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鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达
1
作者
谢华杰
张海洁
+4 位作者
江礼捷
连俊伟
刘敏
闵天奇
王志强
《中国家禽》
北大核心
2018年第5期24-28,共5页
试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性...
试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ目的基因和真核表达载体pc DNA3.1(+),并将双酶切后的目的基因定向插入表达载体中。经酶切和测序正确后加入c-myc标签。单点突变构建pc DNA3.1(+)-myc/MC3R突变型,用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1(+)-myc/MC3R分别瞬时转染入HEK293T细胞中,流式细胞仪检测野生型和突变型的细胞表面表达和胞内总表达。结果表明,成功构建了鸡MC3R基因野生型和四个突变型(M54L、G104S、L151R和S183S)的真核表达载体,突变型与野生型在HEK293T细胞中的表面表达和胞内总表达没有显著性差异,研究结果为进一步研究c MC3R功能奠定基础。
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关键词
鸡
黑素皮质素受体(MC3R)
真核表达
细胞表面表达
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职称材料
题名
鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达
1
作者
谢华杰
张海洁
江礼捷
连俊伟
刘敏
闵天奇
王志强
机构
扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室
江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《中国家禽》
北大核心
2018年第5期24-28,共5页
基金
江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)
文摘
试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ目的基因和真核表达载体pc DNA3.1(+),并将双酶切后的目的基因定向插入表达载体中。经酶切和测序正确后加入c-myc标签。单点突变构建pc DNA3.1(+)-myc/MC3R突变型,用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1(+)-myc/MC3R分别瞬时转染入HEK293T细胞中,流式细胞仪检测野生型和突变型的细胞表面表达和胞内总表达。结果表明,成功构建了鸡MC3R基因野生型和四个突变型(M54L、G104S、L151R和S183S)的真核表达载体,突变型与野生型在HEK293T细胞中的表面表达和胞内总表达没有显著性差异,研究结果为进一步研究c MC3R功能奠定基础。
关键词
鸡
黑素皮质素受体(MC3R)
真核表达
细胞表面表达
Keywords
chicken
melanocortin receptor-3 receptor
eukaryotic expression
cell surface expression
分类号
S831.1 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达
谢华杰
张海洁
江礼捷
连俊伟
刘敏
闵天奇
王志强
《中国家禽》
北大核心
2018
0
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