备针对家禽糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的单克隆抗体以及了解不同细胞中GSK-3β蛋白的基础表达量,试验利用原核表达纯化的GSK-3β蛋白免疫BALB/c小鼠,真核表达GSK-3β蛋白间接免疫荧光筛选杂交瘤阳性细胞,并利用单克隆抗体检测不同... 为制备针对家禽糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的单克隆抗体以及了解不同细胞中GSK-3β蛋白的基础表达量,试验利用原核表达纯化的GSK-3β蛋白免疫BALB/c小鼠,真核表达GSK-3β蛋白间接免疫荧光筛选杂交瘤阳性细胞,并利用单克隆抗体检测不同禽源细胞(LMH细胞、DF-1细胞、CEF细胞)中GSK-3β蛋白表达情况。结果显示:共获得3株单克隆抗体细胞株,分别命名为4C1、5B11和8G9,其中4C1和5B11仅能结合禽源细胞中的GSK-3β,而8G9和禽源以及人源的GSK-3β都能反应;单克隆抗体4C1介导的Western bolt显示在LMH细胞中GSK-3β蛋白丰度相对最高,而RT-qPCR显示其中LMH细胞中GSK-3β基因转录水平较低。研究成功制备了禽源GSK-3β的单克隆抗体,为深入研究家禽GSK-3β的生物学功能提供良好的生物材料。 展开更多

关键词 禽 GSK-3Β 原核表达 单克隆抗体 应用

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禽白血病病毒衣壳蛋白单克隆抗体研制及其双夹心ELISA的建立 被引量：7

3

作者 尹丽萍 秦爱建 +6 位作者 钱琨 邵红霞 金文杰 史荣华 梁有志 杭柏林 孙薇薇 《中国家禽》 北大核心 2013年第3期15-19,共5页

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤... 为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为5D3、4F12、5B10、1C5和3C6,亚类鉴定3C6为IgG2b,其余为IgG1。通过IFA、Western-blot及竞争抑制ELISA,表明该5株单抗与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应,而与其他常见禽源病毒无交叉反应。利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法,经663份临床样本验证,该方法与商品化试剂盒的符合率达到95.17%,证明所研制的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 P27 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA

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禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用 被引量：6

4

作者 梁有志 尹丽萍 +4 位作者 杭柏林 钱琨 金文杰 邵红霞 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2012年第14期15-19,共5页

禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸... 禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。 展开更多

关键词 禽白血病 病毒抗原 检测 试纸条

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禽白血病病毒衣壳蛋白p27基因绝对定量PCR方法的建立及应用 被引量：9

5

作者 胡海 钱琨 +5 位作者 张丹阳 石亚运 张杰 邵红霞 金文杰 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2015年第20期16-20,共5页

研究旨在建立一种检测禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p27(ALV-p27)基因实时荧光定量PCR的方法。通过设计ALV-p27特异性的荧光定量PCR引物扩增基因并制备质粒标准品,同时建立检测病毒衣壳蛋白p27基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法检测... 研究旨在建立一种检测禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p27(ALV-p27)基因实时荧光定量PCR的方法。通过设计ALV-p27特异性的荧光定量PCR引物扩增基因并制备质粒标准品,同时建立检测病毒衣壳蛋白p27基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法检测6日龄胚胎感染,1日龄出壳雏鸡不同组织中p27基因的分布和表达情况。结果表明,ALV-p27基因在1日龄雏鸡脑组织中表达水平最高,而在胸腺组织中表达水平最低。研究建立的检测ALV-p27基因绝对定量PCR方法为进一步研究其生物学功能提供了一种技术手段。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 P27基因 荧光定量PCR

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禽内源性反转录病毒ALVE1LTR转录水平分析 被引量：4

6

作者 胡序明 朱文奇 +7 位作者 陈世豪 刘洋洋 孙振 耿拓宇 宋成义 高波 秦爱建 崔恒宓 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期27-31,共5页

