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Stargardt病Ⅲ型致病基因ELOVL4在脂肪酸代谢中的功能研究
1
作者
余曼
陈波
+1 位作者
张瑞帆
吴峥峥
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期712-717,共6页
背景研究证实，超长链脂肪酸延伸酶4（ELOVIA）基因是Stargardt病的致病基因，且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶，而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型（STGD3）的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL...
背景研究证实，超长链脂肪酸延伸酶4（ELOVIA）基因是Stargardt病的致病基因，且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶，而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型（STGD3）的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL4在STGD3发病中的作用及其与超长链脂肪酸代谢的关系有望对STGD3的治疗提供新的思路。目的探讨ELOVIA基因在STGD3发病和进展中的作用及机制。方法将腺病毒（Ad）转染重组病毒质粒36h的人胚肾293细胞（HEK293）以纯化病毒，构建携带ELOVIA基因和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒载体并转人培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PCI2），将培养的PCI2细胞分成PCI2组、PCI2＋Ad5一GFP组和PCI2＋Ad5一ELOVL4组，根据分组情况分别将Ad-GFP和Ad-ELOVL4病毒质粒按1×10～2×10。噬斑形成单位（pfu／m1）的滴度加入含质量分数2％胎牛血清（FBS）的细胞培养液转导24h，采用实时定量PCR法（qRT—PCR）定量分析各组细胞中ELOVIAmRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测细胞中ELOVL4蛋白的表达。分别在各组培养基中加入花生四烯酸（AA或20：4n6）、二十碳五烯酸（EPA或20：5n3）和二十二碳六烯酸（DHA或22：6n3），孵育48h后进行脂肪酸提取，通过气相色谱一质谱联用仪（GC-MS）分析各组细胞中超长链脂肪酸产物。结果PCI2＋Ad-ELOVL4组、PCI2＋Ad-GFP组和PCI2组间细胞中ELOVL4mRNA表达水平（ELOVIAmRNA／RPLl9mRNA）分别为0．833±0．138、0．027±0．002、0．024±O．002，3个组的总体差异有统计学意义（F=102．700，P=0．000），其中PCI2＋Ad5一ELOVL4组PCI2细胞中ELOVIAmRNA表达水平是PCI2组和PCI2＋Ad5-GFP组的30～40倍；Westernblot法检测结果证实，PCI2＋Ad5-ELOVIA-组PCI2细胞中ELOVL4蛋白呈阳性表达。GC-MS法检测发现PCI2＋Ad5-ELOVL4组PCI2细胞中有C28-C38多不饱和脂肪酸的合成，其中均以C34和C36多不饱和脂肪酸合成量最多。结论ELOVL4蛋白酶可催化C28-C38多不饱和脂肪酸的合成，这个结论为STGD3患者的治疗提供了新的思路。
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关键词
不饱和脂肪酸
生物合成
黄斑变性
遗传性
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株
气相色谱一质谱联用仪
免疫印迹法
实时定量PCR
ELOVL4基因
Stargardt黄斑营养不良
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职称材料
题名
Stargardt病Ⅲ型致病基因ELOVL4在脂肪酸代谢中的功能研究
1
作者
余曼
陈波
张瑞帆
吴峥峥
机构
成都四川省医学科学院四川省人民医院眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期712-717,共6页
文摘
背景研究证实，超长链脂肪酸延伸酶4（ELOVIA）基因是Stargardt病的致病基因，且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶，而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型（STGD3）的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL4在STGD3发病中的作用及其与超长链脂肪酸代谢的关系有望对STGD3的治疗提供新的思路。目的探讨ELOVIA基因在STGD3发病和进展中的作用及机制。方法将腺病毒（Ad）转染重组病毒质粒36h的人胚肾293细胞（HEK293）以纯化病毒，构建携带ELOVIA基因和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒载体并转人培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PCI2），将培养的PCI2细胞分成PCI2组、PCI2＋Ad5一GFP组和PCI2＋Ad5一ELOVL4组，根据分组情况分别将Ad-GFP和Ad-ELOVL4病毒质粒按1×10～2×10。噬斑形成单位（pfu／m1）的滴度加入含质量分数2％胎牛血清（FBS）的细胞培养液转导24h，采用实时定量PCR法（qRT—PCR）定量分析各组细胞中ELOVIAmRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测细胞中ELOVL4蛋白的表达。分别在各组培养基中加入花生四烯酸（AA或20：4n6）、二十碳五烯酸（EPA或20：5n3）和二十二碳六烯酸（DHA或22：6n3），孵育48h后进行脂肪酸提取，通过气相色谱一质谱联用仪（GC-MS）分析各组细胞中超长链脂肪酸产物。结果PCI2＋Ad-ELOVL4组、PCI2＋Ad-GFP组和PCI2组间细胞中ELOVL4mRNA表达水平（ELOVIAmRNA／RPLl9mRNA）分别为0．833±0．138、0．027±0．002、0．024±O．002，3个组的总体差异有统计学意义（F=102．700，P=0．000），其中PCI2＋Ad5一ELOVL4组PCI2细胞中ELOVIAmRNA表达水平是PCI2组和PCI2＋Ad5-GFP组的30～40倍；Westernblot法检测结果证实，PCI2＋Ad5-ELOVIA-组PCI2细胞中ELOVL4蛋白呈阳性表达。GC-MS法检测发现PCI2＋Ad5-ELOVL4组PCI2细胞中有C28-C38多不饱和脂肪酸的合成，其中均以C34和C36多不饱和脂肪酸合成量最多。结论ELOVL4蛋白酶可催化C28-C38多不饱和脂肪酸的合成，这个结论为STGD3患者的治疗提供了新的思路。
关键词
不饱和脂肪酸
生物合成
黄斑变性
遗传性
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株
气相色谱一质谱联用仪
免疫印迹法
实时定量PCR
ELOVL4基因
Stargardt黄斑营养不良
Keywords
Unsaturated fatty acid/biosynthesis
Macular degeneration/genetics
PC12 cell/rat
Gaschromatography-mass spectrometry
Blotting, western
Real-time quantitative PCR
ELOVL4 gene
Stargardtmacular dystrophy
分类号
R774.5 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
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被引量
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1
Stargardt病Ⅲ型致病基因ELOVL4在脂肪酸代谢中的功能研究
余曼
陈波
张瑞帆
吴峥峥
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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