藏药紫金标抗HSV-1作用的体内实验研究 被引量：3

1

作者 陈恬 贾文祥 +4 位作者 曾蔚 张再容 杜宝中 李晖 陈金瑞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期562-565,共4页

目的探讨藏药紫金标抗单纯疱疹病毒I型(HSV-1)的体内作用。方法对小鼠进行HSV-1的角膜局部接种、尾静脉全身接种两种HSV-1感染的动物模型,观察紫金标对疱疹性角膜炎和HSV-1全身感染的治疗作用。结果紫金标可减轻组织的病理损害,明显减... 目的探讨藏药紫金标抗单纯疱疹病毒I型(HSV-1)的体内作用。方法对小鼠进行HSV-1的角膜局部接种、尾静脉全身接种两种HSV-1感染的动物模型,观察紫金标对疱疹性角膜炎和HSV-1全身感染的治疗作用。结果紫金标可减轻组织的病理损害,明显减少或消除脏器内的病毒抗原,最大无毒剂量(0.3g/kg/d)的紫金标对HSV-1有明显的对抗作用,其效果与临床用的抗病毒药物ACV近似;紫金标对疱疹性角膜炎有治疗作用。结论紫金标有抗HSV-1的药效学作用,对疱疹性角膜炎和HSV-1全身感染有较明显的治疗作用。 展开更多

关键词 紫金标 单纯疱疹病毒Ⅰ型 抗病毒作用 体内实验

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗幽门螺杆菌粘附素HpaA卵黄抗体的制备 被引量：6

2

作者 张绍兰 杨致邦 毛小琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期265-267,共3页

目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pyloriadhesin A,rHpaA)抗原免疫22周龄罗曼鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体;经硫酸铵法初... 目的研制高效价特异性的抗幽门螺杆菌黏附素鸡卵黄抗体免疫球蛋白抗体。方法用纯化重组幽门螺杆菌黏附素(Helicobacter pyloriadhesin A,rHpaA)抗原免疫22周龄罗曼鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗幽门螺杆菌黏附素抗体;经硫酸铵法初步纯化浓缩后;以间接ELISA鉴定抗体效价及免疫学活性;采用Bradford法测定蛋白含量;并用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度。结果母鸡初次免疫第10d即有抗体产生,初次免疫后75d左右抗体效价超过1∶10000;最高可达为1∶12800。卵黄抗体经硫酸铵法纯化后,用SDS-PAGE分析,出现两条蛋白带,纯度达95%以上。其含量为10.56mg/ml蛋黄。结论本研究首次研制并鉴定抗黏附素卵黄抗体,开拓了我国预防幽门螺杆菌感染的新领域,分析了抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础。有望获得高效价、高产量的抗黏附素的IgY抗体(IgY-HpaA),为制备口服制剂开辟了广阔前景。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌黏附素 卵黄抗体(IgY) 罗曼鸡

在线阅读 下载PDF 职称材料

ureI和ctB-ureI真核质粒构建及表达分析 被引量：3

3

作者 王保宁 杨远 +3 位作者 邝玉 曹康 李明远 李婉宜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期764-766,770,共4页

目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确... 目的：构建ureI和ctB—ureI真核表达质粒并分析其在细胞的表达情况。方法：用pIRES-RD2真核表达载体分别在5’端连接ureI和ctB—ureI基因，经双酶切和测序鉴定正确后，相应质粒用脂质体转染HEK293T细胞，用荧光显微镜观察荧光标签，确定质粒的转染率；用人抗幽门螺旋杆菌抗体和马抗CtB抗体，采用免疫荧光和免疫酶组织化学等方法研究该两种真核表达质粒在细胞中目的蛋白表达情况。结果：成功构建了ureI和ctB—ureI的真核表达质粒pIRES—RD2-ureI和pIRES-RD2-ctB—ureI，用此质粒转染HEK293T细胞48～72h后，荧光显微镜显示该两种质粒的转染率约为80％；用免疫荧光和免疫酶组织化学方法表明了该两种基因均能在HEK293T细胞表达并有免疫反应性，表达的ureI主要分布在胞质内或细胞膜附近，ctB—ureI在CtB信号肽引导下分布于HEK293T细胞质、细胞膜附近以及细胞外。结论：成功构建了真核载体pIRES2-DsRed2-ureI和pIRES2-DsRed2-ctB—ureI，目的蛋白表达于HEK293T细胞胞质内并有一定免疫反应性。 展开更多