本研究以禽内源性反转录病毒ALVE1为研究对象,分析了ALVE1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)自身转录的变化规律。荧光定量PCR结果显示LTR在2日龄SPF鸡(发育早期)器官组织中转录水平高,而在35日龄SPF鸡(发育晚期)器官组织中转... 本研究以禽内源性反转录病毒ALVE1为研究对象,分析了ALVE1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)自身转录的变化规律。荧光定量PCR结果显示LTR在2日龄SPF鸡(发育早期)器官组织中转录水平高,而在35日龄SPF鸡(发育晚期)器官组织中转录水平低。焦磷酸测序和荧光定量PCR关联分析发现,ALVE1 LTR在鸡巨噬细胞系HD11和鸡T淋巴细胞系MSB1细胞中的转录水平可能受DNA甲基化调控,去甲基化处理HD11或MSB1 24 h后,LTR转录水平显著增加。通过序列分析发现ALVE1 LTR高度保守且存在先天性免疫应答激活转录因子如NF-AT、c-JUN等。本研究揭示了ALVE1 LTR自身转录的变化规律,为进一步分析ALVE1 LTR功能奠定了基础。 展开更多

关键词 禽内源性反转录病毒 长末端重复序列 DNA甲基化 表观遗传学

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PEG-it^(TM)纯化浓缩J亚群禽白血病病毒效果的鉴定 被引量：1

7

作者 程晓薇 孔正茹 +4 位作者 顾晨曦 武宗仪 邵红霞 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2017年第3期21-25,共5页

为建立一种不利用超速离心法纯化浓缩J亚群禽白血病病毒(ALV-J)简便、易行的方法,利用PEG-it^(TM)病毒浓缩试剂与病毒培养细胞上清按比例混合,4℃低速离心,最后用无菌的预冷PBS进行重悬,取100μL病毒液进行TCID50的测定,同时利用电镜负... 为建立一种不利用超速离心法纯化浓缩J亚群禽白血病病毒(ALV-J)简便、易行的方法,利用PEG-it^(TM)病毒浓缩试剂与病毒培养细胞上清按比例混合,4℃低速离心,最后用无菌的预冷PBS进行重悬,取100μL病毒液进行TCID50的测定,同时利用电镜负染、SDS-PAGE银染及Western blot的方法对浓缩纯化后的病毒进行鉴定。结果表明:经过PEG-it^(TM)浓缩纯化病毒滴度提高10~100倍,滴度可达到1×10~7TCID50/m L;透射电镜负染观察结果表明,病毒粒子呈卵圆形,直径80~120 nm,并清晰可见囊膜上均匀密布的纤突;Western blot和银染结果显示,经过PEG-it^(TM)浓缩纯化的病毒杂蛋白明显减少,且具有良好的抗原性,能够被鸡多抗血清识别。提示在没有超高速离心机的情况下,可以使用PEG-it^(TM)纯化浓缩ALV-J,该方法使用方便,能满足大多数试验的需求。 展开更多

关键词 PEG-it^TM病毒浓缩试剂 ALV-J 浓缩纯化 鉴定

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鸡源DJ-1蛋白的原核表达及多抗血清的制备

8

作者 范忠军 郁川 +3 位作者 孙薇薇 杭柏林 钱锟 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2012年第11期32-35,共4页

为了进一步研究DJ-1蛋白在J亚群禽白血病病毒感染中的生物学作用,本研究从DF-1细胞的cDNA中扩增DJ-1基因编码区,并克隆入pET-32a载体进行原核表达。结果表明:表达的重组蛋白以可溶性形式存在,最佳表达条件为IPTG终浓度为0.4mmol/L,37℃... 为了进一步研究DJ-1蛋白在J亚群禽白血病病毒感染中的生物学作用,本研究从DF-1细胞的cDNA中扩增DJ-1基因编码区,并克隆入pET-32a载体进行原核表达。结果表明:表达的重组蛋白以可溶性形式存在,最佳表达条件为IPTG终浓度为0.4mmol/L,37℃诱导3h;ELISA和Western结果证明融合蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的多抗血清具有良好的特异性和反应性。本试验中鸡源DJ-1蛋白及小鼠多抗血清的获得,为后期DJ-1蛋白功能性研究提供了实验材料。 展开更多

关键词 DJ-1蛋白 原核表达 多抗血清

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银杏外种皮多糖抑制J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞中的复制 被引量：7

9

作者 钱琨 孔正茹 +1 位作者 张杰 秦爱建 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第1期13-18,共6页

