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题名GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析
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作者
宋绍征
李丹
何正义
张婷
成勇
周鸣鸣
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机构
无锡太湖学院健康与护理学院基础医学系
赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心
扬州大学兽医学院//江苏省转基因动物制药工程研究中心
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出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期1649-1656,共8页
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基金
江苏省高校自然科学基金(19KJB180030)
江苏省高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师项目(苏教师函[2021]11号)
+1 种基金
江西省卫生健康委员会科技计划项目(202130627)
赣南医学院第一附属医院博士启动资金(QD066)。
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文摘
目的旨在获得GH/tPA双转基因小鼠,并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的表达水平和个体生长发育状况。方法利用2只tPA单转基因雄性小鼠(P03、P05)与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配,受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠,PCR检测基因整合情况,ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平,监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果P03系小鼠共获得286枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔77只,经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠(7♂,9♀),13只GH/tPA双转基因小鼠(8♂,5♀),双基因整合率为16.9%;P05系小鼠共获得175枚受精卵,移植受体母鼠后,顺利产仔34只,经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠(5♂,7♀),7只GH/tPA双转基因小鼠(3♂,4♀),双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5μg/mL、674μg/mL,GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因(P<0.05)。在小鼠的整个生长周期内,单、双转基因与正常非转基因小鼠的体质量增长均没有显著的差异(P>0.05)。结论本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠,结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平,且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响,这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。
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关键词
双转基因小鼠
表达
超数排卵
显微注射
整合
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Keywords
double transgenic rabbits
expression
superovulation
microinjection
gene integration
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分类号
Q789
[生物学—分子生物学]
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