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多重TaqMan荧光定量PCR检测仔猪先天性震颤相关病毒方法的建立与应用
被引量：
2
1
作者
杨晓宇
陈世界
+3 位作者
林华
张婧
安微
朱玲
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第4期971-977,共7页
旨在研究能够快速、准确、灵敏地鉴别、诊断引起仔猪先天性震颤的猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒3型(Porcine circoviruses type 3,PCV-3)及猪捷申病毒1型...
旨在研究能够快速、准确、灵敏地鉴别、诊断引起仔猪先天性震颤的猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒3型(Porcine circoviruses type 3,PCV-3)及猪捷申病毒1型(Porcine teschovirus 1,PTV-1)的方法。通过对GenBank中登录的APPV的NS3基因序列、CSFV的E2基因序列、PCV-3的ORF2基因序列和PTV-1的VP1基因序列进行分析,设计针对4种病毒的特异性引物和TaqMan水解探针。通过对反应条件和反应程序进行优化,拟建立针对仔猪先天性震颤相关病毒的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,研究得到的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法能够特异性检测APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1,而与其他病原无交叉反应;该研究方法对APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1的最低检测量分别为1μl 9.2×10^2拷贝、48拷贝、56拷贝和17拷贝。重复性试验结果显示,组内、组间变异系数均小于2.10%,重复性和稳定性较为突出。用该方法对273份临床样品进行检测,结果显示,APPV、CSFV、PTV-1和PCV-3的阳性率分别为20.5%、2.9%、1.5%和10.6%,其中APPV、CSFV二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、PCV-3二者共同感染的检出率为4.4%,APPV、PTV-1二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、CSFV、PCV-3共同感染的检出率为1.1%。该检测方法操作简单、耗时短、不易对环境造成污染,检测结果灵敏、准确,基于该方法对四川地区仔猪先天性震颤相关病毒共感染情况进行的流行病学调查,可以为后期研究提供重要的数据基础。
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关键词
猪先天性震颤
猪非典型瘟病毒
猪瘟病毒
猪圆环病毒3型
猪捷申病毒1型
多重TaqMan荧光定量PCR检测
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职称材料
猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法的建立与应用
被引量：
4
2
作者
李原野
陈世界
+5 位作者
林华
张婧
安薇
陈瑛琪
张继宗
朱玲
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期389-396,共8页
为建立能灵敏、高效、准确诊断猪圆环病毒3型(PCV3)的检测方法,并运用该方法研究PCV3传播特性及组织嗜性,根据GenBank中PCV3 ORF2基因(MF631813.1)的核苷酸序列,设计合成PCV3的引物和探针,通过退火温度以及引物、探针用量和特异性等优化...
为建立能灵敏、高效、准确诊断猪圆环病毒3型(PCV3)的检测方法,并运用该方法研究PCV3传播特性及组织嗜性,根据GenBank中PCV3 ORF2基因(MF631813.1)的核苷酸序列,设计合成PCV3的引物和探针,通过退火温度以及引物、探针用量和特异性等优化,建立了PCV3微滴式数字PCR检测方法。试验结果表明建立的猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法具有较好高的灵敏性、重复性和特异性,最低能检测到1μl 16.35拷贝的质粒标准品,可用于猪圆环病毒3型的早期诊断。
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关键词
猪
圆环病毒3型
微滴式数字PCR
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职称材料
题名
多重TaqMan荧光定量PCR检测仔猪先天性震颤相关病毒方法的建立与应用
被引量：
2
1
作者
杨晓宇
陈世界
林华
张婧
安微
朱玲
机构
四川农业大学动物医学院
成都海关检验检疫技术中心
四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第4期971-977,共7页
基金
“十三五”国家重点研发计划项目(2018YFD0501102)
四川省科技支撑计划项目(2018NZ0150)
+1 种基金
四川省“十三五”育种攻关计划项目(2016NYZ0052)
国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项(CARS-SVDIP)。
文摘
旨在研究能够快速、准确、灵敏地鉴别、诊断引起仔猪先天性震颤的猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒3型(Porcine circoviruses type 3,PCV-3)及猪捷申病毒1型(Porcine teschovirus 1,PTV-1)的方法。通过对GenBank中登录的APPV的NS3基因序列、CSFV的E2基因序列、PCV-3的ORF2基因序列和PTV-1的VP1基因序列进行分析,设计针对4种病毒的特异性引物和TaqMan水解探针。通过对反应条件和反应程序进行优化,拟建立针对仔猪先天性震颤相关病毒的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,研究得到的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法能够特异性检测APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1,而与其他病原无交叉反应;该研究方法对APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1的最低检测量分别为1μl 9.2×10^2拷贝、48拷贝、56拷贝和17拷贝。重复性试验结果显示,组内、组间变异系数均小于2.10%,重复性和稳定性较为突出。用该方法对273份临床样品进行检测,结果显示,APPV、CSFV、PTV-1和PCV-3的阳性率分别为20.5%、2.9%、1.5%和10.6%,其中APPV、CSFV二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、PCV-3二者共同感染的检出率为4.4%,APPV、PTV-1二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、CSFV、PCV-3共同感染的检出率为1.1%。该检测方法操作简单、耗时短、不易对环境造成污染,检测结果灵敏、准确,基于该方法对四川地区仔猪先天性震颤相关病毒共感染情况进行的流行病学调查,可以为后期研究提供重要的数据基础。
关键词
猪先天性震颤
猪非典型瘟病毒
猪瘟病毒
猪圆环病毒3型
猪捷申病毒1型
多重TaqMan荧光定量PCR检测
Keywords
congenital tremor
atypical porcine pestivirus
classical swine fever virus
porcine circoviruses type 3
porcine teschovirus 1
multiple TaqMan fluorescence quantitative PCR
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法的建立与应用
被引量：
4
2
作者
李原野
陈世界
林华
张婧
安薇
陈瑛琪
张继宗
朱玲
机构
四川农业大学动物医学院
成都海关检验检疫技术中心
四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期389-396,共8页
基金
国家“十三五”重点研发计划项目(2018YFD0501102)
四川省重点研发项目(2018NZ0150)。
文摘
为建立能灵敏、高效、准确诊断猪圆环病毒3型(PCV3)的检测方法,并运用该方法研究PCV3传播特性及组织嗜性,根据GenBank中PCV3 ORF2基因(MF631813.1)的核苷酸序列,设计合成PCV3的引物和探针,通过退火温度以及引物、探针用量和特异性等优化,建立了PCV3微滴式数字PCR检测方法。试验结果表明建立的猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法具有较好高的灵敏性、重复性和特异性,最低能检测到1μl 16.35拷贝的质粒标准品,可用于猪圆环病毒3型的早期诊断。
关键词
猪
圆环病毒3型
微滴式数字PCR
Keywords
pig
circovirus type 3
droplet digital PCR
分类号
S852.65+9.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多重TaqMan荧光定量PCR检测仔猪先天性震颤相关病毒方法的建立与应用
杨晓宇
陈世界
林华
张婧
安微
朱玲
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2020
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法的建立与应用
李原野
陈世界
林华
张婧
安薇
陈瑛琪
张继宗
朱玲
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021
4
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