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Pythium sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 杨平 李敏惠 苏晓庆 《成都医学院学报》 CAS 2006年第1期5-8,共4页
目的克隆Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因。方法在已经克隆得到的Pythi- um sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶cDNA片段的基础上,首先通过PCR扩增得到与其相对应的基因组DNA片段,然后分别通过Mini基因组DNA文库法和Panhandle... 目的克隆Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因。方法在已经克隆得到的Pythi- um sp.GY1938菌株类枯草菌素蛋白酶cDNA片段的基础上,首先通过PCR扩增得到与其相对应的基因组DNA片段,然后分别通过Mini基因组DNA文库法和Panhandle PCR法扩增其上游和下游未知片段,最后通过PCR法扩增得到类枯草菌素蛋白酶基因片段。结果克隆得到1 519bp Pr1蛋白酶基因序列YP1977.DNAassist软件分析其中含有一个969bp的完整的开放阅读框,编码323个氨基酸,NCBI BlastX比对结果显示,该阅读框可能编码的氨基酸序列与多个物种的Pr1蛋白酶都具有较高的同源性。结论YP1977很可能是Pythium sp.CY1938菌株类枯草菌素蛋白酶Pr1基因的部分片段,但仍需要进一步通过构建表达系统加以验证。 展开更多
关键词 类枯草菌素蛋白酶 克隆 基因组文库 锅柄聚合酶链式反应
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二硫苏糖醇和β-巯基乙醇在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应 被引量:2
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作者 杨平 李敏惠 +4 位作者 常山 何建荣 罗兴艳 刘阳 邹强 《医学研究生学报》 CAS 2009年第9期916-919,共4页
目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品... 目的:二硫苏糖醇(DTT)和β-巯基乙醇(2-ME)是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术中最常用的2种还原剂。文中旨在观察这2种还原剂在SDS-PAGE电泳过程中的扩散效应及建立规避扩散效应的方法。方法:将含有还原剂的蛋白样品和未还原蛋白样品间隔上样进行电泳,通过观察未还原样品的电泳条带来判断是否受到邻近泳道还原剂的扩散影响。结果:还原剂DTT或2-ME可扩散到邻近泳道,使未还原蛋白样品发生部分还原,扩散效应的强弱与还原剂的含量成正相关。结论:SDS-PAGE电泳过程中DTT和2-ME均存在扩散效应,在同一块凝胶上同时分离还原蛋白和未还原蛋白时,至少应该在2个泳道间设置一空白泳道,以规避扩散效应。 展开更多
关键词 还原剂 扩散效应 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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可溶性固定化木瓜蛋白酶的制备及其性质研究 被引量:1
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作者 刘桦 林玲 +1 位作者 王玉明 何浪 《成都医学院学报》 CAS 2006年第1期37-40,43,共5页
目的制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶并对其部分酶学性质进行研究。方法将木瓜蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(AS-L)上制备得到水溶性固定化木瓜蛋白酶。在相同的条件下测定游离的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木... 目的制备一种可溶性固定化木瓜蛋白酶并对其部分酶学性质进行研究。方法将木瓜蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物羧甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(AS-L)上制备得到水溶性固定化木瓜蛋白酶。在相同的条件下测定游离的木瓜蛋白酶和水溶性固定化木瓜蛋白酶的活力,得到两种状态的酶的最适作用pH值和最适作用温度,再于它们各自的最适条件下测定活力,得到各自的Km值;在相同的条件下测定两种状态的酶的热稳定性、酸碱稳定性、低温稳定性和回收稳定性。结果游离木瓜蛋白酶和可溶性固定化木瓜蛋白酶的最适作用pH值分别为6.0和5.0,最适作用温度分别为60℃和70℃,Km值分别为2.53、3.07mg·ml^(-1);可溶性固定化木瓜蛋白酶在60%条件下,保温12h,仍有62%的活性;在4℃条件下,30d后活性保留达90%以上;在pH6.0时稳定性最好,在pH4.0~7.0范围内也比较稳定(相对活性>80%)。结论可溶性固定化木瓜蛋白酶能够在pH5.5以上的溶液中完全溶解,最适作用pH值范围变窄,最适作用温度和Km值升高;热稳定性和酸碱稳定性均明显增强。 展开更多
关键词 可溶性固定化酶 木瓜蛋白酶 酶学性质
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昆虫抗菌肽及其基因工程研究进展 被引量:1
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作者 李敏惠 杨平 《成都医学院学报》 CAS 2006年第1期66-70,76,共6页
昆虫抗菌肽是一类具有免疫效应的小分子多肽,它具有热稳定、抗菌谱广、无免疫原性、作用机制独特等特性,是昆虫能够抵御自然界中有害微生物侵染的重要因素。近年来,随着有关抗菌肽作用机理及功能研究的深入,其在医药领域的研究越来越引... 昆虫抗菌肽是一类具有免疫效应的小分子多肽,它具有热稳定、抗菌谱广、无免疫原性、作用机制独特等特性,是昆虫能够抵御自然界中有害微生物侵染的重要因素。近年来,随着有关抗菌肽作用机理及功能研究的深入,其在医药领域的研究越来越引起人们的关注。本文就昆虫抗菌肽的分类、生物功能、基因工程研究进展以及在医药领域的应用等作一综述。 展开更多
关键词 昆虫 抗菌肽 基因工程
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辣椒素提取及纯化的研究 被引量:3
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作者 舒丹 郑人源 +2 位作者 叶小金 罗琴 张涛 《成都医学院学报》 CAS 2007年第2期112-114,共3页
目的以干辣椒为原料,研究采用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱及其纯化的工艺。方法:用NaOH溶液进行粗提取,提取液处理后用壳聚糖树脂柱吸附,用乙醇洗脱得到辣椒素溶液,重结晶得到淡黄色针状辣椒素晶体。采用香兰素-亚硝酸钠比色法测定辣椒素... 目的以干辣椒为原料,研究采用壳聚糖树脂吸附提取辣椒碱及其纯化的工艺。方法:用NaOH溶液进行粗提取,提取液处理后用壳聚糖树脂柱吸附,用乙醇洗脱得到辣椒素溶液,重结晶得到淡黄色针状辣椒素晶体。采用香兰素-亚硝酸钠比色法测定辣椒素含量。结果:从干辣椒中提取得到的辣椒素收率为0.38%,辣椒素晶体纯度为91.20%。结论:采用该方法提取辣椒碱,方法操作简便,成本低廉,产率和纯度较高,结果较理想。 展开更多
关键词 辣椒素 提取 纯化 含量测定
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胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价 被引量:2
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作者 蒋洪娇 李敏惠 +8 位作者 邹强 王琦 吴永琴 吴啟洪 邓未 刘雯雯 杨艳玲 代爽 杨平 《成都医学院学报》 CAS 2012年第3期386-389,共4页
目的建立适用于检测人胱抑素C(Cystatin C)的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I:捕捉抗体IgG+检测... 目的建立适用于检测人胱抑素C(Cystatin C)的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+兔F(ab')2抗鸡酶标抗体;Ⅲ:捕捉抗体IgY+检测抗体IgG+抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL(阴性对照OD值为0.737),体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL(阴性对照OD值为0.313),体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL(阴性对照OD值为0.31)。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。 展开更多
关键词 IGY抗体 IGG抗体 胱抑素C 酶联免疫吸附试验
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