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CRISPR /Cas9基因编辑技术在山羊和绵羊中的应用研究进展 被引量:3
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作者 宋绍征 陆睿 +4 位作者 张婷 何正义 吴赵曼秋 成勇 周鸣鸣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期62-68,共7页
CRISPR/Cas9系统是近年来新兴的一种基因编辑技术,可将特定DNA基因序列敲除、插入或定点突变,具有快捷、高效、精准、特异性高等特点,广泛地应用于遗传育种、生物医药和基因工程等研究领域。山羊和绵羊是重要的经济家畜动物和实验动物,... CRISPR/Cas9系统是近年来新兴的一种基因编辑技术,可将特定DNA基因序列敲除、插入或定点突变,具有快捷、高效、精准、特异性高等特点,广泛地应用于遗传育种、生物医药和基因工程等研究领域。山羊和绵羊是重要的经济家畜动物和实验动物,利用CRISPR/Cas9基因编辑系统对羊进行遗传修饰,将加速品种改良,提高动物生产性能,获得更加优质的农副产品。主要对CRISPR/Cas9基因编辑技术的概述、作用机理及在羊乳"人源化"改造、提高肉品质、改善毛纤维质量等方面的应用研究进展及发展前景作简要阐述,以期为相关科研人员提供参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因编辑 基因组 遗传 山羊 绵羊
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Cre/Loxp系统介导转基因山羊乳腺上皮细胞标记基因的删除
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作者 宋绍征 于康英 +5 位作者 陆睿 张婷 陈朝军 潘生强 成勇 周鸣鸣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期105-111,共7页
为了消除核移植转基因动物中标记基因潜在的生物安全风险,应用Cre/Loxp系统删除人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊乳腺上皮细胞的标记基因,并以此探索标记基因删除前后对功能基因乳腺特异性表达的影响。首先复苏hLF转基因山羊乳腺上皮细胞并纯... 为了消除核移植转基因动物中标记基因潜在的生物安全风险,应用Cre/Loxp系统删除人乳铁蛋白(hLF)转基因山羊乳腺上皮细胞的标记基因,并以此探索标记基因删除前后对功能基因乳腺特异性表达的影响。首先复苏hLF转基因山羊乳腺上皮细胞并纯化;然后电转染PBS185纯化质粒,培养10-14 d,胰蛋白酶消化细胞,通过自制口控式移卵针挑取单克隆细胞;最后PCR检测标记基因是否删除,催乳素诱导表达,ELISA和Western Blot检测功能蛋白hLF的表达情况。结果表明,共获得65株单克隆乳腺上皮细胞,挑取状态较好的18株用于PCR检测,有3株为删除标记基因的细胞株,删除效率达16.7%(3/18),且删除标记基因细胞株表达水平提高约8倍(2.85 g·L^-1/0.35 g·L^-1),蛋白条带大小与目标蛋白一致(80 kD)。结果表明Cre/Loxp系统能够有效的删除乳腺上皮细胞基因组上的标记基因,且删除后细胞株表达水平明显提高,成功建立一套转基因山羊乳腺上皮细胞标记基因删除的系统,为进一步扩大生产无标记基因的转基因山羊奠定基础。 展开更多
关键词 标记基因 Cre/Loxp HLF 乳腺上皮细胞 诱导
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NADPH氧化还原反应平台及其在AngⅡ介导ROS信号通路中的调节作用 被引量:12
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作者 陈丽云 吴艳青 +2 位作者 张正红 罗倩萍 王正朝 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期439-444,共6页
血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)最初的效应分子最早是在肾脏中发现的,新近的研究表明这一系统对哺乳动物所有组织和血管细胞都有作用,影响心脏、肾、血管和脑的功能,调节平滑肌细胞、内皮细胞、成纤维细胞、单核/巨... 血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)最初的效应分子最早是在肾脏中发现的,新近的研究表明这一系统对哺乳动物所有组织和血管细胞都有作用,影响心脏、肾、血管和脑的功能,调节平滑肌细胞、内皮细胞、成纤维细胞、单核/巨噬细胞及心肌细胞的各种效应。Ang Ⅱ同时也是激活NADPH氧化酶的最主要刺激因子。Ang Ⅱ通过与血管紧张素I型受体(AT1-R)结合,激活NADPH氧化酶,促进ROS的产生,使氧化应激增加,这是高脂血症、高血压、糖尿病和动脉粥样硬化的共同机制之一。本文结合本课题组近年来的研究成果,通过对NADPH氧化还原反应平台及其在Ang Ⅱ介导的ROS信号通路中的生理作用进行分析,阐明其作用的分子机制,从而有助于开发抑制Ang Ⅱ激活NADPH产生ROS的药物,对预防和治疗ROS所介导的疾病具有非常重要的意义。 展开更多
