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体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
2
1
作者
孔桂美
张小荣
+3 位作者
刁亚利
吴克艳
刘秋云
卜平
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1098-1102,共5页
目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得...
目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础。
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关键词
人VEGF165
单克隆抗体
HUVEC
血管形成
细胞迁移
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题名
体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
2
1
作者
孔桂美
张小荣
刁亚利
吴克艳
刘秋云
卜平
机构
扬州大学
医学院
中医系中西医结合临床教研室
扬州大学
兽
医学院
农业部畜禽传染病学重点开放实验室
扬州大学医学院附属第二医院胸心外科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1098-1102,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30801497)
扬州大学研究生创新基金资助项目(2008)
文摘
目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础。
关键词
人VEGF165
单克隆抗体
HUVEC
血管形成
细胞迁移
Keywords
human VEGF165
monoclonal antibody
HUVEC
angiogenesis
cell migration
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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作者
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1
体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定
孔桂美
张小荣
刁亚利
吴克艳
刘秋云
卜平
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
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