关键词 尿素膜通道蛋白(ureI) 霍乱毒素B亚单位与尿素膜通道蛋白融合(CtB-ureI) 真核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

HPV16 E5蛋白原核表达、鉴定及真核表达稳定株的筛选 被引量：2

4

作者 施桥发 魏晓丽 +5 位作者 李虹 王保宁 张卫东 蒋忠华 曹康 李明远 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-35,共5页

目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶... 目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG 对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westem blotting检测目标蛋白表达情况。将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切 pET32(+)／E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3．1(+)空质粒,构建pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒并对NIH3T3 细胞进行转染,最后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16 E5基因表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32／E5,在1 mmol／L IPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10％左右。真核表达质粒pcDNA3．1(+)／E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21 d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列。结论成功构建了pET32／E5原核和 pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 HPV16 原核表达 SDS-PAGE 免疫印迹 RT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

1株粘细菌CMC0606的分离纯化及其抗菌活性研究 被引量：4

5

作者 殷建华 代富英 李晋川 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第9期4445-4446,4449,共3页

[目的]对成都西岭雪山土壤中粘细菌进行分离鉴定,了解其发酵产物粗提物的抗菌活性。[方法]以滤纸为唯一碳源,得到1株粘细菌CMC0606;通过观察其形态及16SrDNA克隆与测序进行菌种鉴定;向其发酵液中加入大孔吸附树脂XAD-16,收获发酵产物粗... [目的]对成都西岭雪山土壤中粘细菌进行分离鉴定,了解其发酵产物粗提物的抗菌活性。[方法]以滤纸为唯一碳源,得到1株粘细菌CMC0606;通过观察其形态及16SrDNA克隆与测序进行菌种鉴定;向其发酵液中加入大孔吸附树脂XAD-16,收获发酵产物粗提物。[结果]菌株CMC0606被鉴定为珊瑚状珊瑚球菌Corallococcus coralloides CMC0606;其发酵产物粗提物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌及辣椒疫霉具有抑制作用。[结论]菌株CMC0606具有抗细菌和抗真菌的活性,尤其对植物致病菌辣椒疫霉抑制作用显著,具有潜在的研究和开发价值。 展开更多

关键词 粘细菌 珊瑚球菌 粗提物 抗菌活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

一个融合魏斯氏菌隐蔽质粒的序列分析 被引量：2

6

作者 王海娟 戴雨珂 +2 位作者 苏森森 王英 潘渠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期217-221,共5页

从融合魏斯氏菌(Weissella confusa QJ012)中发现一个隐蔽质粒(p QJ012),测序结果显示该质粒大小为1489 bp,碱基G+C含量为42.8%。BLAST结果显示该质粒的核苷酸序列同pJY33和pKLCA的同源性分别为93%、92%。ORF1编码一个282个氨基酸残基... 从融合魏斯氏菌(Weissella confusa QJ012)中发现一个隐蔽质粒(p QJ012),测序结果显示该质粒大小为1489 bp,碱基G+C含量为42.8%。BLAST结果显示该质粒的核苷酸序列同pJY33和pKLCA的同源性分别为93%、92%。ORF1编码一个282个氨基酸残基的复制蛋白(Rep),其氨基酸序列与质粒pJY33和pKLCA的同源性分别为91%、85%。根据复制蛋白、dso和sso的序列特征,推定pQJ012的复制方式为滚环复制,是滚环复制pT181家族成员。质粒pQJ012可能构建为良好的表达载体。 展开更多

关键词 融合魏斯氏菌 隐蔽质粒 序列分析 复制蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

卡介苗Hsp16.3基因突变株对小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响 被引量：2

7

作者 杨丽 师长宏 +2 位作者 赵勇 张彩琴 白冰 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第23期7-12,34,共7页

构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。... 构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。通过硫酸卡那霉素筛选,利用双酶切以及测序的方法,获得阳性重组质粒p KO-Hsp16.3。将阳性重组质粒p KO-Hsp16.3电转入BCG感受态细胞中,经过硫酸卡那霉素和蔗糖两次筛选,得到BCG Hsp16.3基因突变株。将筛选培养的BCG Hsp16.3突变株用于小鼠巨噬细胞的感染实验,并通过Western Blot和细胞免疫荧光技术对自噬相关蛋白的表达水平的变化进行观察及分析。成功获得重组质粒p KO-Hsp16.3的阳性克隆;电转化该重组质粒,并经过硫酸卡那霉素筛选和蔗糖反筛选,成功得到BCG Hsp16.3基因突变株。通过Western Blot以及免疫荧光分析发现,BCG Hsp16.3基因的突变株促进了小鼠巨噬细胞自噬的发生。 展开更多