关键词 NADPH ROS 血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ受体
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磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/骨形态发生蛋白-15通路与哺乳动物卵巢卵泡发育 被引量:10
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作者 吴艳青 陈丽云 +1 位作者 张正红 王正朝 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期224-228,共5页
哺乳动物卵巢卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞共同组成的,其生长发育过程是一个高度协调的程序化过程,确保了正常卵母细胞成熟并使其具有受精能力。卵母细胞和颗粒细胞之间的旁分泌和自分泌功能在卵巢卵泡发育过程中具... 哺乳动物卵巢卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞共同组成的,其生长发育过程是一个高度协调的程序化过程,确保了正常卵母细胞成熟并使其具有受精能力。卵母细胞和颗粒细胞之间的旁分泌和自分泌功能在卵巢卵泡发育过程中具有重要作用,可以为卵泡的发育提供适宜的微环境。磷脂酰肌醇-3激酶/骨形态发生蛋白-15信号通路是其中一个重要的调控通路。骨形态发生蛋白-15是卵巢卵母细胞特异性分泌的信号分子,可以通过旁分泌作用调节卵巢卵泡的发育过程。本文主要概述磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在卵巢卵泡发育过程中的作用及骨形态发生蛋白-15作为蛋白激酶B/叉头转录因子家族-3a下游信号分子对这一过程的调控,有助于进一步理解卵巢卵泡发育的分子调控以及治疗不孕不育等卵巢疾病。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇-3激酶 蛋白激酶B 骨形态发生蛋白-15 卵泡 卵巢
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NADPH氧化酶与ROS信号区域化 被引量:8
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作者 陈丽云 张正红 王正朝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期137-143,共7页
最近有关活性氧物质(ROS)的研究取得了突飞猛进的进展,尤其是其作为第二信使介导了许多生理性与病理性细胞事件,包括细胞分化、过度生长、增殖及凋亡.为了避免ROS的毒性产生特异性的信号转导,ROS的产生与代谢必须被严格调控;其具体的调... 最近有关活性氧物质(ROS)的研究取得了突飞猛进的进展,尤其是其作为第二信使介导了许多生理性与病理性细胞事件,包括细胞分化、过度生长、增殖及凋亡.为了避免ROS的毒性产生特异性的信号转导,ROS的产生与代谢必须被严格调控;其具体的调控机制一直是人们关注的焦点.最近有关ROS区域化观点的提出解决了这一问题.NADPH是生成ROS的主要来源.研究发现,NADPH氧化酶及其衍生的ROS存在于机体的多种组织内,且在细胞中呈区域化分布,对细胞内信号的精确调控具有至关重要的作用.NADPH一方面通过小窝/脂筏组装成功能型复合物,从而产生ROS区域化;另一方面,NADPH通过其不同亚细胞定位亚基与各种靶蛋白之间的相互作用,产生ROS特异性.本文系统综述了NADPH衍生的ROS信号区域化,为进一步理解ROS信号在各种生理或病理过程的分子调控机制提供理论依据. 展开更多
关键词 NADPH氧化酶 活性氧物质(ROS) 区域化
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VEGF在家畜黄体早期发育过程中对血管生成的调控作用 被引量:7
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作者 罗倩萍 张正红 +3 位作者 陈佳洁 黄晓红 成勇 王正朝 《家畜生态学报》 2011年第6期124-128,共5页
对黄体时期VEGF依赖性血管生成的分子机制研究,将有助于我们开发新的策略用于治疗黄体相关的不孕症,以及改善动物的繁殖性能。论文对VEGF在家畜黄体血管生成过程中的调控作用进行综述,旨在为临床研究及畜牧生产提供理论依据及参考资料。
关键词 VEGF 黄体 血管生成
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