为研究银杏外种皮多糖抑制J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)复制的能力,在不同时间点加入银杏外种皮多糖处理DF-1细胞,利用q RT-PCR、免疫蛋白印迹以及病毒滴度检测等方法,观察银杏外种皮多糖对ALV-J复制的影... 为研究银杏外种皮多糖抑制J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)复制的能力,在不同时间点加入银杏外种皮多糖处理DF-1细胞,利用q RT-PCR、免疫蛋白印迹以及病毒滴度检测等方法,观察银杏外种皮多糖对ALV-J复制的影响,结果表明银杏外种皮多糖就能够显著地抑制病毒基因表达、蛋白合成以及病毒在细胞内的增殖,并且这种抑制作用具有时间和剂量依赖性。同时银杏外种皮多糖处理还明显抑制病毒感染细胞中的IL-1β、TNFα等细胞因子的表达。银杏外种皮多糖在DF-1细胞中具有抑制ALV-J复制的能力,具有作为抗ALV-J药物的潜力。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 银杏外种皮多糖 病毒复制 抑制

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江苏省某鸡场CAstV、CIAV和REV感染情况的调查及分析 被引量：5

10

作者 姜泊宇 褚珊珊 +3 位作者 武宗仪 程晓薇 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2017年第20期78-80,共3页

为研究鸡星状病毒(Chicken-origin astrovirus,CAst V)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV)和禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)在江苏某鸡场的流行和混合感染情况,采集该鸡场1日龄雏鸡... 为研究鸡星状病毒(Chicken-origin astrovirus,CAst V)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV)和禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)在江苏某鸡场的流行和混合感染情况,采集该鸡场1日龄雏鸡的脏器,应用PCR和RT-PCR检测CAst V、CIAV和REV的单独感染以及混合感染情况。结果显示:1日龄雏鸡CAst V、CIAV、REV单独检出率分别为45%、37.5%和0%,其中CAst V和CIAV双重感染率为25%。表明该鸡场CAst V阳性率较高,提示养禽企业需增强对该病毒的关注。 展开更多

关键词 CAstV CIAV REV 混合感染 鸡 江苏

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姜黄素抑制马立克氏病病毒在CEF细胞中的复制 被引量：7

11

作者 冯春 杨帆 +2 位作者 乔丹丹 秦爱建 钱琨 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第2期72-79,共8页

为探究姜黄素对马立克氏病病毒(MDV)在CEF细胞中复制的影响,在病毒感染的不同时间点加入姜黄素,通过real-time PCR、蛋白免疫印迹和病毒噬斑计数实验来检测姜黄素对病毒复制的影响。结果显示:姜黄素能够抑制MDV基因表达、蛋白合成以及... 为探究姜黄素对马立克氏病病毒(MDV)在CEF细胞中复制的影响,在病毒感染的不同时间点加入姜黄素,通过real-time PCR、蛋白免疫印迹和病毒噬斑计数实验来检测姜黄素对病毒复制的影响。结果显示:姜黄素能够抑制MDV基因表达、蛋白合成以及病毒的增殖,且抑制作用具有剂量和时间依赖性;姜黄素还能直接影响MDV的感染性;姜黄素明显影响MDV感染细胞中IL-1β、IL-6等细胞因子的表达。该研究结果表明,姜黄素能体外抑制MDV的复制和增殖,具有开发为抗MDV临床药物的潜力。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 姜黄素 病毒复制 抑制

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马立克氏病病毒RB1B株UL14蛋白原核表达及多抗血清制备 被引量：2

12

作者 徐文财 刘秋 +6 位作者 秦爱建 胡序明 吴庚华 孙苹 钱琨 邵红霞 金文杰 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期8-12,共5页

为研究UL14蛋白在马立克氏病病毒感染过程中的生物学作用,本文以RB1B毒株感染的鸡胚成纤维细胞基因组DNA为模板,经PCR扩增出UL14基因,然后克隆入pET32a载体,转化BL21(DE3)工程细菌且经IPTG诱导进行原核表达。结果显示,pET32a-UL14重组... 为研究UL14蛋白在马立克氏病病毒感染过程中的生物学作用,本文以RB1B毒株感染的鸡胚成纤维细胞基因组DNA为模板,经PCR扩增出UL14基因,然后克隆入pET32a载体,转化BL21(DE3)工程细菌且经IPTG诱导进行原核表达。结果显示,pET32a-UL14重组质粒在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白具有可溶性。IFA分析证实,用此融合蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的多抗血清能与MDV RB1B感染的CEF细胞发生特异性反应。本研究结果为UL14蛋白的生物学功能研究提供了条件。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 UL14蛋白 原核表达