关键词 热休克蛋白16..3 卡介苗 自噬 同源重组

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲型流感病毒M2基因真核表达载体的构建及序列分析 被引量：1

8

作者 杨靖 张卫东 +3 位作者 李明远 曹康 蒋忠华 李虹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期157-159,117,共4页

目的构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体并分析插入的M2基因序列。方法从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因。通过分子克隆技术将所扩增片段克隆入真核表达质粒载体pcD... 目的构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体并分析插入的M2基因序列。方法从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因。通过分子克隆技术将所扩增片段克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)。经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的M2基因序列进行分析。结果经双酶切、PCR及测序鉴定证实M2基因的真核表达载体构建成功。序列分析有4个氨基酸出现变异,提交Genbank进行Blast比对显示同源性97%(Genbank/NCBI AY768951)。结论M2四聚体蛋白具有H+通道功能,能够协助病毒与宿主细胞膜融合后释放RNP复合体,还能稳定HA蛋白的结构。M2蛋白的高度保守性和具有交叉保护能力特性使之成为新型的通用流感疫苗的突破口。该结果将为甲型流感病毒基因工程疫苗,通用疫苗和核酸疫苗的研究打下基础。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 M2基因 真核表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

溴代4-羟基硝基二苯醚类化合物的合成 被引量：1

9

作者 邹燕 唐雪 +4 位作者 代富英 罗娟 王玉良 王玉忠 陈恬 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期821-825,共5页

设计并合成了8个溴代4-羟基硝基二苯醚,其中6个化合物未见文献报道;所有这些化合物的结构均经1H NMR、HRMS、IR所证实;新化合物的结构避免了现有卤代2-羟基二苯醚杀菌剂在生产和使用过程中有可能产生高毒性二噁英类化合物的缺点。

关键词 溴代4-羟基硝基二苯醚 合成 杀菌剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

长角血蜱产卵量分布的函数分析 被引量：1

10

作者 李晋川 张有植 +4 位作者 潘渠 殷建华 程晓刚 陈卫中 杨川莉 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第5期724-726,共3页

目的研究硬蜱产卵分布的规律,积累硬蜱生物学基础资料。方法从西藏易贡采集长角血蜱,在自然室温玻璃管常规饲养,逐日记录产卵量,得到观察数据实际分布情况,利用SPSS13.0统计软件对样本数据进行分析,并拟合其分布函数。结果长角血蜱产卵... 目的研究硬蜱产卵分布的规律,积累硬蜱生物学基础资料。方法从西藏易贡采集长角血蜱,在自然室温玻璃管常规饲养,逐日记录产卵量,得到观察数据实际分布情况,利用SPSS13.0统计软件对样本数据进行分析,并拟合其分布函数。结果长角血蜱产卵分布服从指数分布。 展开更多

关键词 长角血蜱 产卵量 指数分布

在线阅读 下载PDF 职称材料

1株产琼脂酶细菌的分离鉴定及其胞外酶活性测定

11

作者 殷建华 邓雪柯 +1 位作者 代富英 陈恬 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期39-42,共4页

从四川省成都市青城山采集土壤,以琼脂作为唯一碳源,筛选到产琼脂酶细菌CMCK136;通过形态观察、生化鉴定、16S r DNA测序及序列分析鉴定其种属;随后测定了菌株CMCK136的胞外酶活性。菌株CMCK136被鉴定为芽胞杆菌属细菌,命名为Bacillus s... 从四川省成都市青城山采集土壤,以琼脂作为唯一碳源,筛选到产琼脂酶细菌CMCK136;通过形态观察、生化鉴定、16S r DNA测序及序列分析鉴定其种属;随后测定了菌株CMCK136的胞外酶活性。菌株CMCK136被鉴定为芽胞杆菌属细菌,命名为Bacillus sp.CMCK136。菌株CMCK136的胞外琼脂酶的最适酸碱度为p H 7.0,最适温度为35℃。菌株CMCK136是产琼脂酶细菌家族的新成员,该菌株的发现进一步提示芽胞杆菌属很可能蕴含有尚待开发的琼脂酶资源。 展开更多

关键词 琼脂酶 土壤细菌 分离 芽胞杆菌属

在线阅读 下载PDF 职称材料

阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶抗泡球蚴的效果 被引量：2

12

作者 冯祎 王芬 +2 位作者 刘许诺 王昕 叶彬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期690-693,709,共5页

目的探索阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,ABZSO)与聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)制备的阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶(ABZSO/PLGA-PEG-PLGA)抗泡球蚴的效果。方法应用ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(20μg/mL、40μg... 目的探索阿苯达唑亚砜(albendazole sulfoxide,ABZSO)与聚丙交酯乙交酯-聚乙二醇-聚丙交酯乙交酯(PLGA-PEG-PLGA)制备的阿苯达唑亚砜温敏型原位凝胶(ABZSO/PLGA-PEG-PLGA)抗泡球蚴的效果。方法应用ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)、ABZSO(40μg/mL)、PLGA-PEG-PLGA处理体外培养泡球蚴并统计原头节的存活率,采用扫描电镜观察各处理组泡球蚴或原头节形态变化;以各药物组治疗泡球蚴病大鼠动物模型后检查泡球蚴体积大小。结果药物处理体外培养泡球蚴18d时,ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(40μg/mL)原头节存活率显著低于ABZSO(40μg/mL)组;扫描电镜结果显示ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(80μg/mL)组的原头节结构被显著破坏;动物体内实验表明ABZSO/PLGA-PEG-PLGA(4mg/mL)组对抗泡球蚴效果比其他各药物组显著。结论 ABZSO/PLGA-PEG-PLGA具有抗泡球蚴的效果。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 泡球蚴病 阿苯达唑亚砜 温敏型原位凝胶

在线阅读 下载PDF 职称材料

HSV-1碱性脱氧核糖核酸酶AN在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定

13

作者 胡金 陈恬 +3 位作者 张文秋 张燕 王永洪 兰婉莹 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期261-266,共6页

目的在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂。方法以Gen Bank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,在不改变UL12氨基酸序列的情况下选... 目的在毕赤酵母中表达HSV-1复制的关键酶——碱性脱氧核糖核酸酶(alkaline deoxyribonuclease,AN),检测其核酸外切酶活性,从而进一步研究AN的抑制剂。方法以Gen Bank发表的HSV-1的17株UL12基因为模板,在不改变UL12氨基酸序列的情况下选择毕赤酵母偏好密码子,设计合成新的基因UL12-2,定向克隆进毕赤酵母表达载体p PIC9K中,经酶切和测序鉴定证明重组载体构建成功。线性化的重组载体p PIC9K-UL12-2,电转化至毕赤酵母菌GS115,用组氨酸缺陷平板选择His+转化子,并进行表型测定,筛选出高抗性转化子。采取甲醇诱导表达,对诱导表达96h的上清进行离子交换层析,SDS-PAGE检测经纯化的AN,并对AN进行核酸外切酶活性检测。结果重组质粒p PIC9K-UL12-2在GS115中成功分泌表达,表达产物纯化后经SDS-PAGE检测可见目的蛋白条带,目的蛋白显示出核酸外切酶活性。结论毕赤酵母成功表达了具有核酸外切酶活性的碱性核酸酶AN,为抗HSV-1新药的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 HSV-1 UL12基因 AN 毕赤酵母 酶活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

三氯新的结构改造及抑菌活性初探

14

作者 陈善莉 李建春 +2 位作者 吴凯群 陈恬 王玉良 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期332-335,共4页

本论文对三氯新的结构进行了改造,合成了四个未见文献报道的三氯羟基二苯醚衍生物,它们的结构均经红外、核磁、高分辨质谱证实。对新化合物进行了抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性的测试,其中有一个新化合物在20ug/mL浓度下对两种菌都有... 本论文对三氯新的结构进行了改造,合成了四个未见文献报道的三氯羟基二苯醚衍生物,它们的结构均经红外、核磁、高分辨质谱证实。对新化合物进行了抗金黄色葡萄球菌和大肠杆菌活性的测试,其中有一个新化合物在20ug/mL浓度下对两种菌都有活性。 展开更多

关键词 三氯新衍生物 合成 抑菌活性

在线阅读 下载PDF 职称材料