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鸡星状病毒研究进展 被引量：6

13

作者 武宗仪 孔正茹 +1 位作者 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2018年第8期43-46,共4页

鸡星状病毒属于星状病毒科禽星状病毒属,目前尚未定种。鸡临床感染星状病毒后引发腹泻性肠炎、肾炎等症状,导致发育缓慢和生产力低下,对家禽养殖业造成了一定的损失。文章就近年来国内外对鸡星状病毒的研究进展进行综述,为鸡星状病毒的... 鸡星状病毒属于星状病毒科禽星状病毒属,目前尚未定种。鸡临床感染星状病毒后引发腹泻性肠炎、肾炎等症状,导致发育缓慢和生产力低下,对家禽养殖业造成了一定的损失。文章就近年来国内外对鸡星状病毒的研究进展进行综述,为鸡星状病毒的后期研究以及防控提供依据。 展开更多

关键词 鸡星状病毒 病原学 分离鉴定

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抗鸡β_2微球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量：1

14

作者 刘秋 郁川 +4 位作者 徐文才 史荣华 钱琨 金文杰 秦爱建 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期410-413,共4页

为制备抗鸡β2微球蛋白(β2-M)单克隆抗体(MAb),本研究以合成的多肽TF-29作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出特异性的抗鸡β2-M杂交瘤细胞株(3D1和6E7),亚类鉴定均为IgG1/κ链;间接ELISA测定3D1和6E7腹水效价分别为1∶25 60... 为制备抗鸡β2微球蛋白(β2-M)单克隆抗体(MAb),本研究以合成的多肽TF-29作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出特异性的抗鸡β2-M杂交瘤细胞株(3D1和6E7),亚类鉴定均为IgG1/κ链;间接ELISA测定3D1和6E7腹水效价分别为1∶25 600和1∶204 800。应用western blot和间接免疫荧光鉴定MAb的特异性显示,其不仅能够与原核表达产物也能够与真核细胞表达的β2-M特异性结合,还能够与禽类巨噬细胞系HD11中天然的β2-M特异性反应。3D1和6E7也能够特异性识别正常鸡血清与血浆中游离的β2-M。以上结果表明,本研究应用多肽筛选出抗鸡β2-M MAb,其效价稳定并具有良好的特异性,为深入探索鸡β2-M在免疫学中的功能提供实验依据。 展开更多

关键词 鸡β2微球蛋白 多肽 单克隆抗体

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鸡源性高迁移率族蛋白B1多克隆抗体的制备及应用 被引量：1

15

作者 张娜 钱琨 +4 位作者 朱明月 高爱俊 邵红霞 金文杰 秦爱建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期284-288,共5页

目的制备针对鸡的高迁移率族蛋白B1(chHMGB1)特异性抗原亲和层析多克隆抗体,并进行初步应用。方法反转录PCR扩增chHMGB1的全长编码基因,通过序列比对分析筛选一段特异性的多肽序列,偶联载体后作为抗原免疫新西兰兔,采集血清,通过蛋白A... 目的制备针对鸡的高迁移率族蛋白B1(chHMGB1)特异性抗原亲和层析多克隆抗体,并进行初步应用。方法反转录PCR扩增chHMGB1的全长编码基因,通过序列比对分析筛选一段特异性的多肽序列,偶联载体后作为抗原免疫新西兰兔,采集血清,通过蛋白A柱及多肽偶联的Seprose4B柱得到亲和层析纯化的多克隆抗体;并利用Western blot法、间接免疫荧光染色、免疫组化方法进行鉴定。结果成功制备了抗chHMGB1特异性的多克隆抗体。各项实验结果表明该抗体能特异性的识别重组蛋白以及天然的chHMGB1蛋白。结论成功制备了鸡源性高迁移率族蛋白B1亲和层析多克隆抗体。 展开更多

关键词 鸡源性高迁移率族蛋白B1 亲和层析 多克隆抗体

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禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达 被引量：3

16

作者 何倩 沈逵 +1 位作者 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2021年第3期16-21,共6页

为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G... 为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27基因的重组慢病毒。将慢病毒上清感染293T和LMH细胞,检测细胞中p27基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示:重组质粒pLVX-p27构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×10^(4)TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高。研究表明:表达p27基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具。 展开更多

关键词 ALV P27 慢病毒载体构建 蛋白表达

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一株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及全基因组分析 被引量：1

17

作者 王鹏 史静柯 +4 位作者 袁慧莎 叶建强 钱琨 邵红霞 秦爱建 《中国家禽》 北大核心 2019年第5期57-60,共4页

试验对江苏常州某养殖场内发生的疑似CIAV感染病例通过PCR、病毒分离以及基因组测序等方法进行疾病诊断与病毒鉴定。结果显示:病料组织CIAV特异性PCR为阳性,接种MDCC-MSB1细胞分离到一株CIAV病毒,命名为CZC1602-CIAV。基因组序列测定发... 试验对江苏常州某养殖场内发生的疑似CIAV感染病例通过PCR、病毒分离以及基因组测序等方法进行疾病诊断与病毒鉴定。结果显示:病料组织CIAV特异性PCR为阳性,接种MDCC-MSB1细胞分离到一株CIAV病毒,命名为CZC1602-CIAV。基因组序列测定发现其基因组大小为2 298 bp。CZC1602-CIAV与NCBI上检索到的16个CIAV毒株全基因组序列比对分析发现,核苷酸的同源性在96%～99%之间。进化树分析表明,CZC1602-CIAV分离株与广州株(KU050680)和韩国株(JF507715)处于一个分支,而与美国的Alabama分离株亲缘关系较远。CZC1602-CIAV的分离鉴定及全基因组测定为进一步研究国内CIAV的分子流行及其致病性提供了基础材料。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 分离 鉴定 全基因组 序列分析

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禽白血病病毒衣壳蛋白表达载体的构建及应用 被引量：1

18

作者 孙舒 胡海 +2 位作者 程晓薇 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2017年第18期18-22,共5页

为利用分段表达载体鉴定禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白单克隆抗体识别区域,构建ALV衣壳蛋白p27全长及分段真核表达载体。将实验室保存的pGEX-6p-1-p27质粒双酶切亚克隆到pcDNA3.1真核表达载体中,构建pcDNA3.1-p27全长表达质粒。同时设计引... 为利用分段表达载体鉴定禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白单克隆抗体识别区域,构建ALV衣壳蛋白p27全长及分段真核表达载体。将实验室保存的pGEX-6p-1-p27质粒双酶切亚克隆到pcDNA3.1真核表达载体中,构建pcDNA3.1-p27全长表达质粒。同时设计引物,扩增p27基因1~480 bp的A片段以及241~720 bp的B片段,构建pcDNA3.1-p27A和pcDNA3.1-p27B分段表达载体,并在DF-1细胞中暂态表达,利用IFA和Western blot方法鉴定病毒衣壳蛋白单克隆抗体的识别区域。结果表明:重组质粒均能正确表达,并鉴定出两株单克隆抗体5D3和4F12的抗原识别区域均位于衣壳蛋白p27蛋白碳端161~240位氨基酸区域。研究成功构建并表达了ALV衣壳蛋白p27的全长和分段真核表达载体,并利用分段表达质粒鉴定了两株单克隆抗体的抗原识别区域,为深入研究衣壳蛋白p27的生物学功能提供了生物材料。 展开更多

关键词 衣壳蛋白p27 真核表达载体 单克隆抗体 抗原识别区域

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鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制 被引量：1

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作者 史静柯 王鹏 +9 位作者 霍臣智 宋昊 杨海蓉 朱韩钰 许文琳 袁慧莎 叶建强 钱琨 秦爱建 邵红霞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第3期55-60,共6页

本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细... 本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102400与1:12800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3.本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础. 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 VP3蛋白 原核表达 单克隆抗体

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鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其多抗血清制备 被引量：2

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作者 孙苹 陈倩 +4 位作者 胡序明 叶建强 邵红霞 钱琨 秦爱建 《中国兽药杂志》 2014年第10期1-5,共5页

为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背... 为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原(NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV)均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。 展开更多

关键词 产蛋下降综合症病毒 纯化 多抗血清

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